目的心肌缺血再灌注損傷（MIRI）在冠心病急性心肌缺血事件中的主要病理表現(xiàn)是缺血缺氧導(dǎo)致的心肌細(xì)胞損傷。最新研究表明：自噬對(duì)MIRI起“雙刃劍”作用。mTOR介導(dǎo)的mTOR/自噬互反饋和Beclin 1介導(dǎo)的自噬/凋亡互反饋可能是調(diào)控自噬“雙刃劍”轉(zhuǎn)向促細(xì)胞存活的重要機(jī)制。我們前期研究證實(shí)苗藥都木油活性成分葒草苷抗心肌缺血再灌損傷的作用機(jī)制可能與抗凋亡和誘導(dǎo)自噬有關(guān)。在此基礎(chǔ)上,本研究擬通過建立大鼠乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型,探尋葒草苷（Orientin, Ori）防治MIRI的主要作用靶點(diǎn),驗(yàn)證“葒草苷抗心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的核心是通過調(diào)節(jié)mTOR與Beclin 1雙通路,誘導(dǎo)細(xì)胞適度自噬,促使自噬“雙刃劍”作用轉(zhuǎn)向細(xì)胞保護(hù)”的假說,為苗藥都木油防治MIRI提供藥理學(xué)依據(jù)。方法和結(jié)果首先采用胰酶消化法體外分離培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細(xì)胞,利用三氣培養(yǎng)法建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型（缺氧12h,復(fù)氧12 h）。實(shí)驗(yàn)共分為7組：正常對(duì)照組（Control組）、缺氧/復(fù)氧損傷組（HR組）、低劑量葒草苷預(yù)處理組（3 μmol/L, Ori-3組）、中劑量葒草苷預(yù)處理組（10μmol/L,Or... 

【文章來源】：中央民族大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：176 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)中英文對(duì)照
第一章 緒論
    一、細(xì)胞自噬的概述
        1. 細(xì)胞自噬的定義和生理意義
        2. 細(xì)胞自噬的分類
        3. 細(xì)胞自噬的發(fā)生過程及相關(guān)分子機(jī)制
    二、細(xì)胞自噬在心肌缺血再灌注損傷中的“雙刃劍”作用及相關(guān)信號(hào)通路
        1. 自噬在MIRI中的“雙刃劍”作用
        2. PI3K-Akt-mTOR通路對(duì)mTOR/自噬互反饋的關(guān)鍵調(diào)控作用
        3. Beclin 1與Bcl-2/Bcl-XL的相互作用對(duì)自噬/凋亡互反饋的關(guān)鍵調(diào)控作用
    三、本課題的研究背景、意義、前期研究基礎(chǔ)及主要內(nèi)容
        1. 選題背景及意義
        2. 前期研究基礎(chǔ)
        3. 研究的主要內(nèi)容與技術(shù)手段
第二章 葒草苷抗大鼠乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的藥效學(xué)研究
    引言
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        二、實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
        三、主要藥品及試劑
        四、主要試劑的配制
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        一、大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        二、心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立
        三、實(shí)驗(yàn)分組
        四、觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一、大鼠乳鼠心肌細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果
        二、光學(xué)顯微鏡下心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果
        三、葒草苷對(duì)心肌細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        四、葒草苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞活力的影響
        五、葒草苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷引起的心肌細(xì)胞心肌酶釋放的影響
        六、葒草苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷引起的心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變的影響
    第四節(jié) 分析與討論
    第五節(jié) 小結(jié)
第三章 葒草苷對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞自噬與凋亡的影響
    引言
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        二、實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
        三、主要藥品及試劑
        四、主要試劑的配制
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        一、大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        二、心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立
        三、實(shí)驗(yàn)分組
        四、觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一、流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡
        二、TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡
        三、Western Blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞Bcl-2和Bcl-XL的蛋白表達(dá)水平
        四、電鏡檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)自噬體
        五、心肌細(xì)胞內(nèi)LC3免疫熒光染色結(jié)果
        六、Western Blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)LC3和Beclin 1蛋白表達(dá)水平
    第四節(jié) 分析與討論
    第五節(jié) 小結(jié)
第四章 葒草苷基于mTOR相關(guān)信號(hào)通路的抗心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的分子機(jī)制研究
    引言
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        二、實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
        三、主要藥品及試劑
        四、主要試劑的配制
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        一、大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        二、心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立
        三、實(shí)驗(yàn)分組
        四、觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一、Western Blot法檢測(cè)Akt及其磷酸化水平
        二、Western Blot法檢測(cè)mTOR、Raptor、p70S6K及其磷酸化水平
        三、Western Blot法檢測(cè)AMPK及其磷酸化水平
        四、Western Blot法檢測(cè)Rictor蛋白表達(dá)水平
    第四節(jié) 分析與討論
    第五節(jié) 小結(jié)
第五章 葒草苷基于Beclin 1/Bcl-2相互作用的抗心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的分子機(jī)制研究
    引言
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        二、實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
        三、主要藥品及試劑
        四、主要試劑的配制
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        一、大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        二、心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立
        三、實(shí)驗(yàn)分組
        四、觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)beclin 1基因的mRNA表達(dá)水平
        二、Western Blot法檢測(cè)Beclin 1、Bcl-2和Bcl-XL的磷酸化水平
        三、免疫共沉淀法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上Beclin 1與Bcl-2的相互作用
    第四節(jié) 分析與討論
    第五節(jié) 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3362801