有研究表明表觀遺傳調(diào)控在促進(jìn)和維持腫瘤干細(xì)胞（CSC）特性中發(fā)揮重要作用。然而,在肝細(xì)胞癌（HCC）中,促進(jìn)肝癌干細(xì)胞（LCSCs）特性的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制以及靶向表觀遺傳調(diào)控的藥物作用機(jī)制尚未完全闡明。本文的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SMMC-7721細(xì)胞系LCSCs較親本細(xì)胞有更高DNMT1活性,更低miR-34a-5p表達(dá)。此外,抗腫瘤活性藥效學(xué)篩選實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蔓荊子總黃酮（FVTF）有效抑制LCSCs球形成和DNMT1活性,上調(diào)miR-34a-5p水平。計(jì)算機(jī)模擬發(fā)現(xiàn)miR-34a-5p與FoxM1 3′端非翻譯區(qū)有特異結(jié)合位點(diǎn)。據(jù)此,我們假設(shè):DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1信號(hào)軸在促進(jìn)LCSCs特性中起重要作用;同時(shí),FVTF通過抑制DNMT1活性和表達(dá)、上調(diào)miR-34a-5p表達(dá)、直接靶向抑制FoxM1,從而抑制LCSCs特性。為了驗(yàn)證該科學(xué)假設(shè),本研究以SMMC-7721細(xì)胞系CD133⁺肝癌球細(xì)胞作為L(zhǎng)CSCs模型。分別應(yīng)用ELISA、蛋白質(zhì)印跡、定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR）和甲基化特異性PCR（MSP）比較SMMC-7721細(xì)胞與LCSCs... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

本學(xué)位論文研究思路

miR-34a是重要的腫瘤抑制因子,是miR-34家族主要成員之一,其在多種人癌癥中被表觀沉默[21,23]。如圖2-1所示,miR-34a基因位于1號(hào)染色體p36位點(diǎn);通過RNA聚合酶II(pol II)將miR-34a基因從位于CpG島的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄成初級(jí)轉(zhuǎn)錄物(pri-mir-34a)。pre-mir-34a通過輸出蛋白5被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)中,隨后被核糖體內(nèi)切酶Dicer切割成成熟的miR-34a,然后,miR-34a參與裝配RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。miR-34a/RISC復(fù)合物通過與靶基因m RNAs(如CD44)3"端非翻譯區(qū)部分互補(bǔ)序列結(jié)合,抑制特定的基因產(chǎn)物翻譯,或通過完全互補(bǔ)的序列結(jié)合引起靶基因m RNA降解[22]。在本學(xué)位課題的研究中,我們?cè)噲D利用miR-34a-5p模擬物(miR-34a-5p mimic)或miR-34a-5p抑制物(miR-34a-5p inhibitor)轉(zhuǎn)染分別干預(yù)肝癌SMMC-7721細(xì)胞或其源性LCSC。對(duì)比檢測(cè)miR-34a-5p表達(dá)、LCSC特性,驗(yàn)證miR-34a-5p能否抑制LCSC特性。再聯(lián)合miR-34a-5p mimic與DNMT1過表達(dá)處理SMMC-7721源性LCSC,分析組成性活化DNMT1表觀沉默miR-34a-5p能否促進(jìn)SMMC-7721源性LCSC特性。2.2 材料與方法

免疫磁微球(MACS)分選的CD133-和CD133+細(xì)胞群的CD133陽性細(xì)胞百分率分別是0.27±0.05%和99.0±1.0%。單層貼壁生長(zhǎng)的SMMC-7721細(xì)胞CD133+細(xì)胞群的百分率是4.3±0.14%(圖2-2);這些結(jié)果說明,MACS分選有效純化CD133+細(xì)胞群。按照先前發(fā)表文獻(xiàn)[125]的描述,我們定義CD133+肝癌球細(xì)胞為L(zhǎng)CSC。2.3.1.2 LCSCs DNMT1組成性活化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3290997