研究目的前列腺素是啟動人類分娩的最后通路,因此明確前列腺素的合成調(diào)控對解析分娩動因至關(guān)重要。人羊膜成纖維細胞是前列腺素的重要來源,我們前期研究發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素可以通過前列腺素E2（PGE2）激活cAMP/PKA/CREB信號通路從而促進人羊膜成纖維細胞環(huán)氧合酶-2（COX-2）表達和前列腺素合成,但介導(dǎo)cAMP/PKA信號通路激活的PGE2受體亞型及PKA磷酸化細胞核內(nèi)CREB的途徑尚不清楚。本研究旨在明確PGE2受體（EP）及PKA錨定蛋白（AKAP）在cAMP/PKA/CREB通路激活及COX-2表達誘導(dǎo)中的作用,為解析人類分娩啟動機制和臨床干預(yù)分娩時機提供新思路。研究方法將原代培養(yǎng)人羊膜成纖維細胞作為細胞模型,采用RNA測序、過表達質(zhì)粒和小干擾RNA轉(zhuǎn)染、受體激動劑和抑制劑、實時熒光定量PCR、蛋白印跡雜交、細胞免疫熒光染色和ELISA等實驗技術(shù)探討PGE2受體（EP2、EP4）及PKA錨定蛋白（AKAP79、AKAP95）在cAMP/PKA/CREB信號通路激活及COX-2表達誘導(dǎo)中的作用,并研究EP2、EP4及AKAP79、AKAP95的表達調(diào)控;同時收集足月?lián)衿谄蕦m產(chǎn)（無產(chǎn)程... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

2010年早產(chǎn)兒數(shù)量位列全球前十的國家（引自LawnJE.Lance.2012）

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文9圖四cAMP/PKA信號通路示意圖（引自ConstantineA.Stratakis.Front.Endocrinol.2016）迄今為止，本課題組已經(jīng)初步揭示了cAMP/PKA/CREB信號通路在人胎膜前列腺素合成尤其是羊膜成纖維細胞COX-2表達誘導(dǎo)及PGE2合成促進中的關(guān)鍵作用，但cAMP/PKA/CREB信號通路激活的機制尚未得到完全解析，具體疑問包括以下兩點：1、研究已證實cAMP/PKA/CREB信號通路是由PGE2所激活的(63)，但介導(dǎo)PGE2作用的受體類型目前仍不清楚；2、CREB不管是否被激活都存在于細胞核內(nèi)(72)，而PKA如何精準磷酸化細胞核內(nèi)CREB仍未可知。因此，本課題我們針對這兩個問題開展了研究。PGE2受體包括EP1、EP2、EP3、EP4四種亞型，其中可介導(dǎo)激活cAMP/PKA信號通路的受體包括EP2和EP4(73,74)。以往認為，EP2和EP4受體雖由不同基因編碼，但它們發(fā)揮的功能相同，都介導(dǎo)促進細胞內(nèi)cAMP生成，激活cAMP/PKA通路。然而，近年來有多篇研究報道EP4受體除了激活cAMP/PKA通路外，還可以激活磷脂酸肌醇3-激酶（PI3K）通路(75-77)。更有趣的是，PI3K的激活還可以抑制cAMP/PKA通路的活性(77,78)。這些結(jié)果提示我們，EP2及EP4受體激活的下游通路和發(fā)揮的功能在人羊膜成纖維細胞中可能同樣存在差異，闡明及區(qū)分EP2及EP4受體在人羊膜成纖維細胞COX-2表達及PGE2合成中的功能非常有必要，其研究成果可為特異性抑制前列腺素合成及早產(chǎn)發(fā)生提供策略。cAMP/PKA作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可將細胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細胞內(nèi)特定靶點如CREB等，但由于細胞內(nèi)廣泛分布著各種底物，PKA如何特異性發(fā)揮其作用成為

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文27第一部分前列腺素E2受體EP2和EP4在人羊膜成纖維細胞cAMP/PKA通路激活和COX-2表達誘導(dǎo)中的作用研究1.1引言如緒論所述，由PGE2激活的cAMP/PKA信號通路在誘導(dǎo)COX-2表達的過程中起著關(guān)鍵作用(84,85)，在人羊膜成纖維細胞也如此(63)。PGE2的作用是通過細胞膜上與G蛋白相偶聯(lián)的受體所介導(dǎo)的。目前發(fā)現(xiàn)PGE2受體至少存在EP1、EP2、EP3、EP4四種亞型，分別由四個不同的基因編碼(86,87)。其中，EP1受體偶聯(lián)q型G蛋白（Gq），促進細胞內(nèi)第二信使三磷酸肌醇和二酰甘油（IP3/DAG）的釋放，使Ca2+濃度增加，激活PKC介導(dǎo)的信號通路(88)；EP3受體主要與抑制型G蛋白（Gi）偶聯(lián)，抑制cAMP的生成(89)；而EP2和EP4受體偶聯(lián)活化型的G蛋白（Gs），促使cAMP增加，激活PKA介導(dǎo)的信號通路(73,74)（圖1-1）。由此可見，EP2和EP4受體可能介導(dǎo)PGE2通過cAMP/PKA信號通路對人羊膜成纖維細胞COX-2表達的誘導(dǎo)作用。圖1-1PGE2受體下游激活的信號通路Fig.1-1SignalingpathwaysactivatedbytheEPreceptorsforPGE2


本文編號：3224512