1997年,香港中文大學(xué)盧煜明教授在孕婦血漿中發(fā)現(xiàn)存在胎兒游離DNA,隨著新一代高通量測(cè)序（next-generation sequencing,NGS）的出現(xiàn)及成熟,基于血漿游離DNA（cell-free DNA,cfDNA）的胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)（noninvasive prenatal testing,NIPT）成為可能。目前臨床上最常用的基于NGS的NIPT方法主要有全基因組大規(guī)模平行測(cè)序（random massively parallel sequencing,MPS）和靶向測(cè)序。NIPT技術(shù)創(chuàng)傷性小、無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn),且與傳統(tǒng)產(chǎn)前檢測(cè)手段相比檢測(cè)準(zhǔn)確性顯著提高。然而由于孕婦血漿中胎兒游離DNA 比例極低,針對(duì)其染色體微小差異的比較對(duì)檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性要求很高,且NIPT流程復(fù)雜,不同環(huán)節(jié)中出現(xiàn)的各種因素,如游離DNA提取、文庫(kù)制備及GC偏倚糾正等均可導(dǎo)致不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果的不一致。因此,無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)迫切需要標(biāo)準(zhǔn)化,而制備出接近真實(shí)樣本的參考物質(zhì)是進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)室無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)質(zhì)量保證和實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的關(guān)鍵。國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)參考物質(zhì)包括天然母體血漿樣本和片段化人基因組DN... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：153 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?ｐＥＴ－１５ｂ載體圖譜??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＥＴ－１５ｂ??１．２實(shí)驗(yàn)方法??

圖３?Ｑｕｂｉｔ?３．０簡(jiǎn)明操作流程??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｑｕｉｃｋ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?ｆｏｒ?Ｑｕｂｉｔ?３．０??Ｄ．開啟焚光計(jì)開關(guān)，點(diǎn)擊“ｄｓＤＮＡ”選項(xiàng)，再點(diǎn)擊“Ｈｉｇｈ?Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”選項(xiàng)屏幕進(jìn)入檢測(cè)頁(yè)面，打開檢測(cè)孔蓋，首先檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品管，將Ｓ１管插入檢孔，點(diǎn)擊“Ｒｅａｄ?Ｓｔａｎｄａｒｄ?１”選項(xiàng)，測(cè)得數(shù)據(jù)后將Ｓ１管取出，再置入Ｓ２管，??點(diǎn)擊“Ｒｅａｄ?Ｓｔａｎｄａｒｄ?２”選項(xiàng)，測(cè)出數(shù)據(jù)后焚光計(jì)將自動(dòng)在屏幕上繪制出條標(biāo)準(zhǔn)曲線；??Ｅ．然后將待測(cè)樣本管依次插入檢測(cè)孔中，點(diǎn)擊“Ｒｕｎ?Ｓａｍｐｌｅｓ”選項(xiàng)，通過(guò)擊屏幕上的“＋／－”選項(xiàng)進(jìn)行待測(cè)樣本體積的選擇，再選擇相應(yīng)所顯示的度單位，點(diǎn)擊“ｒｅａｄ?ｔｕｂｅｓ”選項(xiàng)進(jìn)行各個(gè)樣本的檢測(cè)，讀取所檢測(cè)濃度并記錄。??．５．２電泳驗(yàn)證ＤＦＦ消化產(chǎn)物??瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證Ｄ－ｃｆＤＮＡ??一

５９５ｎｎｉ處的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得到該標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為：ｙ?＝?０．０１７８６?＋??０．０６９８３ｘ（爐＝０．９９１９７），再利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ＤＦＦ蛋白的濃度為０．５８５?ｎｉｇ／ｍＬ。??結(jié)果如表９和圖６所示。??表９?ＢＳＡ標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本的體積、蛋白量及ＯＤ５９５值對(duì)照表??Ｔａｂｌｅ?９．?Ｌｉｓｔ?ｏｆ?ｖｏｌｕｍｅｓ，?ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ?ａｎｄ?ＯＤ５９５?ｆｏｒ?ＢＳＡ?ｓｔａｎｄａｒｄｓ?ａｎｄ?ｓａｍｐｌｅｓ??ＳＩ?Ｓ２?Ｓ３?Ｓ４?Ｓ５?Ｓ６?待測(cè)樣本??體積（ｐＬ）?０?２?４?６?８?１０?６??ＰＢＳ?（ｐＬ）?３０?２８?２６?２４?２２?２０?２４??稀釋后蛋白濃??０．０００?０．０６７?０．１３３?０．２００?０．２６７?０．３３３?０．１１７??度（ｍｇ／ｍＬ）??原始樣本濃度??１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?１．０００?０．５８５??（ｍｇ／ｍＬ）??－５４－??


本文編號(hào)：3302768