[目的]肝臟缺血再灌注損傷（HIRI）是指在肝臟切除及肝移植過程中,由于臨時性的阻斷肝臟血供造成肝臟受損,當給予恢復正常血供后肝臟損傷情況未得到緩解反而加重的現(xiàn)象。在HIRI中肝竇內(nèi)皮細胞（LSECs）是最早受到損傷的細胞,被稱為HIRI中的第一道防線。HIRI中氧化應激的發(fā)生與肝竇內(nèi)皮細胞的損傷關系密切。因此,如能有效的保護肝竇內(nèi)皮細胞的功能及減輕氧化應激的發(fā)生,則有利于保護HIRI。目前臨床上還沒有研制出能減輕HIRI中氧化損傷的藥物,因此開發(fā)出高效、低毒的抗氧化損傷的藥物成了預防HIRI中有待解決難題。天麻素（GSTD）作為一種有效的抗氧化劑和氧自由基清除劑,主要被用于神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)疾病的治療,并且具有肝臟保護的功能。因此本研究的目的是探討GSTD在LSECs氧化損傷中的保護作用及其分子機制,為臨床HIRI的防治提供理論依據(jù)。[方法]首先使用1mM H2O2構(gòu)建LSECs的氧化應激模型,同時給予1、10及50μM GSTD處理細胞,通過檢測ROS、MDA的含量,評價了 GSTD在LSECs氧化應激過程中的緩解作用;通過TUNEL法、Annexin V-FITC-PI雙染法檢... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?１?Ｈ２０２對ＬＳＥＣｓ存活率的影響??

?１??２９０．０－１?－？－?Ｈ｜〇，?？?１０?ｍＭ?ＯＳＴＤ?＿＾＿?４?Ｓ〇?＾?ＧＳＴＯ?＊＊?＊？?＊??一?ｍ?９０?ＪＬ?？??ｒｏ?ｅｏ?Ａ?ｌ＇°?ｎ??ｒ：＾?Ｉ：Ａ?ｎＡ?｜ｓｎ?ｆｌＬ??Ｑ?ＩＩ?，１１，１，１，１１，１１，１?〇?丄』Ｉ?Ｉ???？－ｒ＊?【１?Ｌ??０?ｉ?ｉ?；?．?？?（ｈ，?ＫＡ?－?？？…?ＨＡ?－?？?？?？?？??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?（？ＡＩ）?ＧＳＴＯ?－?－?１?１０?５０?（｜ｉＭ）??圖１．２?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２Ｏ２誘導的ＬＳＥＣｓ凋亡與氧化應激??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?ＧＳＴＤ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?Ｈ２〇２－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ?ｉｎ?ＬＳＥＣｓ??（Ａ）流式細胞術檢測了?Ｈ２Ｏ２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ（ｉＭ、１０）ｉＭ、５０｜ａＭ）處理對??ＬＳＥＣｓ?凋亡水平的影響；（Ｂ）?Ｈ２０２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌ｜ａＭ、ｌＯｐＭ、５０（ｘＭ）??處理對?ＬＳＥＣｓ?存活率的影響；（Ｃ）?Ｈ２〇２（ｌｍＭ）和?ＧＳＴＤ（ｌｐＭ、１０ｐＭ、５０｜ａＭ）??處理對?ＲＯＳ?水平的影響；（Ｄ）?Ｈ２〇２?（ＩｍＭ）和?ＧＳＴＤ?（ｌｐＭ、ｌＯｐＭ、５０ｐＭ）??對?ＭＤＡ?水平的影響。（＊；Ｋ０．０５，＊＊／？＜０．０１）??３?ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２誘導的ＬＳＥＣｓ?ｃａｓｐａｓｅ－９相關凋亡途徑??由于ＧＳＴＤ能夠抑制Ｈ２〇２誘導的細胞凋亡，我們進一步研宄了?ＧＳＴＤ抑制??細胞調(diào)亡的機制。細胞調(diào)亡經(jīng)典通路顯示ｃａｓｐａｓｅ－３和ｃａｓｐａｓｅ－９是細胞闊亡中??的兩

同時，為了弄清ＧＳＴＤ抑制Ｈ２０２誘導的氧化應激過程是否通過Ｈ０－１通路??進行調(diào)控，我們又檢測了在加入ＨＯ－１抑制劑Ｚｎｐｐ時ＧＳＴＤ處理對細胞中ＭＤＡ??含量的影響。如圖１．４Ｄ所示，與對照組相比，只加入Ｚｎｐｐ并不影響ＭＤＡ的含??量（尸＞０．０５）；在Ｈ２〇２誘導的同時加入Ｚｎｐｐ細胞中ＭＤＡ的含量達到峰值，也??就是說氧化應激程度達到最大；再加入不同濃度的ＧＳＴＤ處理后，ＭＤＡ含量隨??之降低（／Ｋ０．０５），說明ＧＳＴＤ通過促進ＨＯ－１的表達從而抑制Ｈ２〇２誘導的氧??化應激作用。??Ａ??ＨＯ＞１?—?一?一?＿?鑛?ＨＯ＞１?＿?？馨??ｗ?ｍＢ?ｍｍ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０（ｍＭ）ｈ２°２?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏａ?－?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?〇?２?４?６?（ｈ）??１０?ｐＭ??ｈ－?ｉ－?ｉ－?ｉ?？?ｒ￣Ｆｌ－??ｈ?—￣ＨＴｉ?Ｕ?—￣??￥ｏｅ?￥?廣??ｉ０４?ｎｎ?Ｉ?〇．５??０．Ｗ０ＩＩＩ??響．？?？?？?？?＾＞?：?；?２?；?；？ｈ，??ＯＳＴＤ?？?？?１?１０?ＳＯ?（？Ｍ）??Ｂ??Ｎｒｆ２?ｆｌｔｆｌｔｆｌＢ?Ｎｒｆ２?—??????ＬａｍｌｎＢ?Ｌ？ｎｌｎ?Ｂ??ＧＳＴＤ?－?－?１?１０?５０?＿＞?ＨＡ?？?？?？?？?？??Ｈ２Ｏ２?？?？?？?？?？?ＧＳＴＤ?－?０?２?４?６?（ｈ）??１０?ｍｍ??ｆ１－５ｉｒ－ＴＴｉ?ｉ１－６］?ｎ??％?＾?Ｉ??｜?０．５?｜?０．５???，?ｒ－－?〇〇ｌｌ７ｌ－〇－ＯＪ?．?ＬＬ－??叱？?？?？?？?？?ＨｊＯｊ?－?？?

【參考文獻】：
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本文編號：3223728