[目的]肝臟缺血再灌注損傷（HIRI）是指在肝臟切除及肝移植過程中,由于臨時(shí)性的阻斷肝臟血供造成肝臟受損,當(dāng)給予恢復(fù)正常血供后肝臟損傷情況未得到緩解反而加重的現(xiàn)象。在HIRI中肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（LSECs）是最早受到損傷的細(xì)胞,被稱為HIRI中的第一道防線。HIRI中氧化應(yīng)激的發(fā)生與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的損傷關(guān)系密切。因此,如能有效的保護(hù)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的功能及減輕氧化應(yīng)激的發(fā)生,則有利于保護(hù)HIRI。目前臨床上還沒有研制出能減輕HIRI中氧化損傷的藥物,因此開發(fā)出高效、低毒的抗氧化損傷的藥物成了預(yù)防HIRI中有待解決難題。天麻素（GSTD）作為一種有效的抗氧化劑和氧自由基清除劑,主要被用于神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)疾病的治療,并且具有肝臟保護(hù)的功能。因此本研究的目的是探討GSTD在LSECs氧化損傷中的保護(hù)作用及其分子機(jī)制,為臨床HIRI的防治提供理論依據(jù)。[方法]首先使用1mM H2O2構(gòu)建LSECs的氧化應(yīng)激模型,同時(shí)給予1、10及50μM GSTD處理細(xì)胞,通過檢測ROS、MDA的含量,評價(jià)了 GSTD在LSECs氧化應(yīng)激過程中的緩解作用;通過TUNEL法、Annexin V-FITC-PI雙染法檢... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?１?Ｈ２０２對ＬＳＥＣｓ存活率的影響??

?１??２９０．０－１?－？－?Ｈ｜〇，?？?１０?ｍＭ?ＯＳＴＤ?＿＾＿?４?Ｓ〇?＾?ＧＳＴＯ?＊＊?＊？?＊??一?ｍ?９０?ＪＬ?？??ｒｏ?ｅｏ?Ａ?ｌ＇°?ｎ??ｒ：＾?Ｉ：Ａ?ｎＡ?｜ｓｎ?ｆｌＬ??Ｑ?ＩＩ?，１１，１，１，１１，１１，１?〇?丄』Ｉ?Ｉ???？－ｒ＊?【１?Ｌ??０?ｉ?ｉ?；?．?？?（ｈ，?ＫＡ?－?？？…?ＨＡ?－?？?？?？?？??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?（？ＡＩ）?ＧＳＴＯ?－?－?１?１０?５０?（｜ｉＭ）??圖１．２?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２Ｏ２誘導(dǎo)的ＬＳＥＣｓ凋亡與氧化應(yīng)激??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?ＧＳＴＤ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?Ｈ２〇２－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ?ｉｎ?ＬＳＥＣｓ??（Ａ）流式細(xì)胞術(shù)檢測了?Ｈ２Ｏ２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ（ｉＭ、１０）ｉＭ、５０｜ａＭ）處理對??ＬＳＥＣｓ?凋亡水平的影響；（Ｂ）?Ｈ２０２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ｜ａＭ、ｌＯｐＭ、５０（ｘＭ）??處理對?ＬＳＥＣｓ?存活率的影響；（Ｃ）?Ｈ２〇２（ｌｍＭ）和?ＧＳＴＤ（ｌｐＭ、１０ｐＭ、５０｜ａＭ）??處理對?ＲＯＳ?水平的影響；（Ｄ）?Ｈ２〇２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌｐＭ、ｌＯｐＭ、５０ｐＭ）??對?ＭＤＡ?水平的影響。（＊；Ｋ０．０５，＊＊／？＜０．０１）??３?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２誘導(dǎo)的ＬＳＥＣｓ?ｃａｓｐａｓｅ－９相關(guān)凋亡途徑??由于ＧＳＴＤ能夠抑制Ｈ２〇２誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，我們進(jìn)一步研宄了?ＧＳＴＤ抑制??細(xì)胞調(diào)亡的機(jī)制。細(xì)胞調(diào)亡經(jīng)典通路顯示ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９是細(xì)胞闊亡中??的兩

同時(shí)，為了弄清ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激過程是否通過Ｈ０－１通路??進(jìn)行調(diào)控，我們又檢測了在加入ＨＯ－１抑制劑Ｚｎｐｐ時(shí)ＧＳＴＤ處理對細(xì)胞中ＭＤＡ??含量的影響。如圖１．４Ｄ所示，與對照組相比，只加入Ｚｎｐｐ并不影響ＭＤＡ的含??量（尸＞０．０５）；在Ｈ２〇２誘導(dǎo)的同時(shí)加入Ｚｎｐｐ細(xì)胞中ＭＤＡ的含量達(dá)到峰值，也??就是說氧化應(yīng)激程度達(dá)到最大；再加入不同濃度的ＧＳＴＤ處理后，ＭＤＡ含量隨??之降低（／Ｋ０．０５），說明ＧＳＴＤ通過促進(jìn)ＨＯ－１的表達(dá)從而抑制Ｈ２〇２誘導(dǎo)的氧??化應(yīng)激作用。??Ａ??ＨＯ＞１?—?一?一?＿?鑛?ＨＯ＞１?＿?？馨??ｗ?ｍＢ?ｍｍ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０（ｍＭ）ｈ２°２?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏａ?－?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?〇?２?４?６?（ｈ）??１０?ｐＭ??ｈ－?ｉ－?ｉ－?ｉ?？?ｒ￣Ｆｌ－??ｈ?—￣ＨＴｉ?Ｕ?—￣??￥ｏｅ?￥?廣??ｉ０４?ｎｎ?Ｉ?〇．５??０．Ｗ０ＩＩＩ??響．？?？?？?？?＾＞?：?；?２?；?；？ｈ，??ＯＳＴＤ?？?？?１?１０?ＳＯ?（？Ｍ）??Ｂ??Ｎｒｆ２?ｆｌｔｆｌｔｆｌＢ?Ｎｒｆ２?—??????ＬａｍｌｎＢ?Ｌ？ｎｌｎ?Ｂ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?＿＞?ＨＡ?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏ２?？?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?０?２?４?６?（ｈ）??１０?ｍｍ??ｆ１－５ｉｒ－ＴＴｉ?ｉ１－６］?ｎ??％?＾?Ｉ??｜?０．５?｜?０．５???，?ｒ－－?〇〇ｌｌ７ｌ－〇－ＯＪ?．?ＬＬ－??叱？?？?？?？?？?ＨｊＯｊ?－?？?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]自噬在血紅素氧合酶1抑制大鼠肝臟缺血/再灌注損傷中的作用[J]. 藍(lán)升,李金泰,劉毅.  中華危重病急救醫(yī)學(xué). 2017 (03)
[2]左卡尼汀通過激活Nrf2/HO-1途徑減輕大鼠肝臟熱缺血再灌注損傷[J]. 李文川,高良奎,李浩航,楊潔,韋秋業(yè),許佐明,羅宗將,汪建初,浦澗.  中華肝膽外科雜志. 2017 (02)
[3]鈷-原卟啉誘導(dǎo)HO-1過表達(dá)在小鼠肝缺血再灌注損傷中的抗凋亡作用研究[J]. 李京,蔡金貞,邢雨,張國梁.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2016 (08)
[4]齊墩果酸通過激活Nrf2/HO-1信號通路減輕小鼠肝臟缺血-再灌注損傷[J]. 郝保兵,饒建華,戴佳敏,丁文斌,張峰.  江蘇醫(yī)藥. 2016(12)
[5]Nrf2/ARE通路在飽和氫鹽水減輕自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷中的作用[J]. 施東婧,杜洪印,喻文立,吳莉,盛明薇,翁亦齊,王永旺,丁梅,劉文娜,王樹森.  中華麻醉學(xué)雜志. 2015 (10)
[6]肝臟缺血再灌注損傷機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 關(guān)連越,付佩堯,李巍.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2015(09)
[7]HO-1介導(dǎo)芒果苷對大鼠肝臟缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 王陽陽,于惠玲,李田陽,郭昊天,趙亞敏,賀文娟,候英鍵,魯素彩.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2015(05)
[8]姜黃素對大鼠移植肝缺血再灌注損傷指標(biāo)血紅素氧合酶-1表達(dá)的影響[J]. 咸國哲,吳曉本,劉景磊,董承偉.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2015 (01)
[9]腫瘤壞死因子預(yù)處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷[J]. 郭懷斌,趙炎,劉峰,張萬星.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2014 (12)
[10]天麻素預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的可能機(jī)制[J]. 位凱,王飛,張瑾,李珍,沈兵,王烈成,孔德虎,胡金蘭.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(06)



本文編號：3223728