近年來,隨著測(cè)序深度與蛋白結(jié)構(gòu)解析技術(shù)的不斷提高,針對(duì)惡性腫瘤的相關(guān)研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。人們逐漸發(fā)現(xiàn),單純的中心法則已經(jīng)無法解釋復(fù)雜的腫瘤惡性生物學(xué)行為。值得關(guān)注的是,表觀遺傳學(xué)的紊亂在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用,而針對(duì)癌癥發(fā)生、進(jìn)展的關(guān)鍵表觀事件,尋找新興抗癌靶點(diǎn)的表觀靶向治療（Epigenetic Therapeutics）是新一代靶向藥物設(shè)計(jì)和研發(fā)的新策略和新方向。溴結(jié)構(gòu)域超末端蛋白（Bromodomain and extra terminal protein,BET）家族是近年來備受關(guān)注的潛在表觀靶點(diǎn)之一。該家族的主要成員包括BRD2,BRD3,BRD4和BRDT（僅在睪丸組織中表達(dá)）,而BRD4是當(dāng)中最受關(guān)注的“明星分子”。作為“表觀閱讀器”（Epigenetic Reader）,BRD4可以直接識(shí)別并結(jié)合于組蛋白乙�；馁嚢彼釟埢�,同時(shí)招募并形成一系列關(guān)鍵的調(diào)控復(fù)合物,如轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)因子P-TEFb（CDK9蛋白的異源二聚體）、Jumonji結(jié)構(gòu)域蛋白6（JMJD6）等協(xié)同調(diào)控眾多癌基因的轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與癌細(xì)胞的急速增殖。關(guān)鍵的癌基因原癌基因蛋白MYC與凋亡... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

BET家族蛋白在各項(xiàng)腫瘤與癌旁組織中mRNA的表達(dá)水平A-C,BET家族蛋白BRD2，BRD3和BRD4在各消化道腫瘤及癌旁組織中mRNA的表達(dá)水平（LIHC為肝細(xì)胞癌，ESCA為食管癌，LIHC為肝細(xì)胞癌，GC為胃癌;紅色代表癌組織，灰色代表

圖 1-3 BRD4 的表達(dá)水平是胃癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素, 在 GSE62254 的胃癌患者相關(guān)測(cè)序數(shù)據(jù)中，BRD4 的高表達(dá)提示患者更短的總生存期(O進(jìn)展生存期(FPS)以及首次進(jìn)展生存期(PFS)；B, 聯(lián)合 GSE14210, GSE15459, GSE29272, GSE51105 以及 GSE62254 數(shù)據(jù)集，BRD4 的表達(dá)水平與相關(guān)臨床指標(biāo)的聯(lián)合預(yù)后分于我院 162 例樣本，BRD4 蛋白的高表達(dá)提示更短的 OS 以及無轉(zhuǎn)移生存期（MFS）；D, 數(shù)據(jù)庫中 BRD4 的 Kaplan-Meier 預(yù)后相關(guān)分析。討 論表觀靶向治療是近年來腫瘤靶向治療的新方向，而 BET 家族無疑是這一領(lǐng)域的蛋白家族之一，在這其中，BRD4 被認(rèn)為最具潛力成為下一代表觀靶向藥物點(diǎn)。最初，BRD4 是作為重要的調(diào)控血液系統(tǒng)腫瘤的分子被大眾所認(rèn)識(shí)的。201nnes Zuber 通過表觀調(diào)控分子小干擾 RNA 文庫的篩選，發(fā)現(xiàn) BRD4 是維持急性病細(xì)胞生存的重要基因。敲除 BRD4 可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，促進(jìn)凋亡，而

人胃黏膜永生化上皮細(xì)胞 GES-1，胃癌細(xì)胞 BGC-823,SGC-7901,MGC-803 C-27 均購自上海中科院細(xì)胞庫；胃癌細(xì)胞 AGS 以及人胚胎腎細(xì)胞 293T 均購自C 細(xì)胞庫；HGC-27 細(xì)胞應(yīng)用含 20%胎牛血清的 1640 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，AGS0%胎牛血清的 F12 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，293T 應(yīng)用含 10%胎牛血清的 DMEM 高糖行培養(yǎng)，其余各細(xì)胞均用含 10%胎牛血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。3.1.4.2 BRD4 敲除穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建本實(shí)驗(yàn)中我們利用 CRISPR/Cas9 技術(shù)進(jìn)行 BRD4 基因敲除，并借助慢病毒感染建 BRD4 敲除（BRD4-/-）的穩(wěn)定胃癌細(xì)胞株。（1）BRD4 敲除病毒：敲除病毒購自上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司，該病毒載體為雙載體（附圖 2-1），為 Cas9 攜帶載體，載體二為 sgRNA 攜帶載體，前者具備嘌呤霉素抗性，而后色熒光蛋白的表達(dá)，病毒滴度均高于 1E+8TU。三條用于引導(dǎo) Cas9 剪切的 sg屬、靶點(diǎn)編號(hào)以及具體的 sgRNA 序列如附圖 2-2 所示；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)



本文編號(hào)：3262512