目的:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs）移植治療心肌梗死被認(rèn)為是一種有效的治療方法,然而炎性微環(huán)境導(dǎo)致移植的BM-MSCs生存率和分化率低,限制了其療效,提高BM-MSCs的生存率和分化能力以提高BM-MSCs移植治療心肌梗死療效十分重要。Latifolin是從中藥降香中分離出來的單體化合物,研究報(bào)道表明latifolin具有抗炎作用,前期研究發(fā)現(xiàn)latifolin對(duì)心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,可降低心肌組織炎細(xì)胞浸潤,提高心功能。因此,推測latifolin可通過改善炎性微環(huán)境提高BM-MSCs生存率和增強(qiáng)BM-MSCs定向分化能力,進(jìn)而提高BM-MSCs移植治療心肌梗死療效。本研究探索latifolin對(duì)BM-MSCs生存率和心肌定向分化的作用,以達(dá)到增強(qiáng)BM-MSCs移植治療缺血性心臟病目的,為心肌梗死細(xì)胞治療和心肌再生研究奠定基礎(chǔ)。研究方法:1.采用全骨髓提取法收集大鼠BM-MSCs,倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài);采用流式細(xì)胞儀檢測BM-MSCs表面抗原CD29、CD90、CD34和CD45。2.采用噻唑藍(lán)（Meth... 

【文章來源】：江西中醫(yī)藥大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)(×200)

164.7%，結(jié)果見圖2。由實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果顯示，CD29和CD90陽性表達(dá)99%以上，CD34和CD45表達(dá)量小于5%，可排除造血前體細(xì)胞。根據(jù)流式鑒定，可以判定分離提取和傳代的細(xì)胞95%以上均為骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。圖2骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)Fig.2IdentificationofSurfaceMarkersofBoneMarrowMesenchymalStemCells4討論骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源于中胚層，具有強(qiáng)擴(kuò)增能力、多向潛能分化性。1968年，F(xiàn)riendenstein首次在骨髓中發(fā)現(xiàn)，其在特定的誘導(dǎo)條件和環(huán)境中可定向分化為成骨、軟骨、神經(jīng)、脂肪、心肌細(xì)胞。因其獲取容易，擴(kuò)增快速，在基因組織工程和細(xì)胞替代療法領(lǐng)域得到青睞[93,94]。骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞占有含量是非常少的，占總單核細(xì)胞數(shù)量的0.1～0.01‰，需要在體外先行提娶分離、純化和擴(kuò)增后才夠應(yīng)用于各項(xiàng)治療和研究[95]。目前，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外獲取和

28呈貼壁良好，見圖1E-H；在24h時(shí)，與正常組比，氧糖剝奪組、氧糖剝奪+TNF-α組、氧糖剝奪+LPS組細(xì)胞細(xì)胞明顯皺縮變小，長梭形形態(tài)消失，細(xì)胞貼壁減弱，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞損傷明顯見圖1I-L。圖1BM-MSCs在缺血缺氧和炎癥環(huán)境下形態(tài)變化(×200)Fig.1MorphologyofBM-MSCsunderOGDandinflammatoryconditions(×200)3.2缺血、缺氧和炎癥環(huán)境對(duì)BM-MSCs活力的影響MTT結(jié)果顯示，與正常組比，氧糖剝奪6h和12h后BM-MSCs存活率升高，分別為115.13%和106.97%，其中6h具有顯著差異性（P＜0.05），氧糖剝奪24h后BM-MSCs存活率降低，為85.95%；與正常組比，氧糖剝奪+TNF-α處理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分別為98.85%、89.70%和51.40%，氧糖剝奪+LPS處理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分別為97.92%、81.30%和40.27%，其中氧糖剝奪+TNF-α、氧糖剝奪+LPS處理24h細(xì)胞生存率與正常組比具有顯著差異性（P＜0.01）；與氧糖剝奪組比較，氧糖剝奪+TNF-α組和氧糖剝奪+LPS組在12h細(xì)胞活力顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），在24h細(xì)胞活力降低更為顯著（P＜0.01）。由結(jié)果可得，氧糖剝奪6h、12h使細(xì)胞活力增強(qiáng)，氧糖剝奪24h對(duì)細(xì)胞造成損傷，而加入TNF-α和LPS誘導(dǎo)，導(dǎo)致BM-MSCs活力明顯降低，見圖2。

【參考文獻(xiàn)】：
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