發(fā)布時(shí)間：2021-09-15 08:48

　　背景頭癬是頭皮及頭發(fā)的淺部真菌感染,主要通過(guò)直接或間接接觸患者或患病的動(dòng)物傳染。頭癬一度受到控制,但由于近年來(lái)人們生活方式的改變,飼養(yǎng)寵物的流行,抗生素的濫用、皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑的使用使得頭癬的發(fā)病率逐年增加。目前國(guó)內(nèi)外流行病學(xué)顯示頭癬的主要致病菌為犬小孢子菌。頭癬好發(fā)于學(xué)齡前兒童,感染初期為無(wú)癥狀,可通過(guò)公用物品如枕頭、梳子等傳染,因而易出現(xiàn)擴(kuò)散傳播等問(wèn)題,且預(yù)后因頭皮化膿感染易形成瘢痕,或因發(fā)根毛囊破壞而導(dǎo)致永久性禿發(fā),嚴(yán)重危害患兒的身心健康。目前頭癬病因尚不清楚,且無(wú)相應(yīng)的防預(yù)措施。因此研究頭癬的致病因子,尋找有效的疫苗預(yù)防頭癬的發(fā)生意義重大。大量相關(guān)數(shù)據(jù)顯示頭癬的發(fā)病與犬小孢子菌分泌的蛋白酶有關(guān),包括角蛋白酶、彈性蛋白酶、膠原酶、酯酶、神經(jīng)酰胺酶等,其中角蛋白酶的致病性比較明確。前期課題組根據(jù)頭癬好發(fā)于兒童這一臨床現(xiàn)象,設(shè)計(jì)出以成人頭皮組織、兒童頭皮組織及兒童光滑皮膚為不同誘導(dǎo)底物,比較犬小孢子菌產(chǎn)生的差異基因,從而尋找頭癬的致病因子,其中篩選出基因片段之一為FSH1基因。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)得出 FSH1基因在兒童頭皮組織培養(yǎng)基中較光滑皮膚組織培養(yǎng)基中呈高度上調(diào)表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

圖２犬小孢子菌ＩＴＳ區(qū)ＰＣＲ?

大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文??ｂｐ?Ｍ標(biāo)準(zhǔn)野生?ｂｐ?Ｍ標(biāo)準(zhǔn)野生??■?■??２０００＾＾＾＾＾＾！?２０００?■??７５０?７５０??５００?５００??１００??圖２犬小孢子菌ＩＴＳ區(qū)ＰＣＲ?圖３犬小孢子菌ＮＴＳ區(qū)ＰＣＲ??擴(kuò)增產(chǎn)物（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００）?擴(kuò)增產(chǎn)物（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００）??１．２犬小孢子菌野生株及標(biāo)準(zhǔn)株ＮＴＳ鑒定??以提取的犬小孢子菌總ＤＮＡ為模板，利用真菌鑒定通用引物ＩＧＳＬ與ＩＧＳＲ??對(duì)犬小孢子菌野生株及標(biāo)準(zhǔn)株的ＮＴＳ區(qū)序列進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂凝膠電泳??檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖３。由圖３可以看出，犬小孢子菌標(biāo)準(zhǔn)株及野生株ＮＴＳ區(qū)ＰＣＲ擴(kuò)增??后的帶型一致。??２．犬小孢子菌ＦＳＨ１基因全長(zhǎng)ｃＤＮＡ的克隆及序列分析??２．１犬小孢子菌總ＲＮＡ提取??提取犬小孢子菌標(biāo)準(zhǔn)株的總ＲＮＡ，用紫外分光光度計(jì)測(cè)得的ＯＤ２６０與ＯＤ２８０??的比值，約為１．６，表明ＲＮＡ的純度較好。ＲＮＡ電泳結(jié)果２８Ｓ與１８Ｓ條帶的亮度比值??為２：１，５Ｓ的亮度較弱（如圖４所示），表明所提取的總ＲＮＡ完整．降解少。??２．２?３’?ＲＡＣＥ和Ｙ?ＲＡＣＥ擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)??根據(jù)測(cè)序結(jié)果，設(shè)計(jì)ＲＡＣＥ反應(yīng)的特異引物，對(duì)獲得的３’ＲＡＣＥ和５’ＲＡＣＥ序列??進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。結(jié)果如圖５和６所示，ＦＳＨ１基因的３’ＲＡＣＥ和５’ＲＡＣＥ??ＰＣＲ序列長(zhǎng)度分別約為７３０?ｂｐ和４５０?ｂｐ。??３９??

大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文??２．３?ＦＳＨ１基因３’ＲＡＣＥ和５’ＲＡＣＥ擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序與全長(zhǎng)序列驗(yàn)證??３’ＲＡＣＥ和５’ＲＡＣＥ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)純化、克壟測(cè)序，得到３’ＲＡＣＥ和５’ＲＡＣＥ??序列長(zhǎng)度分別為４６６?ｂｐ和１９６?ｂｐ，加上已知ＦＳＨ１的基因片段，總長(zhǎng)９４５?ｂｐ。通過(guò)??ＲＡＣＥ驗(yàn)證，獲得ＦＳＨ１基因全長(zhǎng)ｃＤＮＡ序列如圖７所示，總長(zhǎng)度為約８２０ｂｐ，可以證??明５?’ＲＡＣＥ和３?’ＲＡＣＥ產(chǎn)物來(lái)源于一條ｍＲＮＡ鏈且包含ＣＤＳ大多數(shù)序列。??Ｍ?１?２?３?４?Ｍ?１?２??＾?７５０??２５０?５００??２５０??１００圍??圖４犬小孢子菌總ＲＮＡ鑒定圖?圖５?３’端第１輪ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物??（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００；?１－４：總ＲＮＡ）?（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００；?１：?３’端ＰＣＲ??產(chǎn)物；２：陰性對(duì)照）??２０００１??２００〇ｌ?Ｉ．??７５０?５００?Ｉ??５００?２５０?Ｉ??２５０?１００??１００??圖６?５’端第１輪ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物?圖７?ＲＡＣＥ序列驗(yàn)證的全長(zhǎng)ＰＣＲ擴(kuò)增??（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００；?１：?５’端ＰＣＲ產(chǎn)物（Ｍ：標(biāo)準(zhǔn)參照物ＤＬ２０００；?１：全??產(chǎn)物；２：陰性對(duì)照）?長(zhǎng)ＰＣＲ產(chǎn)物；２：陰性對(duì)照）??４０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]PQ-LRP基因沉默對(duì)犬小孢子菌生長(zhǎng)及毒力的影響及手術(shù)治療皮膚淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)癥1例[D]. 張芳芳.大連醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]RNA干擾技術(shù)對(duì)犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究及面部線狀紅斑狼瘡1例[D]. 陳昕宜.大連醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]犬小孢子菌生物學(xué)性狀及基因分型研究[D]. 錢靖.蘭州大學(xué) 2008



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