背景與目的:食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是中國(guó)食管癌中首要的病理亞型,我國(guó)食管癌發(fā)病率及死亡率均居世界首位。目前認(rèn)為食管鱗癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)涉及多個(gè)癌基因在時(shí)間和空間上的激活或/和抑癌基因的失活為基礎(chǔ)的多步驟過(guò)程。自吞噬作為II型程序性細(xì)胞死亡和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及對(duì)腫瘤細(xì)胞的化療敏感性等均具有極其重要的關(guān)系,為腫瘤治療提供了新的方向,已成為國(guó)際上腫瘤研究中的熱點(diǎn)之一。本課題分為三個(gè)部分,通過(guò)對(duì)自吞噬特異性標(biāo)志物Beclin 1在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展的變化及其對(duì)化療敏感性的機(jī)制作了研究,為自吞噬作為食管鱗癌治療的潛在靶點(diǎn)及其對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)提供理論依據(jù)。方法:免疫組化對(duì)不同食管鱗癌組織及癌旁正常組織中的Beclin 1及Bcl-2進(jìn)行定量分析;采用吖啶橙及MDC染色熒光顯微鏡對(duì)自吞噬進(jìn)行定性觀察;CCK8檢測(cè)細(xì)胞的增殖率;Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力;細(xì)胞轉(zhuǎn)染及小干擾RNA構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)和低表達(dá)Beclin1的細(xì)胞;Annexin V和PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期;Kaplan-Meier... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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正常食管組織及食管鱗

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文25圖3食管鱗癌組織及正常食管組織中Beclin1基因、蛋白水平的表達(dá)及其與臨床病理提特征的關(guān)系（A）食管鱗癌組織及正常食管組織中Beclin1mRNA基因水平的表達(dá)；（B）食管鱗癌組織中Beclin1蛋白水平的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系；a：正常食管組織，b：食管鱗癌組織，c：高-中分化食管鱗癌組織，d：低分化食管鱗癌組織，e：早期食管鱗癌組織（I/II期），f：中晚期食管鱗癌組織（III/IV期），g：淋巴結(jié)陰性食管鱗癌組織，h：淋巴結(jié)陽(yáng)性食管鱗癌組織Figure3.ExpressionofBeclin1mRNAandproteininESCCtumorandadjacentnormalesophagealtissues,anditsassociationwithclinicopathologicalfactors4.3Beclin1的表達(dá)調(diào)控EC9706細(xì)胞的侵襲力為了進(jìn)一步明確Beclin1是否可以促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的侵襲力，我們通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和小干擾RNA篩選獲得Beclin1高表達(dá)及低表達(dá)的EC9706細(xì)胞，并經(jīng)吖啶橙和WesternBlot定性定量驗(yàn)證（見(jiàn)圖4）后與正常對(duì)照組EC9706細(xì)胞一起進(jìn)行Transwell

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文26小室實(shí)驗(yàn)，觀察Beclin1表達(dá)升高和降低后食管鱗癌EC9706細(xì)胞的侵襲能力。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與正常食管鱗癌細(xì)胞EC9706組相比，Beclin1高表達(dá)組的侵襲細(xì)胞數(shù)目顯著減少（40.65±15.24vs243.32±38.23，P<0.01）；而B(niǎo)eclin1低表達(dá)組的侵襲細(xì)胞數(shù)目進(jìn)一步增加（382.36±45.7vs243.32±38.23，P<0.01）見(jiàn)表3圖4吖啶橙和WesternBlot定性定量驗(yàn)證Beclin1過(guò)表達(dá)及低表達(dá)A：WesternBlot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染和干擾就Beclin1過(guò)表達(dá)及低表達(dá)情況B:吖啶橙染色對(duì)自吞噬進(jìn)行定性檢測(cè)C：紅綠熒光比對(duì)吖啶橙染色后自噬泡進(jìn)行定量分析Figure4.ConfirmationofBeclin1overexpressionorknockdownABC


本文編號(hào)：3412841