目的:觀察玉屏風(fēng)散對(duì)Lewis肺癌荷瘤鼠抑瘤及髓源抑制性細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用,從整體、細(xì)胞、分子水平來闡述玉屏風(fēng)散調(diào)節(jié)免疫和抑瘤可能的作用機(jī)制。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.模型制備:6周齡,雄性C57BL/6小鼠,右前肢背部皮下注射1×10⁶個(gè)LLC細(xì)胞,建立Lewis肺癌荷瘤鼠皮下移植瘤模型。2.分組給藥:將小鼠分為模型組（生理鹽水）和實(shí)驗(yàn)組（2340mg/ml玉屏風(fēng)散）,200ul/次灌胃,每天一次,連續(xù)21天。3.小鼠腫瘤體積、脾臟重量和生存期的觀察。4.流式檢測(cè)小鼠脾臟和腫瘤組織免疫細(xì)胞的比例。5.采用Quantitative Real-time PCR法檢測(cè)腫瘤組織MDSCs免疫抑制相關(guān)基因的表達(dá)。6.采用Western blotting法檢測(cè)腫瘤組織MDSCs增殖相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn):1.提取模型組小鼠骨髓細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)48h,用7mg/ml玉屏風(fēng)散干預(yù)48h,與空白做對(duì)照,流式檢測(cè)骨髓細(xì)胞MDSCs及亞群比例。2.提取模型組小鼠骨髓細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)48h,用7mg/ml玉屏風(fēng)散干預(yù)48h,與空白做對(duì)照,CCK8法檢測(cè)骨髓細(xì)胞增殖,流式檢測(cè)... 

【文章來源】：上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

玉屏風(fēng)散對(duì)Lewis肺癌荷瘤鼠腫瘤體積、生存期、脾臟重量的影響，*代表P＜0.05

254小結(jié)玉屏風(fēng)散具有改善Lewis肺癌荷瘤鼠免疫功能的效應(yīng)可能與降低MDSCs及亞群的比例、降低Treg的比例、增加CD3+CD4+、CD3+CD8+T細(xì)胞的比例有關(guān)。三、玉屏風(fēng)散對(duì)腫瘤組織中MDSCs免疫抑制功能相關(guān)基因的影響1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同前。1.2實(shí)驗(yàn)試劑乙醇國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司氯仿國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司Trizolambion異丙醇國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司引物上海捷瑞生物有限公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒TakaraDEPC水生工生物工程（上海）股份有限公司1.3實(shí)驗(yàn)耗材及儀器無酶EP管Cornning8聯(lián)管AXYGENPCR儀BIO-RAD核酸擴(kuò)增儀Appliedbiosysterms高速冷凍離心機(jī)Thermofisherscientific組織研磨儀上海凈信科技有限公司

27Stage1：Reps195℃30sStage1：Reps4095℃5s60℃30s2.4引物設(shè)計(jì)ROSF：AGATTCCGTCCATCAAGT；R：CAGTCCTCGGGTAGTCAAArg-1F：AGTCAGTCCCTGGCTTAT；R：AAGACAGCAGAGGAGGTGSTAT3F：CCAGCAACCTGACTTTCG；R：TTCAGACCCGCCAACAAAGAPDHF：GTGGAGATTGTTGCCATCAACGA；R：CCCATTCTCGGCCTTGACTGT2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS23.0軟件分析數(shù)據(jù)，兩組數(shù)據(jù)之間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，“*”表示P＜0.05。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，與模型組對(duì)比，實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤組織STAT3、ROS、Arg-1mRNA的表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05）。圖4：小鼠腫瘤組織STAT3、ROS、Arg-1mRNA表達(dá)水平，*代表P＜0.05。model為模型組，ypfs為實(shí)驗(yàn)組。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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