目的:2018年諾貝爾生理學與醫(yī)學獎頒發(fā)給了將抑制免疫負向調(diào)控用于腫瘤治療的研究,讓腫瘤免疫治療成為時代的新寵。當前腫瘤免疫療法主要有針對免疫檢查點的PD-1或者CTLA-4抗體、CAR-T細胞等,這些均是以激活T細胞誘導適應性免疫應答為基礎。而腫瘤免疫微環(huán)境中存在著大量的固有免疫細胞,它們能第一時間識別和攻擊腫瘤細胞,對這些固有免疫細胞進行研究有助于深入認識腫瘤免疫抑制,開發(fā)新型免疫治療方式。這其中以巨噬細胞為代表,極其眾多的巨噬細胞在腫瘤免疫微環(huán)境中不但不發(fā)揮其原始的吞噬腫瘤細胞、提呈腫瘤抗原以及殺傷腫瘤細胞的作用,反而被腫瘤細胞教育成為了所謂的M2型腫瘤相關巨噬細胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）,促進腫瘤生長、轉(zhuǎn)移以及免疫逃逸。因此,靶向M2型TAMs,使其成為抗腫瘤的M1型巨噬細胞,重塑腫瘤免疫微環(huán)境,促進T細胞等的抗腫瘤免疫,將為腫瘤免疫治療開辟一條新的道路。方法:體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源的巨噬細胞,分別運用LPS/IFN-γ極化誘導M1型巨噬細胞、IL-4極化誘導M2型巨噬細胞,分析兩類巨噬細胞溶酶體pH值、數(shù)量等的差異;選取溶酶體特異性... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?（Ａ）每天腹腔注射ＰＢＳ或者７５?ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ治療Ｃ５７ＢＬ／６皮下荷瘤??（Ｂ１６黑色素瘤）小鼠，治療兩周，測量腫瘤大�。ǎ睿剑叮�；?（Ｂ）每天腹腔注射??？８５或者７５〇＾／１＾０（＾治療０５７：８］７６皮下荷瘤（８１６黑色素瘤）小鼠，治療兩??

激以及添加小鼠ＩＬ－２１０ｎｇ／ｍＬ），分別加入０、５沖４、ｌｔＨｉＭＣＱ進行處理，７２小??時后，流式細胞技術結(jié)果顯示，５ｐＭＣＱ組ＣＦＳＥ比例與對照組基本一致，而??ｌＯ＾ＭＣＱ組ＣＦＳＥ比例低于對照組（圖３Ａ）。另外，我們分別給予正常野生型??Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔注射ＰＢＳ和７５ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ，２４小時后處死小鼠，流式細胞技??術分析小鼠脾臟ＣＤ３＋Ｔ細胞的凋亡、活化、失能以及溶酶體狀態(tài)。結(jié)果顯示，??ＣＱ處理組Ｔ細胞活力與ＰＢＳ組沒有差別（圖３Ｂ）；?ＣＤ６９＋細胞占ＣＤ３＋Ｔ細胞??比例以及ＣＤ１３７＋細胞占ＣＤ３＋Ｔ細胞比例沒有差別（圖３Ｃ），ＰＤ－１＋細胞占ＣＤ３＋??Ｔ細胞比例以及ＣＴＬＡ－４＋細胞占ＣＤ３＋Ｔ細胞比例沒有差別（圖３Ｄ）；?ＣＤ１０７ａ＋??細胞占ＣＤ３＋Ｔ細胞比例也沒有差別（圖３Ｅ）。以上結(jié)果提示ＣＱ不直接影響Ｔ??細胞增殖，升高濃度甚至會抑制Ｔ細胞增殖；腹腔注射ＣＱ也不會影響小鼠Ｔ??細胞的凋亡、活化、失能以及溶酶體狀態(tài)。這說明ＣＱ很可能不會通過直接激??活Ｔ細胞發(fā)揮抗腫瘤免疫效應。??４４??

膦酸鹽脂質(zhì)體以清除巨噬細胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治療，測量腫瘤大小。兩??周后，結(jié)果顯示，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腫瘤體積與單獨用氯??膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差別（圖５Ｃ）。另外，我們對建立了?Ｈ２２肌肉瘤模型??的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體以清除巨噬細胞，再用ＣＱ（７５ｍｇ／ｋｇ）??治療。一周后，測量腫瘤重量，結(jié)果顯示，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治??療組腫瘤重量與單獨用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差別（圖５Ｄ）。除以上兩種??動物模型外，我們對建立了?Ｈ２２腹水模型的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸鹽脂??質(zhì)體以清除巨噬細胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治療。一周后，測量小鼠腹水體積??和腹水中腫瘤細胞數(shù)量（流式細胞技術計數(shù)ＣＤ４５－細胞）。結(jié)果顯示，氯膦酸鹽??脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腹水體積與單獨用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組沒有差??別（圖５Ｅ），同時，氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后再用ＣＱ治療組腹水中腫瘤細胞數(shù)??量與單獨用氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理組也沒有差別（圖５Ｆ）。以上動物實驗提示，巨??噬細胞參與了?ＣＱ誘導的抗腫瘤作用。??Ａ?Ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｂ?Ｇａｔｅ?ｏｎ?ＣＤ３＊?ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｃ?＾－５．０－ｊ?＾?Ｃｉ〇＋ｃｑ?ｒ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?名一￣?Ｃ丨０?ｒ??Ｏ?ｏ?ＣＱ?／??ｂ?＇?１．０３％?０．０７％?＇６７．３％?７２．３％?▽?＋?ｐｒｑ?／?：??＿＿?ｆ?隊－ｒ?Ｊ??ｊ?；?１??：?Ｗ???ｊ?！＿?


本文編號：3364311