濾泡輔助性T細(xì)胞（T Follicular helper cells,Tfh）是效應(yīng)T細(xì)胞（effector T cells）的一種,由初始T細(xì)胞（na?ve T cells）被抗原遞呈細(xì)胞激活后分化而來(lái)。不同于效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生不同的白介素發(fā)揮效應(yīng)作用,Tfh主用通過(guò)進(jìn)入濾泡后與抗原特異性的B細(xì)胞相互作用,發(fā)揮著促進(jìn)生發(fā)中心（germinal center）的形成,漿細(xì)胞與抗體的產(chǎn)生,以及記憶B細(xì)胞形成的作用。Tfh的發(fā)育是多階段多層次的,由多條信號(hào)通路所調(diào)控,包括TCR信號(hào),ICOS信號(hào)等。AKT又稱(chēng)為蛋白激酶B（PKB）,是一種絲氨酸蘇氨酸激酶。同時(shí),AKT具有三種亞型,AKT1,AKT2以及AKT3,它們具有高度相似的蛋白結(jié)構(gòu),都具有激酶活性,但是在不同的細(xì)胞中其表達(dá)量有所不同,而不同AKT亞型發(fā)揮的功能也有所不同。作為重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,AKT信號(hào)通路處于一個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控的樞紐地位,例如AKT信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞存活,細(xì)胞周期與增殖,細(xì)胞遷移,腫瘤發(fā)生等。研究也已發(fā)現(xiàn),FOXO1,mTORC等AKT的下游調(diào)節(jié)分子對(duì)Tfh的發(fā)育分化起著的重要調(diào)控作用。因此,我們?cè)诖送茰y(cè)AKT是... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

AKT信號(hào)通路中的底物與功能(ManningandToker,2017)

第三章Tfh發(fā)育需要AKT磷酸化27第三章Tfh發(fā)育需要AKT磷酸化3.1AKT亞型在Tfh中的表達(dá)為解答Akt亞型在Tfh中的表達(dá)情況，我們決定在小鼠模型中誘導(dǎo)分化Tfh細(xì)胞，檢測(cè)Akt亞型mRNA表達(dá)情況。InfluenzaA/PuertoRico/8/34H1N1(PR8)病毒是小鼠適應(yīng)株，被應(yīng)用于多種免疫反應(yīng)的研究。在PR8感染下小鼠會(huì)產(chǎn)生效應(yīng)CD4+T細(xì)胞和殺傷性CD8+T細(xì)胞，以及產(chǎn)生抗原特異性抗體來(lái)清除病毒，在Tfh分化發(fā)育的研究中被多次使用(Yooetal.,2012,Leonetal.,2014,Heetal.,2018)。因此，我們首先使用流感病毒PR8，以滴鼻的方式給小鼠攻毒，以此激活免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)不同階段的Tfh細(xì)胞產(chǎn)生。在小鼠感染后第10～11天(Tfh分化擴(kuò)增的頂峰)，我們收取小鼠脾臟和肺門(mén)引流淋巴結(jié)(lungdraininglymphnode)細(xì)胞，通過(guò)富集CD4+T細(xì)胞，并使用抗體染色CD4、CD44、CD62L表面分子來(lái)區(qū)分naiveCD4+T細(xì)胞(CD4+CD44loCD62Lhi)和activatedCD4+T(CD4+CD44hiCD62LloT細(xì)胞，從activatedCD4+T細(xì)胞中分選小鼠non-Tfh(PD-1loCXCR5lo，pre-Tfh(PD-1miCXCR5mi)和Tfh(PD-1hiCXCR5hi)細(xì)胞(圖3.1)。圖3.1小鼠流感模型中Tfh的圈門(mén)策略小鼠淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)富集后，通過(guò)FSC與SSC去除粘連細(xì)胞；在CD4+T細(xì)胞中圈出CD44hiCD62Llo激活的T細(xì)胞；從中圈取CXCR5loPD-1lonon-Tfh細(xì)胞,CXCR5miPD-1mipre-Tfh細(xì)胞,和CXCR5hiPD-1hiTfh細(xì)胞。

Tfh和non-Tfh中Akt亞型mRNA的表達(dá)


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