本文關(guān)鍵詞：參芎葡萄糖注射液藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:參芎葡萄糖注射液臨床廣泛用于治療心腦血管疾病且療效確切,但其發(fā)揮臨床效用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、體內(nèi)過程及作用機(jī)制尚不明確,無法為其臨床療效提供科學(xué)依據(jù),從而限制了參芎葡萄糖注射液的產(chǎn)業(yè)化與現(xiàn)代化進(jìn)程。本研究針對貴州省名優(yōu)大品種參芎葡萄糖注射液的“藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制、藥代動力學(xué)、藥物相互作用以及作用機(jī)制”等進(jìn)行系統(tǒng)的基礎(chǔ)研究,以期明確本品的藥效物質(zhì),提高產(chǎn)品質(zhì)量控制水平,并對作用機(jī)制進(jìn)行探討,為確保臨床用藥安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測器-串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜法(UHPLC-DAD-Q/TOF)對參芎葡萄糖注射液中主要化學(xué)成分進(jìn)行全面系統(tǒng)的表征;同時進(jìn)一步將心肌細(xì)胞萃取技術(shù)和超高液相色譜 電噴霧 三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)分析技術(shù)相結(jié)合,對參芎葡萄糖注射液中活性成分進(jìn)行篩選;采用液相色譜建立以指紋圖譜為特征的多指標(biāo)定性定量控制方法,對多個活性成分進(jìn)行含量測定,并對藥材、半成品與制劑指紋圖譜的相關(guān)性進(jìn)行考察。2.建立測定大鼠血漿中參芎葡萄糖注射液中主要有效成分原兒茶醛、丹參素、鹽酸川芎嗪以及迷迭香酸的UPLC-ESI-MS/MS分析方法,并分別考察丹參提取物、鹽酸川芎嗪以及參芎葡萄糖注射液在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)過程,對單方及復(fù)方的藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較。3.采用“cocktail探針?biāo)幬锓ā狈謩e研究參芎葡萄糖注射液對人肝微粒體和大鼠CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4酶活性的影響;體外實驗中,將參芎葡萄糖注射液和Cocktail探針底物在人肝微粒體中共同孵育,采用UPLC-MS/MS同時測定孵育液中混合探針?biāo)幬锎x物的濃度,并計算其IC50值,考察其對CYP450酶的抑制程度;體內(nèi)實驗中,將SD大鼠分別尾靜脈注射給予參芎葡萄糖注射液與生理鹽水,連續(xù)給藥7天和14天,第8天和第15天尾靜脈注射混合探針?biāo)幬?UPLC-MS檢測探針?biāo)幬锏难帩舛?計算其藥動學(xué)參數(shù);從體內(nèi)外角度分別考察參芎葡萄糖注射液對CYP450酶6種亞型的作用,預(yù)測發(fā)生藥物相互作用的可能性,以確保其臨床應(yīng)用的安全性與有效性。4.建立H9c2心肌細(xì)胞H2O2氧化損傷模型,以細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)漏出量、細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量作為考察指標(biāo),探討參芎葡萄糖注射液對H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用;通過分析線粒體膜電位(△ψm)、細(xì)胞形態(tài)變化,應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)(q RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(western blotting)分析H9c2心肌細(xì)胞中Bcl-2,Bax和Caspase-3表達(dá)的情況,考察參芎葡萄糖注射液對H2O2所致H9c2心肌細(xì)胞凋亡的影響。并利用Rat Genome 230 2.0 Array基因芯片,考察其對H9c2心肌細(xì)胞的表達(dá)譜的影響并尋找其抗凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,從而探究參芎葡萄糖注射液對H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用機(jī)制。結(jié)果:1.全面分析了參芎葡萄糖注射液中的化學(xué)成分,對其中13個化合物進(jìn)行了鑒定,通過心肌細(xì)胞萃取和分析技術(shù)篩選出丹參素、鹽酸川芎嗪、丹酚酸I/H、紫草酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C等8個具有心肌保護(hù)作用的丹酚酸類活性化合物;參芎葡萄糖注射液多指標(biāo)含量測定結(jié)果表明,制劑中丹參素、鹽酸川芎嗪、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的總量為1.295mg/m L~1.387 mg/m L,平均含量為1.336 mg/m L,RSD為1.6%;各批次制劑指紋圖譜的相似度均大于0.98,且制劑與藥材、半成品的指紋圖譜有良好的相關(guān)性,實現(xiàn)了從藥材、中間體到最終產(chǎn)品的全程質(zhì)量監(jiān)控,完善了參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),為準(zhǔn)確全面地評價參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。2.以統(tǒng)計矩模型處理,丹參中各測定成分及川芎嗪的MRT有劑量依賴性,其體內(nèi)代謝存在非線性動力學(xué)特征。且川芎嗪與丹參組成參芎方后,各藥動學(xué)參數(shù)變化較為明顯,復(fù)方中川芎嗪AUC明顯增大,MRT、CL和V顯著降低。該結(jié)果表明丹參的存在,顯著使川芎嗪在體內(nèi)的停留時間縮短而分布程度降低,提示臨床使用應(yīng)對給藥劑量及合并用藥進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控以保證安全。3.在人肝微粒體體外孵育體系中,參芎葡萄糖注射液對CYP450酶6種亞型的IC50值均大于15%,說明其不會產(chǎn)生競爭性抑制作用;大鼠體內(nèi)實驗中,咖啡因、咪達(dá)唑侖、奧美拉唑和美托洛爾連續(xù)給藥7天和14天后與空白組比較無統(tǒng)計學(xué)差異;甲苯磺丁脲的重要參數(shù)AUC、MRT、T1/2、Cmax值在給藥7天和14天后顯著性增大,CLz值顯著性降低。說明參芎葡萄糖注射液對CYP2C9活性的抑制作用與給藥療程有關(guān),而對CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C19和CYP3A4無影響。提示需特別注意與經(jīng)CYP2C9代謝且治療窗窄的藥物(如華法林)聯(lián)合使用,以免發(fā)生藥物相互作用導(dǎo)致不良反應(yīng)。4.參芎葡萄糖注射液對H2O2所致心肌細(xì)胞氧化損傷的具有保護(hù)作用,可明顯提高H2O2損傷后H9c2心肌細(xì)胞的存活率和超氧化物歧化酶(SOD)活性、減少乳酸脫氫酶(LDH)漏出、降低細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;可將H2O2損傷后的細(xì)胞回復(fù)到正常形態(tài),并抑制線粒體膜電位降低。參芎葡萄糖注射液可上調(diào)H9c2心肌細(xì)胞中抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá),導(dǎo)致Bcl-2/Bax值升高;且明顯下調(diào)凋亡執(zhí)行效應(yīng)子Caspase-3的表達(dá),從而抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;基因芯片實驗發(fā)現(xiàn)了138個有差異表達(dá)的基因。pathway分析表明這些基因涉及了p53、Jak-STAT、m TOR和PI3K/Akt等與凋亡緊密相關(guān)的信號通路。在這些凋亡相關(guān)通路中,均有PIK3CA的參與,并且其表達(dá)差異達(dá)到了3.5倍多。PIK3CA表達(dá)的增加可上調(diào)PI3K的活性,使Akt發(fā)生磷酸化,從而激活PI3K/Akt通路,起到抗凋亡作用。這提示我們PI3K/Akt信號通路可能是參芎葡萄糖注射液抗H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。結(jié)論:本研究建立了基于靶細(xì)胞萃取結(jié)合UPLC/Q-TOF MS技術(shù)的中藥藥效基礎(chǔ)研究方法,闡明了參芎葡萄糖注射液的藥效物質(zhì)基礎(chǔ);建立了參芎葡萄糖注射液科學(xué)的質(zhì)量控制方法,能夠確保產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性,提升了產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平;研究明確了參芎葡萄糖注射液在體內(nèi)的藥動學(xué)特征,分析預(yù)測了與臨床常用藥物合用的相互作用,揭示了抗心肌氧化損傷作用及機(jī)制,為指導(dǎo)臨床合理用藥和完善藥品說明書提供了科學(xué)依據(jù);通過上述研究,為確保參芎葡萄糖注射液臨床應(yīng)用安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控奠定了堅實的理論基礎(chǔ),并對全面闡明“參芎葡萄糖注射液”發(fā)揮臨床功效的科學(xué)內(nèi)涵提供重要依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：參芎葡萄糖注射液 藥效物質(zhì)基礎(chǔ) 質(zhì)量控制 藥代動力學(xué) 藥物相互作用 抗心肌氧化損傷作用
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要6-10
• Abstract10-16
• 英文略縮詞表16-18
• 引言18-24
• 第一部分參芎葡萄糖注射液藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究24-63
• 1 材料與儀器25-26
• 2 方法與結(jié)果26-59
• 3 討論59-62
• 4 小結(jié)62-63
• 第二部分參芎葡萄糖注射液藥代動力學(xué)研究63-87
• 1 材料與儀器64-65
• 2 方法65-68
• 3 結(jié)果68-83
• 4 討論83-86
• 5 結(jié)論86-87
• 第三部分參芎葡萄糖注射液對P450酶的影響87-119
• 1 材料與儀器89-90
• 2 方法90-96
• 3 結(jié)果96-114
• 4 討論114-118
• 5 小結(jié)118-119
• 第四部分 參芎葡萄糖注射液抗氧化損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究119-161
• 1 儀器與材料123-124
• 2 方法124-135
• 3 結(jié)果135-156
• 4 討論156-159
• 5 小結(jié)159-161
• 全文總結(jié)161-164
• 參考文獻(xiàn)164-172
• 綜述172-190
• 參考文獻(xiàn)186-190
• 作者簡歷190-194
• 致謝194-195
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集195

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：參芎葡萄糖注射液藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：330088