研究背景:結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病,目前仍然是全球十大死因之一。HIV感染作為增加結(jié)核病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的重要危險(xiǎn)因素,與結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。長期以來,HIV感染引起的CD4 T細(xì)胞耗竭一直被認(rèn)為是HIV增加結(jié)核病發(fā)生的主要原因。然而,在伴有正常數(shù)量CD4 T細(xì)胞的HIV/AIDS患者中,結(jié)核病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)依然顯著增加。除了CD4 T細(xì)胞之外,HIV感染可以引起巨噬細(xì)胞功能改變。巨噬細(xì)胞是機(jī)體清除入侵結(jié)核菌的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞,其功能和命運(yùn)與結(jié)核病的轉(zhuǎn)歸密不可分。HIV感染如何損壞巨噬細(xì)胞抗結(jié)核功能仍需探討。另一方面,HIV感染可誘導(dǎo)多種自身抗體的產(chǎn)生。20%-40%HIV/AIDS患者血清可檢測到紅細(xì)胞抗體自身抗體,后者可致敏紅細(xì)胞,加速其在巨噬細(xì)胞中的破壞和清除,該過程也被稱為噬紅細(xì)胞作用（erythrophagocytosis）。我們推測,紅細(xì)胞自身抗體介導(dǎo)巨噬細(xì)胞噬紅細(xì)胞作用,損壞巨噬細(xì)胞抗結(jié)核免疫,進(jìn)而增加結(jié)核病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。研究目的:1.明確HIV/AIDS患者紅細(xì)胞自身抗體與結(jié)核病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系;2.明確紅細(xì)胞自身抗體介導(dǎo)的噬紅細(xì)胞作用對巨噬細(xì)胞抗結(jié)核活性的影響;3.闡明噬... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖Ⅱ.自身免疫性溶血性貧血的發(fā)病機(jī)制及DAT檢測原理

廣州醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文42借助PKH26染料，RBC均可被熒光素均勻、充分的標(biāo)記，標(biāo)記效率高達(dá)99.5%（圖2-1A）。RBC通過與PMA誘導(dǎo)后的THP-1巨噬細(xì)胞共孵育6h后，裂解未被吞噬的RBC，流式細(xì)胞儀檢測巨噬細(xì)胞RBC吞噬率。結(jié)果顯示，在RBC:巨噬細(xì)胞比例為10:1和100:1的條件下，巨噬細(xì)胞對DAT陽性HIV/AIDS患者來源的RBC吞噬率均高于DAT陰性HIV/AIDS患者和健康對照者，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均有p<0.0001）；DAT陰性HIV/AIDS患者RBC吞噬率與健康對照者相比，無顯著性差異（圖2-1B和C）。我們還發(fā)現(xiàn)，HIV/AIDS合并TB與否對RBC吞噬率無影響，可能與病例數(shù)過少有關(guān)（圖2-1D）。圖2-1DAT陽性HIV/AIDS患者來源的紅細(xì)胞更易被巨噬細(xì)胞吞噬Figure2-1.RBCsfrompatientswithHIVwithapositivedirectantiglobulintest(DAT)resultincreaseerythrophagocytosisbymacrophages.(A)RBCslabeledwithPKH26wereassessedbyconfocalfluorescencemicroscopyandflowcytometry(labelingyield,99.6%).(B)ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=33)andpatientswithHIVwithnegative(n=36)andpositive(n=11)DATresultsuponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1

第二章HIV/AIDS患者紅細(xì)胞自身抗體介導(dǎo)的噬紅細(xì)胞作用抑制巨噬細(xì)胞抗結(jié)核活性43macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1revealedbyforwardscatter(FSC)dataandquantifiedbyflowcytometry.(C)and(D)ExvivophagocytosisofRBCsfromtheindicatedsubjectswasstratifiedbyDATresultsandTBstatus,respectively.****p<0.0001.此外，我們納入的8例DAT均為陰性TB患者，采用同樣的方法檢測其RBC被巨噬細(xì)胞吞噬的情況，結(jié)果顯示，巨噬細(xì)胞對TB患者和健康對照者來源的RBC吞噬率無顯著性差異（p>0.05,圖2-2）。這些結(jié)果提示，在HIV/AIDS患者中，僅RBC自身抗體的出現(xiàn)與RBC吞噬率有關(guān)。圖2-2巨噬細(xì)胞對TB患者和健康對照者來源的RBC吞噬率無差異Figure2-2.Thereisnodifferenceinmacrophage-mediatedphagocytosisofRBCsfrompatientswithTBandhealthycontrols.ExvivophagocytosisofPKH26-labeledRBCsfromhealthydonors(n=8)andpatientswithTB(n=8)uponincubationwithPMA-differentiatedTHP-1macrophagesfor6hatRBC/macrophage(R/M)ratiosof10:1and100:1quantifiedbyflowcytometry.2.2.2HIV/AIDS患者紅細(xì)胞吞噬率與DAT結(jié)果呈正相關(guān)DAT結(jié)果可依據(jù)RBC凝集程度分為-、1+、2+、3+和4+，凝集程度越強(qiáng)，提示致敏RBC表面吸附自身抗體量越多（圖2-3A）。11例DAT陽性HIV/AIDS患者中，1+、2+和3+病例數(shù)分別為7、3和1例。盡管病例數(shù)少，統(tǒng)計(jì)結(jié)果仍能顯示，在RBC:巨噬細(xì)胞比例為10:1和100:1的條件下，RBC吞噬率均與DAT結(jié)果呈顯著正相關(guān)（R=0.99,p=0.0012;R=0.99,p=0.0025,圖2-3B）。該結(jié)果符合預(yù)期，即HIV/AIDS患者體內(nèi)，RBC自身抗體可致敏RBC，引起巨噬細(xì)胞對RBC吞噬作用增強(qiáng)。


本文編號：3371286