心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnⅠ）是心肌梗死診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”,臨床多采用大型免疫分析儀器檢測,靈敏度可達(dá)到10pg/mL級別,但缺點(diǎn)是對操作人員專業(yè)性要求高、儀器購買和維護(hù)成本高。側(cè)向免疫層析技術(shù)在心肌標(biāo)志物檢測方面已得到廣泛應(yīng)用,具有操作簡單、反應(yīng)快速、儀器便攜等優(yōu)點(diǎn),但發(fā)展受到了靈敏度的制約。研究者通過金染/銀染信號放大膠體金光學(xué)信號、更高靈敏度的磁信號代替光學(xué)信號、引入功能性核酸/蛋白的方法提高檢測靈敏度,但又帶來其他問題,如背景升高、耗時(shí)長、對材料要求高、成本高等。納米探針的構(gòu)建方式常常決定層析檢測的效果。探針上抗體的數(shù)量、取向、免疫活性以及與載體結(jié)合的牢固程度則是影響探針功能的關(guān)鍵因素。本文針對這些關(guān)鍵問題,從靈敏、準(zhǔn)確、快速、降低成本、易于批量制備等幾方面入手,著眼于抗體在微球表面的修飾技術(shù),建立了幾種新型熒光定量納米探針的制備方法,并應(yīng)用于心肌標(biāo)志物的檢測研究。主要工作如下:1)鏈霉親和素-生物素介導(dǎo)的信號放大法。本部分利用微球作為基底,生物素-核心鏈霉親和素-生物素-抗體層層結(jié)合,最大限度增加了熒光分子和抗體分子在探針上的負(fù)載量,可顯著提高檢測靈敏度和特異性。cTnⅠ最低檢出限... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

納米探針在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：（a）體內(nèi)成像[6]

東南大學(xué)博士論文4有西安金磁一枝獨(dú)秀（圖1.2b）。盡管量子點(diǎn)法和磁顆粒法市場占有率低，但在當(dāng)前側(cè)向免疫層析產(chǎn)品同質(zhì)化嚴(yán)重的大環(huán)境下，二者的技術(shù)特色和發(fā)展?jié)摿χ档每隙�。圖1.2（a）側(cè)向免疫層析廠家省份分布；（b）免疫層析產(chǎn)品類型分布1.2.2.2側(cè)向免疫層析技術(shù)的應(yīng)用近年來，側(cè)向免疫層析技術(shù)的應(yīng)用涵蓋了人畜疾病檢測、毒品篩查、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等諸多領(lǐng)域[25]。其中，應(yīng)用最廣泛、最具研究價(jià)值和技術(shù)挑戰(zhàn)性的當(dāng)屬人類疾病檢測。下面介紹幾種最具代表性的項(xiàng)目。A）心肌標(biāo)志物[26，27]心血管疾病包括一系列心臟和血管功能紊亂，是全球人群首位死因。急性發(fā)作心血管病人的搶救對時(shí)效性的要求遠(yuǎn)高于其他種類疾病，POCT恰恰能夠滿足這一需求，因此心血管疾病指標(biāo)檢測是側(cè)向免疫層析發(fā)展最快的方向。心肌標(biāo)志物包括cTnI、肌紅蛋白（Myo）等早期診斷標(biāo)志物，氨基末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）等預(yù)后判斷標(biāo)志物等。通過對多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測，可以對病人進(jìn)行快速分流，及時(shí)對癥治療。其中，極低濃度（1-10pg/mL數(shù)量級）的cTnI和NT-proBNP對疾病預(yù)測、排除、疾病發(fā)展預(yù)測和預(yù)后也具有重要意義，對檢測靈敏度提出了更高要求。B）糖尿病我國糖尿病患者和血糖異常人群規(guī)模龐大[28]，分別占總?cè)丝诘?/10和1/2。進(jìn)行血糖檢測能夠有效預(yù)防和控制糖尿病，血糖儀小型便攜，糖尿病患者可以在家庭中自行操作，隨時(shí)監(jiān)測自身血糖水平，進(jìn)行自我健康管理，并為醫(yī)生后續(xù)治療方案提供依據(jù)，已經(jīng)較為普及[29]。糖化血紅蛋白[30]是糖尿病檢測另一項(xiàng)重要指

第一章緒論7圖1.3（a）試紙條基本結(jié)構(gòu)；（b）試紙條上生物活性物質(zhì)分布；（c）陽性樣本層析過程；（d）陰性樣本層析過程1.3納米探針的構(gòu)建與信號放大為使側(cè)向免疫層析檢測適應(yīng)當(dāng)前體外診斷對靈敏度的高要求，研究人員一直致力于優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，提高層析技術(shù)水平，包括不同類型納米顆粒和信號分子的使用、檢測信號二次染色放大、新型納米探針的構(gòu)建等。納米顆粒的類型和相應(yīng)信號種類已在1.2.2.1小節(jié)中介紹，本節(jié)重點(diǎn)說明其他幾類方案。1.3.1檢測信號二次染色放大當(dāng)待測樣本中抗原濃度極低時(shí)，檢測線捕獲的探針太少，信號無法被檢測，導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性。此時(shí)，若將信號成倍放大，強(qiáng)度達(dá)到觀察者肉眼或檢測儀器的分辨率，即可被檢測到。膠體金具有模擬酶活性，能夠催化金、銀離子還原并沉積在其表面，使顆粒粒徑增大，并呈更易觀察的黑色。利用這一原理，在免疫層析完成后，通過金染或銀染，可達(dá)到提高靈敏度的目的。隋森芳等[36]首次利用氯金酸和羥胺混合液對固定在NC膜上的膠體金進(jìn)行原位增強(qiáng)，反復(fù)增強(qiáng)一次和兩次后，膠體金的粒徑分別增加到60nm和200nm，對h-IgG蛋白的檢測靈敏度提高到了200pg/mL和10pg/mL，硝酸銀和乙酸銀染色也不同程度提高了靈敏度（圖1.4a～d）。Fu等[37]設(shè)計(jì)了一種雙向進(jìn)液的卡殼結(jié)構(gòu)，將試紙條固定其中，優(yōu)化了金染的步驟，使人絨毛膜促性腺激素胎牛血清溶液的最低檢出限降低了4


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