背景與目的:顱內(nèi)動(dòng)脈瘤是對(duì)人類(lèi)生命健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅的一種急性腦血管疾病,目前關(guān)于顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。大量研究表明,血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是形成顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的始動(dòng)環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷其潛在的機(jī)制包括血流動(dòng)力學(xué)應(yīng)激、一氧化氮合酶活性降低、氧化應(yīng)激、雌激素失衡和內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的連接損傷等。然而,血流動(dòng)力學(xué)如何引起血管內(nèi)皮損傷的機(jī)制仍需進(jìn)一步闡述。P120ctn在血管內(nèi)皮連接中扮演重要角色。P120ctn的高度保守近膜結(jié)構(gòu)域與VE-cadherin結(jié)合維持內(nèi)皮細(xì)胞黏附連接的穩(wěn)定性;P120ctn也是天然免疫反應(yīng)的調(diào)控因子之一,與炎癥因子NF-B激活相關(guān)。PKCα與血管性疾病關(guān)系密切,能夠調(diào)控P120ctn表達(dá)及磷酸化。本課題旨在研究PKCα-P120ctn-NF-B信號(hào)通路是否參與流體剪切應(yīng)力引起的血管內(nèi)皮損傷。方法:我們自行設(shè)計(jì)了一種新型T型細(xì)胞流體力學(xué)裝置,構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。通過(guò)流體力學(xué)模擬軟件計(jì)算T型流室腔內(nèi)的剪切力和剪切力梯度,根據(jù)載玻片上不同的剪切力和剪切力梯度將載玻片分為三個(gè)區(qū)域:Ⅰ區(qū):停滯區(qū),為低至正常的流體剪切力;Ⅱ區(qū):加速區(qū),高流體剪切力及高剪切力梯度;Ⅲ... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)裝置示意圖

第一部分：血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型構(gòu)建9圖1.2T型流室腔內(nèi)的剪切力和剪切力梯度。Ⅰ區(qū)：綠色，停滯區(qū)，為低至正常的流體剪切力；Ⅱ區(qū)：紅色，加速區(qū)，高流體剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ區(qū)：黃色，為負(fù)到零的高流體剪切力及高剪切力梯度。1.1.4.4內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及密度觀察當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到80%以上時(shí)，將載玻片放入T型流動(dòng)腔底端的載玻片槽內(nèi)，然后將其放入已消毒的37℃5%CO2培養(yǎng)箱中，添加2%血清DMEM培養(yǎng)基約200ml到儲(chǔ)液管中，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，分別對(duì)載玻片上的細(xì)胞沖擊0、6小時(shí)，在沖擊細(xì)胞期間也需密切觀察培養(yǎng)基的顏色變化，判斷培養(yǎng)基是否污染。當(dāng)達(dá)到相應(yīng)的沖擊時(shí)間后，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，排空系統(tǒng)內(nèi)的培養(yǎng)基，用無(wú)菌鑷子將流動(dòng)腔中的載玻片取出，然后將載玻片輕輕置入裝有預(yù)冷的PBS緩沖液的10cm圓形器皿中，最后將載玻片迅速置于倒置顯微鏡下觀察血流剪切力作用后的細(xì)胞密度及形態(tài)變化并拍照保存。

第一部分：血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型構(gòu)建101.2結(jié)果通過(guò)流體力學(xué)模擬軟件Fluent6.0計(jì)算T型流室腔內(nèi)的剪切力和剪切力梯度。根據(jù)載玻片上不同的剪切力和剪切力梯度將載玻片分為三個(gè)區(qū)域：Ⅰ區(qū)：停滯區(qū)，為低至正常的流體剪切力；Ⅱ區(qū)：加速區(qū)，高流體剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ：為負(fù)到零的高流體剪切力及高剪切力梯度（圖1.2）。為了觀察在不同強(qiáng)度流體剪切力作用下內(nèi)皮細(xì)胞損傷狀態(tài)，在新型“T”型流室系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)裝置中，加載500ml/min流量的沖擊流場(chǎng)對(duì)載玻片上的正常血管內(nèi)皮細(xì)胞給予6h的沖擊后倒置顯微鏡觀察其密度及形態(tài)：在II區(qū)，血管內(nèi)皮細(xì)胞密度下降明顯，細(xì)胞之間的間隙明顯增大，細(xì)胞形態(tài)多樣性伴拉長(zhǎng)（圖1.3）。圖1.3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在流體剪切力作用下密度及形態(tài)學(xué)變化。1、在流體剪切力作用0小時(shí)后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;2、在流體剪切力作用6小時(shí)后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞：在II區(qū)，血管內(nèi)皮細(xì)胞密度下降明顯，細(xì)胞之間的間隙明顯增大，細(xì)胞形態(tài)多樣性伴拉長(zhǎng).

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血管內(nèi)皮鈣黏蛋白與p120-連環(huán)蛋白在兔顱內(nèi)動(dòng)脈瘤中的表達(dá)及其意義[J]. 肖志朋,熊秋迎,榮威林,趙劍斕,胡祖力,李美華.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2015 (12)
[2]P120ctn overexpression enhances β-catenin-E-cadherin binding and down regulates expression of survivin and cyclin D1 in BEL-7404 hepatoma cells[J]. Chao-Zan Nong Li-Li Pan Wei-Sheng He Hai-Hong Ye Hua-Yi Huang,Department of Experimental Center,Guangxi Hospital for Nationalities,Nanning 530001,Guangxi Zhuang Autonomous Region,ChinaXi-Liang Zha,Department of Biochemistry and Molecular Biology,Fudan University Shanghai Medical College,Shanghai 200032,China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(08)
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