研究目的肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）由于高復(fù)發(fā)率和頻繁轉(zhuǎn)移而成為全世界與癌癥相關(guān)死亡的第四大最常見原因。對于肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展/侵襲轉(zhuǎn)移的研究一直是熱點(diǎn),但其具體機(jī)制至今仍不完全清楚。mi R-23a-27a-24-2簇位于人類染色體19p13.12,轉(zhuǎn)錄后形成3個成熟的mi RNAs:mi R-23a,mi R-27a和mi R-24。在mi R-23a-27a-24-2簇中,三個mi RNAs轉(zhuǎn)錄共用一個啟動子。然而,在不同組織和細(xì)胞中,三個成熟mi RNAs表達(dá)有時一致,有時不一致。相同的mi RNA可以因為作用靶點(diǎn)的不同發(fā)揮不同的甚至相反的功能。目前對mi RNAs的研究多集中在單一的mi RNA上,對于mi RNA的整體功能及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究非常有限。本研究將利用CRISPR Cas9基因編輯技術(shù)建立mi RNA敲除Hep G2細(xì)胞模型,并在此基礎(chǔ)上建立動物模型,分別闡述mi R-23a-27a-24-2簇中成熟mi RNAs的功能;同時利用CRISPR d Cas9（Catalytically dead Cas9,d Cas9）技術(shù)建... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

MiR-23a-27a-24簇結(jié)構(gòu)簡圖

3圖1.2.MiR-23a-27a-24-2簇中microRNAs的相互作用及靶基因MiR-23a-27a-24-2簇與腫瘤的多個生物學(xué)過程有關(guān)：增殖，細(xì)胞周期停滯，凋亡，分化，侵襲轉(zhuǎn)移等。MiRNA可以因為靶基因不同而發(fā)揮不同功能。1.2.1p53信號通路p53是人類最重要的抑癌基因之一，在細(xì)胞周期、DNA修復(fù)、細(xì)胞凋亡、代謝等方面都發(fā)揮重要作用。p53功能喪失，腫瘤風(fēng)險顯著增加。研究表明，超過50%的腫瘤中，p53發(fā)生突變[21]。p53可以誘導(dǎo)miR-23a過表達(dá)并靶向X‐linkedinhibitorofapoptosisprotein（XIAP），抑制細(xì)胞凋亡[21]；相反，p53誘導(dǎo)miR-23a過表達(dá)后也可以靶向凋亡抑制者FOXA1，通過AMPK/p53/miR-23a/FOXA1信號通路抑制HCC細(xì)胞凋亡[22]。此外，p53依賴的miR-23a上調(diào)可以作用于p21，導(dǎo)致G2/M細(xì)胞周期停滯，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖[23]。另一方面，miR-27a和RPL26與p533’UTR競爭性結(jié)合，在Six1存在的情況下，miR-27a與p53結(jié)合增加，從而降低p53表達(dá)[21]。miR-24可以通過與p533’UTR結(jié)合抑制p53表達(dá)進(jìn)而影響腫瘤侵襲能力[24]。綜上，miRNA可以通過直接/間接靶向p53調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲。

41.2.2Wnt-β-catenin信號通路Wnt-β-catenin信號通路參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個過程，其異常激活顯著增加腫瘤發(fā)生風(fēng)險。Frizzleds及LDLreceptor‐relatedprotein是Wnt的受體，結(jié)合后形成復(fù)合物以穩(wěn)定β-catenin。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的β-catenin轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核后，β‐catenin–LEF/TCF轉(zhuǎn)錄復(fù)合物激活經(jīng)典Wnt信號通路，C-Myc和CyclinD1是其下游基因[25]。最近的研究表明，miRNA誘導(dǎo)的遺傳及表觀遺傳改變與Wnt-β-catenin信號通路相互關(guān)聯(lián)[26]（圖1.3）。MiRNAs可以作為Wnt-β-catenin的負(fù)調(diào)控因子,miR-27a及miR-24分別靶向WNT3A，WNT4[27]。另一方面，miRNA也可以通過靶向Wnt通路的抑制劑作用于信號通路的上游，發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用。例如，miR-23a/miR-27a可以直接靶向APC[28]而miR-27a直接靶向PP2A，造成β-catenin累積，進(jìn)而激活Wnt-β-catenin信號通路[25]。miRNA與Wnt信號通路的相互作還體現(xiàn)在miRNA靶向β‐catenin/TCF4復(fù)合物進(jìn)而影響細(xì)胞增殖及侵襲。圖1.3MiR‐23a‐27a‐24‐2簇與Wnt信號通路MiR-23a/miR-27a/miR-24通過靶向APC，GSK3β上調(diào)β-catenin轉(zhuǎn)錄活性；而miR-27a，miR-24抑制Wnt并下調(diào)β-catenin轉(zhuǎn)錄活性。另一方面，miR-23a/miR-27a/miR-24與β-catenin/TCF/LEF復(fù)合物相互作用抑制下游靶基因。LRP,LDLreceptor-relatedprotein;DVL,Disheveled;APC,Adenomatouspolyposiscoli;GSK3β,Glycogensynthasekinase3β;TCF,T-cellfactor;LEF,Lymphoidenhancer-bindingfactor

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]食管鱗癌腫瘤微環(huán)境中miRNA與TGF-β1的相關(guān)性分析[J]. 朱龍萍,金麗艷,蔣日月,汪茜茜,蔣健,毛朝明,陳德玉.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(05)



本文編號：3345672