有研究表明表觀遺傳調控在促進和維持腫瘤干細胞（CSC）特性中發(fā)揮重要作用。然而,在肝細胞癌（HCC）中,促進肝癌干細胞（LCSCs）特性的表觀遺傳調控機制以及靶向表觀遺傳調控的藥物作用機制尚未完全闡明。本文的預實驗結果表明,SMMC-7721細胞系LCSCs較親本細胞有更高DNMT1活性,更低miR-34a-5p表達。此外,抗腫瘤活性藥效學篩選實驗發(fā)現(xiàn)蔓荊子總黃酮（FVTF）有效抑制LCSCs球形成和DNMT1活性,上調miR-34a-5p水平。計算機模擬發(fā)現(xiàn)miR-34a-5p與FoxM1 3′端非翻譯區(qū)有特異結合位點。據(jù)此,我們假設:DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1信號軸在促進LCSCs特性中起重要作用;同時,FVTF通過抑制DNMT1活性和表達、上調miR-34a-5p表達、直接靶向抑制FoxM1,從而抑制LCSCs特性。為了驗證該科學假設,本研究以SMMC-7721細胞系CD133⁺肝癌球細胞作為LCSCs模型。分別應用ELISA、蛋白質印跡、定量逆轉錄PCR（qRT-PCR）和甲基化特異性PCR（MSP）比較SMMC-7721細胞與LCSCs... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

本學位論文研究思路

miR-34a是重要的腫瘤抑制因子,是miR-34家族主要成員之一,其在多種人癌癥中被表觀沉默[21,23]。如圖2-1所示,miR-34a基因位于1號染色體p36位點;通過RNA聚合酶II(pol II)將miR-34a基因從位于CpG島的轉錄起始位點轉錄成初級轉錄物(pri-mir-34a)。pre-mir-34a通過輸出蛋白5被運輸?shù)郊毎|中,隨后被核糖體內切酶Dicer切割成成熟的miR-34a,然后,miR-34a參與裝配RNA誘導沉默復合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。miR-34a/RISC復合物通過與靶基因m RNAs(如CD44)3"端非翻譯區(qū)部分互補序列結合,抑制特定的基因產物翻譯,或通過完全互補的序列結合引起靶基因m RNA降解[22]。在本學位課題的研究中,我們試圖利用miR-34a-5p模擬物(miR-34a-5p mimic)或miR-34a-5p抑制物(miR-34a-5p inhibitor)轉染分別干預肝癌SMMC-7721細胞或其源性LCSC。對比檢測miR-34a-5p表達、LCSC特性,驗證miR-34a-5p能否抑制LCSC特性。再聯(lián)合miR-34a-5p mimic與DNMT1過表達處理SMMC-7721源性LCSC,分析組成性活化DNMT1表觀沉默miR-34a-5p能否促進SMMC-7721源性LCSC特性。2.2 材料與方法

免疫磁微球(MACS)分選的CD133-和CD133+細胞群的CD133陽性細胞百分率分別是0.27±0.05%和99.0±1.0%。單層貼壁生長的SMMC-7721細胞CD133+細胞群的百分率是4.3±0.14%(圖2-2);這些結果說明,MACS分選有效純化CD133+細胞群。按照先前發(fā)表文獻[125]的描述,我們定義CD133+肝癌球細胞為LCSC。2.3.1.2 LCSCs DNMT1組成性活化

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3290997