目前藥物治療和自體毛囊移植這兩種治療脫發(fā)的方法不能促進(jìn)新的毛囊的形成。真皮毛乳頭細(xì)胞（Dermal papilla cells,DPCs）在毛囊形態(tài)發(fā)生和調(diào)節(jié)毛發(fā)循環(huán)中起著至關(guān)重要的作用,但是體外傳代培養(yǎng)會(huì)快速丟失其誘導(dǎo)毛發(fā)生成的能力。所以,如何在體外獲得大量具有誘導(dǎo)毛發(fā)再生能力的DPCs已經(jīng)成為目前毛囊再生研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本研究的主要目的是探究海藻酸鈉的三維培養(yǎng)環(huán)境是否能夠誘導(dǎo)真皮成纖維細(xì)胞向毛乳頭樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及可能的作用機(jī)制。為促進(jìn)成纖維細(xì)胞的聚集,我們利用靜電噴霧的方法制備包裹真皮成纖維細(xì)胞的海藻酸-多聚賴氨酸-海藻酸（Alginate-poly-L-lysine-alginate,APA）微球,分別通過CCK-8和RT-PCR的方法檢測(cè)人真皮成纖維細(xì)胞的增殖和人毛乳頭特異性基因的表達(dá);堿性磷酸酶染色和定量及流式細(xì)胞技術(shù)的方法檢測(cè)人毛乳頭標(biāo)記基因的蛋白表達(dá)水平。發(fā)現(xiàn)在一定的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)APA微球具有良好的生物相容性,并且人真皮成纖維細(xì)胞的DPC標(biāo)記基因在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平都隨著APA微球培養(yǎng)時(shí)間的增加而增強(qiáng)。為探究人毛乳頭樣細(xì)胞是否具有誘導(dǎo)毛發(fā)再生的能力,誘導(dǎo)產(chǎn)生的毛乳頭樣細(xì)胞和新生... 

【文章來源】：湖南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

毛囊形態(tài)發(fā)生過程[14]

博士學(xué)位論文7毛發(fā)向外生長(zhǎng)存在的問題，最早在2008年被Qiao提出[65]，即首先分離胎鼠的表皮細(xì)胞，基底面朝上移植到硅膠板上，然后將胎鼠的DP細(xì)胞置于基底面，隨后將硅膠板置于裸鼠背部的皮瓣下縫合。4周后可見生長(zhǎng)方向方向垂直于硅膠板的毛發(fā)生長(zhǎng)，隨后再次手術(shù)翻轉(zhuǎn)皮瓣，可見新形成的毛發(fā)在宿主皮膚表皮存活至少12個(gè)月。Su等利用單邊切口的方法改進(jìn)皮瓣后，可以減少重建毛囊所需的時(shí)間[66]。這種模型相對(duì)上述兩種模型不僅需要的細(xì)胞量少而且并發(fā)癥低，但是新形成毛囊時(shí)間最長(zhǎng)，并且需要進(jìn)行二次手術(shù)。除以上三種常用的毛囊重建模型外，組織工程三維培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)一步增加了在體外形成毛囊的可能性。研究報(bào)道通過旋轉(zhuǎn)、兩步旋轉(zhuǎn)、懸浮和懸滴等方法可在體外使DP細(xì)胞發(fā)生聚集[67-69]，而且這種DP細(xì)胞的聚集狀態(tài)能夠誘導(dǎo)毛發(fā)再生。Osada等將鼠觸須DP細(xì)胞種植在圓底低粘附的96孔板中使其聚集成球，并且與上皮細(xì)胞混合后能在裸鼠背部形成毛囊[70]。研究顯示DP細(xì)胞在EVAL表面自發(fā)聚集形成的微球組織中DP細(xì)胞的標(biāo)記基因ALP，α-SMA和NCAM與平板相比發(fā)生增加[71]，混合新生鼠表皮細(xì)胞注射到裸鼠背部可見新的毛囊的形成。雖然與普通的平板培養(yǎng)相比，三維（Three-dimensional，3D）培養(yǎng)的方法更加精確的模擬體內(nèi)毛發(fā)的發(fā)育情況，但是精確控制毛囊的結(jié)構(gòu)仍然需要考慮一些未知的重要步驟，任何體外模型中得到的結(jié)構(gòu)必須獲得體內(nèi)宿主的效果驗(yàn)證。圖1.2三種體內(nèi)毛囊重建模型[14]。a，硅腔小室模型；b，皮下細(xì)胞注射模型；c，貼片植入模型。Figure1.2Threetypicalinvivomodelsforevaluatingthetrichogenesisofisolatedhairfolliclecells,includingthesiliconchamber(a),subcutaneousinjection(b),andpatchimplantation(c).

博士學(xué)位論文9圖1.3真皮成纖維細(xì)胞的分類[86]。人皮膚根據(jù)沉積的細(xì)胞外基質(zhì)的類型分為不同成纖維細(xì)胞亞型。例如，真皮乳頭富含血小板反應(yīng)蛋白，而網(wǎng)狀成纖維細(xì)胞富含對(duì)齊的ECM纖維沉積。從皮膚中分離的成纖維細(xì)胞保持不同特性暗示了不同的起源，而隨后在體外ECM沉積反映了它們最初分離的位置。Pfi，乳頭狀成纖維細(xì)胞；DPfi，真皮乳頭成纖維細(xì)胞。Figure1.3Classificationofdermalfibroblasts.Humanskininvivohasdistinctfeaturesestablishedbythefibroblastsubtypeswithinthedermisthatcreateanddepositextracellularmatrix(ECM).Forexample,thedermalpapillaisrichinthrombospondin,whereasthereticularfibroblast(Rfi)-depositedmatrixcontainsalignedECMfibres.Fibroblastsisolatedfromtheskinmaintaindistinctidentitiesreflectingtheirorigin,andsubsequentlydepositECMinvitro,whichreflectsthelocationfromwhichtheywereinitiallyisolated.Pfi,papillaryfibroblasts;DPfi,dermalpapillafibroblasts.1.3成纖維細(xì)胞聚集和遷移的平衡纖維化、瘢痕、毛囊真皮毛乳頭細(xì)胞及發(fā)育過程參與間充質(zhì)聚合物形成過程中都伴隨著成纖維細(xì)胞簇的形成。成纖維細(xì)胞簇的存在機(jī)制依賴于細(xì)胞外基質(zhì)的特征、細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境和細(xì)胞-細(xì)胞及細(xì)胞-基質(zhì)的相互作用。研究證明細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-亞基之間的粘連增加會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的凝聚，現(xiàn)有研究成纖維細(xì)胞聚集常用的模型包括離心，懸滴培養(yǎng)，低粘附亞基培養(yǎng)等。成纖維細(xì)胞在促生長(zhǎng)因子條件下（如血清或血清脂質(zhì)激動(dòng)劑溶血磷脂酸）發(fā)生聚集，而在血小板衍生生長(zhǎng)因子（Platelet-derivedgrowthfactor,PDGF）的促遷移條件下不能形成聚集，并且這種聚集和遷移的特征可通過轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)環(huán)境來發(fā)生逆轉(zhuǎn)。1.3.1不同類型的細(xì)胞聚集行?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]毛囊色素[J]. 吳磊,范衛(wèi)新.  國(guó)際皮膚性病學(xué)雜志. 2006(03)
[2]微囊化人頭皮毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠耳毛囊再生的研究[J]. 李宇,林常敏,蔡湘娜,李國(guó)強(qiáng),黃鏗.  中華整形外科雜志. 2006(02)



本文編號(hào)：3265895