本文關(guān)鍵詞：益氣除濕方對MG患者及EAMG大鼠血清AChR抗體和可溶性PD-L1分子的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)主要病變部位涉及到人體神經(jīng)和肌肉接頭上的乙酰膽堿的受體(acetylcholine receptor,ACh R),這種受體位于接頭的突觸后膜上,而起主要介導(dǎo)作用的是乙酰膽主要堿受體抗體(acetylcholine receptor antibody,ACh Rab),這種病變過程依賴的是細胞免疫(cell-mediated immunity,CMI),當然補體也參與這個病的這個病的產(chǎn)生發(fā)展過程,重癥肌無力是一種常見的并且非常典型的自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)。該病在臨床上表現(xiàn)為活動后癥狀嚴重的全身或者部分的骨胳肌的勞累甚至無力的現(xiàn)象,但是通過休息后肌無力的癥狀會緩解,甚至部分病人可以達到完全正常的暫時狀態(tài),同時該病具有傍晚較晨起后癥狀較更為嚴重的特征,即晨輕暮重的特點。重癥肌無力目前是一種世界性的不容易治療的疾病,西醫(yī)方面的治療的藥物主要是激素和乙酰膽堿抑制劑,這兩種藥物在治療重癥肌無力的同時會出現(xiàn)一些的不良反應(yīng),中醫(yī)藥在治療重癥肌無力的過程中發(fā)現(xiàn)了一些療效確切,同時又可以緩解西藥不良反應(yīng)的中藥和治療方法。益氣除濕方是導(dǎo)師譚子虎教授從“治痿獨取陽明”的理論出發(fā),結(jié)合眾多醫(yī)家治痿學說以及在臨床上積累的多年的經(jīng)驗,擬定的治療重癥肌無力的中藥制劑,無論是在臨床觀察方面還在在動物實驗研究中,都取得了療效確切的結(jié)論。第一部分益氣除濕方對MG患者臨床療效及血清ACh R抗體和可溶性PD-L1分子的影響目的:觀察益氣除濕方治療重癥肌無力的臨床療效,包括臨床療效顯效率,絕對評分和相對評分,中醫(yī)證候療效,中醫(yī)證候積分;觀察益氣除濕方對重癥肌無力患者血清ACh R抗體滴度的影響;觀察益氣除濕方對重癥肌無力患者血清可溶性PD-L1分子含量的影響,從免疫學指標判定益氣除濕方對重癥肌無力癥狀改善的機制研究。方法:觀察52例符合納入標準的重癥肌無力患者,按照事先準備好的隨機序列表,將受試者按1:1比例隨機分配到兩個組中:治療組26例;對照組26例,完全隨機設(shè)計。對照組服用強的松聯(lián)合溴吡斯的明片,治療組在對照組治療方法上給予益氣除濕方煎劑口服。治療組、對照組全部用藥及觀察均為8周。所有受試患者分別于治療前、治療結(jié)束后進行問診、查體及相關(guān)生化檢查,填寫臨床觀察表,進行療效評價及安全性觀察。觀察治療前后的臨床療效,絕對評分和相對評分,中醫(yī)證候療效,中醫(yī)證候積分,并進行統(tǒng)計學分析;使用人乙酰膽堿受體抗體(ACh Rab)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒測定治療前后患者血清ACh R抗體滴度,并進行統(tǒng)計學分析;使用人細胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒血清可溶性PD-L1分子含量,并進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果:益氣除濕方對重癥肌無力具有明顯的療效,從總的臨床療效積分變化統(tǒng)計:治療組顯效率96.15%,對照組顯效率88.46%,二者相比較,治療組療效優(yōu)于對照組,具有顯著性差異(P0.05);從絕對評分來看,治療后治療組與對照組的絕對評分分別為5.54±4.12、7.71±1.78,二者相比較,治療組療效優(yōu)于對照組,具有顯著性差異(P0.05);治療組與對照組相對評分分別為53.59±25.33、37.89±19.93,二者相比較,治療組療效優(yōu)于對照組;從中醫(yī)證候積分變化統(tǒng)計:治療組有效率88.46%,對照組有效率為57.69%,兩組中醫(yī)證候改善情況有顯著差異(P0.05),提示治療組在中醫(yī)證候改善方面明顯優(yōu)于對照組。研究還發(fā)現(xiàn),益氣除濕方治療組有2例患者出現(xiàn)了輕度惡心嘔吐的胃腸道的輕度的不適表現(xiàn),未影響到實驗的進程,未發(fā)現(xiàn)益氣除濕方治療組有在心電圖、肝功能、腎功能、空腹血糖受損、股骨頭壞死等方面的病理現(xiàn)象的產(chǎn)生;西藥對照組治療后出現(xiàn)輕度肝功能下降的有2個人,表現(xiàn)在總膽紅素和轉(zhuǎn)氨酶的升高,除此之外空腹血糖增高高于6.1mmol/L的有1人,經(jīng)統(tǒng)計學分析兩組之間存在于差異性,說明益氣除濕方治療組較西藥對照組相比,表現(xiàn)出的安全性方面的指數(shù)更具有可靠性。治療后治療組與對照組血清ACh R抗體水平與治療前相比顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);治療后治療組與對照組血清可溶性PD-L1分子水平與治療前相比降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:益氣除濕方聯(lián)合基礎(chǔ)西藥能明顯改善重癥肌無力患者的臨床癥狀,中醫(yī)證候,絕對評分和相對評分,且優(yōu)于單獨應(yīng)用基礎(chǔ)西藥治療,同時未見無明顯毒副作用。益氣除濕方能降低血清ACh R抗體滴度,并優(yōu)于對照組。益氣除濕方與西藥均能升高血清可溶性PD-L1含量,但二者無明顯差異性。益氣除濕方聯(lián)合基礎(chǔ)西藥通過增加可溶性PD-L1的血清含量,直接影響受體/配體相互作用的PD-1/PD-L1負性共刺激信號,PD-1/PD-L1聯(lián)合作用共同阻滯CD4+和CD8+T細胞的增殖以及IL-2的分泌,在細胞周期的G0/G1期細胞周期時間延長,并減少IFN-γ,IL-2和IL-10的含量,這些細胞因子的分泌減少,使得乙酰膽堿受體抗體合成減少;同時可溶性PD-L1分子可以參與血液循環(huán),同細胞因子一樣,在機體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用,增加可溶性PD-L1分子的含量,作為一種阻斷性分子,在與表面PD-1結(jié)合單個核細胞的發(fā)生率增加,即可減少膜型PD-L1和PD-1在血管內(nèi)皮細胞的細胞膜上合成的可能性,同時組織和細胞,單核細胞表面的相互作用顯著性增強,同時活化T細胞獲得足夠強度的負控制信號,避免過量T細胞的活化增殖性,對自身抗原的免疫反應(yīng)引起的持續(xù),減少組織損傷。減少乙酰膽堿受體抗體的合成可以減少乙酰膽堿受體的抗體,抑制功能的緩慢溶解,補體介導(dǎo)的同時,突觸后膜和突觸后膜受體數(shù)量增加,從而減少重癥肌無力的癥狀。第二部分益氣除濕方對EAMG大鼠血清ACh R抗體和可溶性PD-L1分子的影響目的:制備實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)大鼠模型,通過服用益氣除濕方后,觀察大鼠的臨床癥狀、血清可溶性PD-L1及ACh R抗體的含量變化,探討重癥肌無力的發(fā)病機制及益氣除濕方治療重癥肌無力的作用機制,為進一步在臨床上更好的運用益氣除濕方提供理論基礎(chǔ)。方法:將健康成年的雌性的Lewis大鼠40只,隨機地抽取10只作為空白對照組(A組),剩余大鼠皮下注射鼠源ACh R-α亞基97-116肽段進行EAMG造模,把造模后的實驗動物隨機分為模型西藥對照組(B組)、西藥對照組(C組)、益氣除濕方組(D組),每組為10只,目前4組。造模成功2周后,A組與B組給予生理鹽水灌胃,C組給予強的松灌胃,D組給予益氣除濕方灌胃,4周后進行Lennon癥狀分級的分值測定、血清ACh R抗體滴度的測定和血清可溶性PD-L1含量的檢測。結(jié)果:Lennon臨床評分達0.5-1級,且隨著時間的延長肌無力癥狀愈加顯著,至造模結(jié)束時臨床評分在1級以上者占造模數(shù)量的75.39%;使用五赫茲連續(xù)10次的低頻電刺激檢測28只已造模完畢的實驗大鼠,共有25只大鼠第五個肌電波的波幅比第一個肌電波的波幅降低百分之十以上,即衰減率大于或等于百分之十,平均為(19.35士3.89),其余3只大鼠的電衰減率小于百分之十,而空白對照組第五個肌電波的波幅比第一個肌電波的波幅降低均不超過百分之十;新斯的明試驗陽性者為26只。EAMG大鼠血清ACh R抗體含量較健康大鼠含量高,可溶性PD-L1分子含量較健康大鼠含量低,經(jīng)統(tǒng)計學分析,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。說明血清ACh R抗體、可溶性PD-L1分子在重癥肌無力的發(fā)病中具有重要意義。益氣除濕方、強的松均能改善EAMG大鼠肌無力癥狀,影響大鼠的體重,經(jīng)統(tǒng)計學分析,益氣除濕方明顯優(yōu)于強的松(P0.05)。益氣除濕方組、強的松組血清ACh R抗體含量均較模型組明顯降低(P0.05)。益氣除濕方、強的松均能降低EAMG大鼠血清ACh R抗體濃度,益氣除濕方減低血清ACh R抗體濃度的程度不及強的松(P0.05)。益氣除濕方、強的松均能增加EAMG大鼠血清可溶性PD-L1分子含量,益氣除濕方增加血清可溶性PD-L1分子含量的程度優(yōu)于強的松(P0.05)。結(jié)論:用皮下注射鼠源性ACh R-α亞基97-116肽段可以有效制作EAMG模型,并且具有成功率高的特點。益氣除濕方能提高EAMG大鼠的體重、肌力和運動能力,抑制EAMG模型大鼠血清中ACh R抗體濃度,增加血清可溶性PD-L1分子含量。益氣除濕方聯(lián)合基礎(chǔ)西藥通過增加可溶性PD-L1的血清含量,直接影響受體/配體相互作用的PD-1/PD-L1負性共刺激信號,PD-1/PD-L1聯(lián)合作用共同阻滯CD4+和CD8+T細胞的增殖以及IL-2的分泌,在細胞周期的G0/G1期細胞周期時間延長,并減少IFN-γ,IL-2和IL-10的含量,這些細胞因子的分泌減少,使得乙酰膽堿受體抗體合成減少;同時可溶性PD-L1分子可以參與血液循環(huán),同細胞因子一樣,在機體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用,增加可溶性PD-L1分子的含量,作為一種阻斷性分子,在與表面PD-1結(jié)合單個核細胞的發(fā)生率增加,即可減少膜型PD-L1和PD-1在血管內(nèi)皮細胞的細胞膜上合成的可能性,同時組織和細胞,單核細胞表面的相互作用顯著性增強,同時活化T細胞獲得足夠強度的負控制信號,避免過量T細胞的活化增殖性,對自身抗原的免疫反應(yīng)引起的持續(xù),減少組織損傷。減少乙酰膽堿受體抗體的合成可以減少乙酰膽堿受體的抗體,抑制功能的緩慢溶解,補體介導(dǎo)的同時,突觸后膜和突觸后膜受體數(shù)量增加,最終達到改善改善EAMG大鼠肌無力癥狀。
【關(guān)鍵詞】：益氣除濕方 重癥肌無力 EAMG AChR抗體 可溶性PD-L1分子
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要5-10
• ABSTRACT10-16
• 英文縮略詞表16-17
• 前言17-21
• 第一部分 益氣除濕方對MG患者臨床療效及血清ACh R抗體和可溶性PD-L1分子的影響21-39
• 一 病例選擇21-24
• 二 研究方法24-32
• 三 統(tǒng)計方法32
• 四 臨床資料分析32-34
• 五 實驗結(jié)果34-37
• 六 結(jié)論37-39
• 第二 部分益氣除濕方對E A M G大 鼠血清A C h R抗 體和可溶性PD-L1分子的影響39-55
• 一 實驗?zāi)康?/span>39
• 二 實驗材料39-41
• 三 實驗對象41-43
• 四 實驗方法43-48
• 五 統(tǒng)計方法48
• 六 實驗結(jié)果48-53
• 七 結(jié)論53-55
• 討論55-80
• 一 重癥肌無力的發(fā)病機制55-62
• 二 中醫(yī)學對重癥肌無力的認識62-68
• 三 益氣除濕方的方藥分析及配伍特點68-72
• 四 臨床研究結(jié)果及療效分析72-75
• 五 EAMG模型制作75-77
• 六 益氣除濕方對EAMG大鼠的療效機制77-80
• 結(jié)語80-82
• 參考文獻82-92
• 附錄一：綜述92-99
• 參考文獻96-99
• 附錄二：攻讀學位期間發(fā)表論文99-100
• 附錄三：定量重癥肌無力評分QMG表100-101
• 致謝101

  本文關(guān)鍵詞：益氣除濕方對MG患者及EAMG大鼠血清AChR抗體和可溶性PD-L1分子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326008