目的:驗證靶向CD123的CAR-T的臨床前抗白血病效果及可控性,探索靶向CD123的CAR-T作為預(yù)處理方案治療復(fù)發(fā)難治性AML的臨床應(yīng)用方案并開展臨床試驗,探索CD123 CAR-T治療副反應(yīng)發(fā)生機(jī)制。方法:1.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測CAR表達(dá)效率,體外殺傷及CAR-T去除效率。進(jìn)行體外細(xì)胞因子釋放實驗并通過ELISA或CBA檢測。2.招募移植后復(fù)發(fā)FUS-ERG+AML患者1例,進(jìn)行供者來源CD123 CAR-T細(xì)胞作為預(yù)處理方案治療allo-HSCT。3.構(gòu)建體外共孵育模型模擬CD123 CAR-T接受刺激后釋放細(xì)胞因子水平以及對不同細(xì)胞CD123表達(dá)的影響。4.通過活細(xì)胞工作站觀察并記錄CD123 CAR-T對HUVEC在體外的殺傷。5.通過集落形成實驗評價CD123 CAR-T對動員后外周血CD34+細(xì)胞髓系及紅系分化潛能的影響。結(jié)果:一,1.制備CD123 CAR-T并通過體外功能實驗證明CD123 CAR-T對CD123+AML細(xì)胞系及原代細(xì)胞顯示出特異性殺傷并且IFN-γ釋放增多。2.低劑量DAC處理MOLM-13及THP-1細(xì)胞后增強(qiáng)CD123 CAR-T對其殺傷敏感性... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：159 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CD123CAR結(jié)構(gòu)示意圖

軍事科學(xué)院博士學(xué)位論文圖 1.2 分選后 CD3 陽性率及 CAR-T 轉(zhuǎn)染后 CAR 表達(dá)效率2.3 AML 腫瘤細(xì)胞系及原代 AML 細(xì)胞 CD123 表達(dá)檢測為了開展下一步的功能實驗，我們檢測了了 5 種 AML 細(xì)胞系以及原代 AML細(xì)胞。其中U937及K562為CD123陰性細(xì)胞，CD123陽性率分別為0.15%和0.30%KG-1a，MOLM-13，THP-1 及 AML-2 為 CD123 陽性，表達(dá)效率分別為 98.4%，97.9%99.8%和 90.1%（圖 1.3）。

圖 1.4 流式檢測 CD123 CAR-T 細(xì)胞對 CD123+ AML 細(xì)胞的殺傷作用兩樣本之間比較采用 t 檢驗，數(shù)據(jù)表示為 X ±SEM（n=3），*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001和****P<0.0001。（2）LDH 釋放實驗同樣，我們進(jìn)行了 4 小時 LDH 釋放試驗對 CAR-T 的殺傷功能進(jìn)行驗證。對CD123 陰性 U937 細(xì)胞的沒有顯示特異性殺傷，效靶比從低到高分別為-3.068±4.016vs -7.139±3.402、-6.024±3.626 vs -2.119±1.729，對 CD123 陽性 AML 細(xì)胞 KG-1a，MOLM-13 和 CD123 陰性 U937 細(xì)胞的殺傷從效靶比從低到高分別為-2.319±4.450vs -2.019±2.580、19.294±2.281 vs 6.132±0.337；14.427±2.453 vs -1.347±5.627、91.849±14.090 vs 3.415±4.521（圖 1.5）。CD123 CAR-T 顯示出對 CD123+ AML 細(xì)胞 KG-1a 和 MOLM-13 殺傷更強(qiáng)的趨勢。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]rhIFN-γ對白血病K562細(xì)胞CD123表達(dá)的影響[J]. 呂超紹,張進(jìn)萍,宋建新,蔣雅先,沈濤,楊同華,撒亞蓮.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(08)
[2]人血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立[J]. 張淑雅,陳昕,單園園,顏貝,蘆曉紅,裴秀英.  寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2013(11)



本文編號：3402024