發(fā)布時(shí)間：2021-08-26 13:17

　　目的:2018年諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)?lì)C發(fā)給了將抑制免疫負(fù)向調(diào)控用于腫瘤治療的研究,讓腫瘤免疫治療成為時(shí)代的新寵。當(dāng)前腫瘤免疫療法主要有針對(duì)免疫檢查點(diǎn)的PD-1或者CTLA-4抗體、CAR-T細(xì)胞等,這些均是以激活T細(xì)胞誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答為基礎(chǔ)。而腫瘤免疫微環(huán)境中存在著大量的固有免疫細(xì)胞,它們能第一時(shí)間識(shí)別和攻擊腫瘤細(xì)胞,對(duì)這些固有免疫細(xì)胞進(jìn)行研究有助于深入認(rèn)識(shí)腫瘤免疫抑制,開發(fā)新型免疫治療方式。這其中以巨噬細(xì)胞為代表,極其眾多的巨噬細(xì)胞在腫瘤免疫微環(huán)境中不但不發(fā)揮其原始的吞噬腫瘤細(xì)胞、提呈腫瘤抗原以及殺傷腫瘤細(xì)胞的作用,反而被腫瘤細(xì)胞教育成為了所謂的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及免疫逃逸。因此,靶向M2型TAMs,使其成為抗腫瘤的M1型巨噬細(xì)胞,重塑腫瘤免疫微環(huán)境,促進(jìn)T細(xì)胞等的抗腫瘤免疫,將為腫瘤免疫治療開辟一條新的道路。方法:體外培養(yǎng)小鼠骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞,分別運(yùn)用LPS/IFN-γ極化誘導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞、IL-4極化誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞,分析兩類巨噬細(xì)胞溶酶體pH值、數(shù)量等的差異;選取溶酶體特異性... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?（Ａ）每天腹腔注射ＰＢＳ或者７５?ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ治療Ｃ５７ＢＬ／６皮下荷瘤??（Ｂ１６黑色素瘤）小鼠，治療兩周，測(cè)量腫瘤大�。ǎ睿剑叮�?（Ｂ）每天腹腔注射??？８５或者７５〇＾／１＾０（＾治療０５７：８］７６皮下荷瘤（８１６黑色素瘤）小鼠，治療兩??

激以及添加小鼠ＩＬ－２１０ｎｇ／ｍＬ），分別加入０、５沖４、ｌｔＨｉＭＣＱ進(jìn)行處理，７２小??時(shí)后，流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示，５ｐＭＣＱ組ＣＦＳＥ比例與對(duì)照組基本一致，而??ｌＯ＾ＭＣＱ組ＣＦＳＥ比例低于對(duì)照組（圖３Ａ）。另外，我們分別給予正常野生型??Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔注射ＰＢＳ和７５ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ，２４小時(shí)后處死小鼠，流式細(xì)胞技??術(shù)分析小鼠脾臟ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞的凋亡、活化、失能以及溶酶體狀態(tài)。結(jié)果顯示，??ＣＱ處理組Ｔ細(xì)胞活力與ＰＢＳ組沒有差別（圖３Ｂ）；?ＣＤ６９＋細(xì)胞占ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞??比例以及ＣＤ１３７＋細(xì)胞占ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞比例沒有差別（圖３Ｃ），ＰＤ－１＋細(xì)胞占ＣＤ３＋??Ｔ細(xì)胞比例以及ＣＴＬＡ－４＋細(xì)胞占ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞比例沒有差別（圖３Ｄ）；?ＣＤ１０７ａ＋??細(xì)胞占ＣＤ３＋Ｔ細(xì)胞比例也沒有差別（圖３Ｅ）。以上結(jié)果提示ＣＱ不直接影響Ｔ??細(xì)胞增殖，升高濃度甚至?xí)种疲约?xì)胞增殖；腹腔注射ＣＱ也不會(huì)影響小鼠Ｔ??細(xì)胞的凋亡、活化、失能以及溶酶體狀態(tài)。這說(shuō)明ＣＱ很可能不會(huì)通過(guò)直接激??活Ｔ細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤免疫效應(yīng)。??４４??

膦酸鹽脂質(zhì)體以清除巨噬細(xì)胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治療，測(cè)量腫瘤大小。兩??周后，結(jié)果顯示，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腫瘤體積與單獨(dú)用氯??膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差別（圖５Ｃ）。另外，我們對(duì)建立了?Ｈ２２肌肉瘤模型??的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體以清除巨噬細(xì)胞，再用ＣＱ（７５ｍｇ／ｋｇ）??治療。一周后，測(cè)量腫瘤重量，結(jié)果顯示，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治??療組腫瘤重量與單獨(dú)用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差別（圖５Ｄ）。除以上兩種??動(dòng)物模型外，我們對(duì)建立了?Ｈ２２腹水模型的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸鹽脂??質(zhì)體以清除巨噬細(xì)胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治療。一周后，測(cè)量小鼠腹水體積??和腹水中腫瘤細(xì)胞數(shù)量（流式細(xì)胞技術(shù)計(jì)數(shù)ＣＤ４５－細(xì)胞）。結(jié)果顯示，氯膦酸鹽??脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腹水體積與單獨(dú)用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差??別（圖５Ｅ），同時(shí)，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腹水中腫瘤細(xì)胞數(shù)??量與單獨(dú)用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組也沒有差別（圖５Ｆ）。以上動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示，巨??噬細(xì)胞參與了?ＣＱ誘導(dǎo)的抗腫瘤作用。??Ａ?Ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｂ?Ｇａｔｅ?ｏｎ?ＣＤ３＊?ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｃ?＾－５．０－ｊ?＾?Ｃｉ〇＋ｃｑ?ｒ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?名一￣?Ｃ丨０?ｒ??Ｏ?ｏ?ＣＱ?／??ｂ?＇?１．０３％?０．０７％?＇６７．３％?７２．３％?▽?＋?ｐｒｑ?／?：??＿＿?ｆ?隊(duì)－ｒ?Ｊ??ｊ?；?１??：?Ｗ???ｊ?�。�?


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