第一部分AngⅡ誘導非小細胞肺癌細胞上皮間質轉化及機制研究目的:轉移和侵襲已成為惡性腫瘤的基本特征和重要標志,上皮間質轉化（EMT）已被證實可促進腫瘤細胞的局部浸潤和癌癥的全身散播。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）是體內(nèi)一個重要的神經(jīng)-體液調節(jié)系統(tǒng),其中血管緊張素II（Ang II）是其主要的效應分子。近年來發(fā)現(xiàn)Ang II在局部組織,特別是腫瘤組織中表達明顯,已被證實對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移起到重要作用,但其對腫瘤細胞EMT的作用則鮮有研究。目前RAS在腫瘤中的相關研究主要集中于血管緊張素轉化酶抑制劑（ACEI）和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）對腫瘤細胞的影響,而AngⅡ對腫瘤細胞直接影響的研究較少。因此,本研究探討AngⅡ對非小細胞肺癌（NSCLC）細胞EMT的影響和相關作用機制,旨在從新的角度完善RAS在腫瘤領域的研究,以期為腫瘤治療提供新的理論基礎和可能的治療策略。方法:以A549細胞和H460細胞為研究對象開展如下實驗:（1）采用劃痕實驗和Transwell遷移實驗檢測細胞的遷移運動能力;（2）采用Transwell小室侵襲實驗檢測細胞的侵襲能力;（3）采用Western b... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    綜述1 腎素-血管緊張素系統(tǒng)與肺癌關系研究進展
        1.1 腎素-血管緊張素系統(tǒng)
        1.2 血管緊張素合成酶與肺癌的關系
        1.3 AngⅡ與肺癌細胞生長有關
        1.4 ACEI和 ARBS對肺癌發(fā)生的影響
        1.5 ACEI和 ARBs對肺腫瘤的影響血管生成
        1.6 Ang(1-7)和肺癌
        1.7 展望
    綜述2 SIRT1:抑制癌細胞上皮間質轉化的潛在靶點
第2章 AngⅡ對非小細胞肺癌EMT的影響
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細胞株
        2.2.2 實驗動物及飼料
        2.2.3 主要試劑與儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        2.3.2 形態(tài)學觀察
        2.3.3 細胞劃痕實驗
        2.3.4 Transwell遷移實驗
        2.3.5 EMT相關基因RNA水平(qRT-PCR)檢測
        2.3.6 Western blot檢測
        2.3.7 裸鼠體內(nèi)A549 細胞尾靜脈肺轉移實驗
        2.3.8 HE染色
        2.3.9 統(tǒng)計方法
    2.4 實驗結果
        2.4.1 Ang Ⅱ對 NSCLC細胞遷移能力的影響
        2.4.2 Ang Ⅱ對 NSCLC細胞侵襲能力的影響
        2.4.3 Ang Ⅱ對非小細胞肺癌EMT的影響
        2.4.4 裸鼠尾靜脈轉移實驗檢測AngⅡ對A549 細胞體內(nèi)轉移的影響
    2.5 討論
    2.6 小結
第3章 AngⅡ誘導A549 細胞EMT機制研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞株
        3.2.2 主要試劑與儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        3.3.2 細胞劃痕實驗
        3.3.3 Transwell遷移實驗
        3.3.4 TGF-β1及EMT相關基因mRNA水平(qRT-PCR)檢測
        3.3.5 Western Blot檢測
        3.3.6 免疫熒光實驗
        3.3.7 培養(yǎng)液上清中TGF-β1 含量檢測
        3.3.8 統(tǒng)計方法
    3.4 實驗結果
        3.4.1 Ang Ⅱ對 A549 細胞中TGF-β1 表達的影響
        3.4.2 TGF-β受體拮抗劑(SB431542)對Ang Ⅱ誘導的A549 細胞EMT及遷移能力的影響
        3.4.3 Ang Ⅱ對A549 細胞中p-Smad2 表達的影響
        3.4.4 Ang Ⅱ對A549 細胞中SIRT1 表達的影響
        3.4.5 SIRT1 抑制劑(EX527)對Ang Ⅱ誘導的A549 細胞EMT及遷移能力的影響
        3.4.6 SB431542 對Ang Ⅱ誘導EMT過程中SIRT1 蛋白表達的影響
    3.5 討論
    3.6 小結
第4章 PPD抑制Ang Ⅱ誘導A549 細胞EMT
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞株
        4.2.2 實驗動物及飼料
        4.2.3 主要試劑與儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        4.3.2 細胞劃痕實驗
        4.3.3 Transwell實驗
        4.3.5 Western Blot檢測
        4.3.6 免疫熒光實驗
        4.3.7 EMT相關mRNA水平(qRT-PCR)檢測
        4.3.8 裸鼠體內(nèi)A549 細胞尾靜脈轉移實驗
        4.3.9 HE染色
        4.3.10 統(tǒng)計方法
    4.4 實驗結果
        4.4.1 PPD對Ang Ⅱ誘導的A549 細胞遷移能力的影響
        4.4.2 PPD對Ang Ⅱ誘導的A549 細胞EMT的影響
        4.4.3 PPD對Ang Ⅱ誘導的A549 細胞裸鼠轉移瘤形成的影響
    4.5 討論
    4.6 小結
第5章 PPD抑制Ang Ⅱ誘導A549 細胞EMT機制研究
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 細胞株
        5.2.2 主要試劑與儀器
            5.2.2.1 藥品與試劑
            5.2.2.2 抗體
            5.2.2.3 qRT-PCR引物
            5.2.2.4 主要儀器設備
    5.3 實驗方法
        5.3.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        5.3.2 細胞劃痕實驗
        5.3.3 Transwell遷移實驗
        5.3.4 EMT相關基因RNA水平(QPCR)檢測
        5.3.5 Western Blot檢測
        5.3.6 SIRT1 過表達質粒的轉染
        5.3.7 培養(yǎng)液上清中TGF-β1 含量檢測
        5.3.8 統(tǒng)計方法
    5.4 實驗結果
        5.4.1 PPD抑制Ang Ⅱ誘導的A549 細胞自分泌TGF-β1
        5.4.2 PPD抑制Ang Ⅱ誘導的A549 細胞SIRT1上調
    5.5 討論
    5.6 小結
第6章 結論
本論文創(chuàng)新性
參考文獻
作者簡介及在讀期間取得科研成果
致謝



本文編號：3367758