發(fā)布時(shí)間：2021-06-16 19:20

　　目的制備雙模態(tài)靶向納米微泡造影劑FA-NBs-IR780,充分檢測(cè)其各種基本特性,通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)腫瘤的靶向性及超聲/近紅外熒光雙模態(tài)成像效果,同時(shí)進(jìn)一步在體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)FA-NBs-IR780介導(dǎo)近紅外激光照射對(duì)腫瘤的光熱治療作用,為腫瘤的分子靶向造影和治療提供新的思路。方法1.將10 mg DPPC、4 mg DSPE-PEG2000-FA和0.3 mg IR-780混合,采用改良薄膜水化法,制備出雙模態(tài)靶向納米微泡造影劑FA-NBs-IR780。使用透射電鏡對(duì)FA-NBs-IR78的形態(tài)和粒徑進(jìn)行觀察,粒度/電位分析儀進(jìn)一步檢測(cè)其粒徑分布情況和表面電位,測(cè)定不同溫度下FA-NBs-IR780的粒徑和濃度以評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性,CCK-8法檢測(cè)IR-780對(duì)細(xì)胞的毒性反應(yīng),自制造影裝置檢測(cè)FA-NBs-IR780在體外的超聲造影成像效果,激光共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)FA-NBs-IR780在體外的熒光成像效果。2.利用激光共聚焦顯微鏡定性分析雙模態(tài)靶向納米微泡造影劑FA-NBs-IR780對(duì)腫瘤細(xì)胞U87和MDA-MB-231的靶向性,并與非腫瘤細(xì)胞293T相對(duì)照。流式細(xì)胞儀定量分... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

IR-780的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(引用自文獻(xiàn)[89])

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-23-料（如金納米棒等）[107,108]，熒光染料（如吲哚菁綠等）[109]，有機(jī)材料（如硫化銅納米粒子、普魯士藍(lán)納米粒子、聚吡咯等）[110,111]。圖2：光熱治療模式圖（引用自文獻(xiàn)[84]）同時(shí)，熒光成像技術(shù)和光熱治療技術(shù)都需是通過光為媒介，將診斷與治療兩個(gè)過程一體化，理論上具有協(xié)調(diào)性和可操作性[89,103,112-115]。例如，F(xiàn)u等制備了包裹四氧化三鐵納米粒子的普魯士藍(lán)納米粒子Fe3O4@PB，不僅明顯的有MRI增強(qiáng)作用，而且該復(fù)合納米粒子在近紅外激光照射下表現(xiàn)出較高的光熱效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了磁共振成像和光熱療法的功能被整合[116]；Zhang等在硫酸銅納米粒子的表面連接上了DPG，形成CuS@DPGNPs，該納米粒子可增強(qiáng)MRI成像，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了MRI引導(dǎo)下的光熱治療功能[117]。這些新型的多功能造影劑的研制，同時(shí)滿足了腫瘤診斷及治療的要求，達(dá)到了腫瘤個(gè)體化治療及實(shí)施監(jiān)測(cè)的目的，為影像學(xué)的多功能發(fā)展提供了新的方向。五、腫瘤分子影像技術(shù)目前存在的問題由于各種成像技術(shù)原理的不同，各種成像技術(shù)對(duì)疾病的診斷也必然存在一定的缺陷和盲區(qū)。納米級(jí)靶向超聲造影劑作為一種新型超聲造影技術(shù)，要求粒徑的尺寸更加嚴(yán)格，種類也更加多樣化，其不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及制作工藝也變得越來越復(fù)雜，而且如何改善納米微泡的穩(wěn)定性、獲取最佳粒徑，也需要進(jìn)一步研究。近紅外熒光成像技術(shù)的穿透力也是限制其發(fā)展的一個(gè)瓶頸。將多種成像模式整合到一起，利用不同成像模式的優(yōu)點(diǎn)，盡可能在一次對(duì)患者檢查中獲得更多、更全面的信息，會(huì)顯著提高正確診斷率，使腫瘤得到早期診斷、精準(zhǔn)治療。盡管現(xiàn)在已有較多的融合成像技術(shù)[118]，

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文-31-以上實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。2.7雙模態(tài)靶向納米微泡造影劑FA-NBs-IR780的近紅外熒光成像為了觀察IR-780是否融合于納米微泡上及其是否具有近紅外熒光成像效果，我們采用了CLSM觀察。首先將100μL的FA-NBs-IR780混懸液用0.9mL1×PBS溶液稀釋10倍，取一滴置于玻片上，置于CLSM下觀察（60×油鏡）。2.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。用Image-ProPlus6軟件對(duì)圖片中的亮度值進(jìn)行計(jì)算，統(tǒng)計(jì)軟件采用GraphPadPrism5，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，以p<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1FA-NBs-IR780的形態(tài)學(xué)觀察自制的雙模態(tài)靶向納米微泡造影劑FA-NBs-IR780為淡褐色混懸液。我們用TEM精確的觀察了納米微泡的形態(tài)。TEM結(jié)果顯示，F(xiàn)A-NBs-IR780呈規(guī)則的球形氣泡，表面形態(tài)光滑平整、顏色分布均勻，粒徑分布在500nm左右，且在水溶液中分散度較好（圖1-A）。SonoVue亦呈規(guī)則的球形氣泡，粒徑都大于1um，分布在1～2um左右（圖1-B）。未充入C3F8氣體的脂質(zhì)體呈小的實(shí)心球體（圖1-C）。圖1.透射電鏡觀察FA-NBs-IR780、SonoVue及脂質(zhì)體。（A）FA-NBs-IR780納米氣泡；(B)SonoVue微米氣泡；(C)未充入C3F8氣體的脂質(zhì)體

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