從多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化出可移植、有功能的血液及免疫細(xì)胞一直是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本文第一部分證明小鼠胚胎干細(xì)胞分化來源、體內(nèi)成熟的T細(xì)胞可以結(jié)合CAR-T技術(shù)改造實(shí)現(xiàn)體內(nèi)清除腫瘤的目的,第二部分初步實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞獲得可移植的髓系祖細(xì)胞種子,移植后可在體內(nèi)短期再生髓系細(xì)胞（包括粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞）。本研究為再生T細(xì)胞以及可移植髓系細(xì)胞的轉(zhuǎn)化研究提供了技術(shù)借鑒。嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）療法已成為臨床上治療血液腫瘤的有效手段。通常CAR-T細(xì)胞是通過分離患者外周血來源的T細(xì)胞在體外進(jìn)行基因編輯而制備,但是患者自身的T細(xì)胞數(shù)量有限且經(jīng)常出現(xiàn)功能異�；蚝慕�,因此需要探索T細(xì)胞新的來源。本研究基于課題組已開發(fā)的定向誘導(dǎo)T細(xì)胞技術(shù),利用Runx1-Hoxa9條件性表達(dá)的多能干細(xì)胞系誘導(dǎo)分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖細(xì)胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,從脾臟中分離出再生的T細(xì)胞（induced T cel... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．１．１正在開發(fā)的７５３種細(xì)胞療法的全球地理分布??圖注：美國(guó)和中國(guó)分別以３４４種和２０３種細(xì)胞療法引領(lǐng)著細(xì)胞療法發(fā)展競(jìng)賽??

－ＤＬ１?基質(zhì)細(xì)??胞共培養(yǎng)，采用造血分化培養(yǎng)基將ｉＨＥＣｓ誘導(dǎo)分化為可用于移植的誘導(dǎo)型造血??祖細(xì)胞（ｉｎｄｕｃｅｄ?ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ?ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ｃｅｌｌｓ，ｉＨＰＣｓ?）（Ｌｉｎ—ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ?１２７＋／ＣＤ１３５＋）??（圖?１．３．２）。??０?ＳＯＫ?１００Ｋ?１５０Ｋ?２００Ｋ?２６０Ｋ?０?１〇４?１〇５?－１〇３?〇?１〇３?１〇４?１〇Ｓ??ＦＳＣ－Ａ???ＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５???ＣＤ２０１－ＰＥ????圖１．３．１?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ多能干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化ｉＨＥＣｓ細(xì)胞ｄａｙ?１１流式分選圖??圖注：將ｉＲ９ｍＥＳＣｓ通過２．５天的倒置培養(yǎng)形成擬胚體（Ｅｍｂｒｙｏｉｄｂｏｄｉｅｓ，ＥＢｓ），再將ＥＢｓ??經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)（第６天通過Ｄｏｘ誘導(dǎo)啟動(dòng)和ＦｏｘａＰ表達(dá)）使其分化為誘導(dǎo)型生血內(nèi)??皮細(xì)胞ｉＨＥＣｓ，在第１１天將分化的細(xì)胞進(jìn)行收集分選出ｉＨＥＣｓ?（ＣＤ３ｒＣＤ４１ｌＤＷＣＤ４５－ｃ－??Ｋｉｔ＋ＣＤＳＯＷ），細(xì)胞分選前由ＣＤ３１陽性富集，此圖為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表性圖。???７－ＡＡＤ－???麵，１＿??－１〇３?〇?１０３?１０４?１０５?－１０３?０?１０３?１〇４?１０５?－１０３?０?１０？?１０４?１０＊??ＣＤ４５－ＡＰＣ?？?ＣＤ１３５－ＰＥ?？?ＣＤ１２７－ＢＶ４２１?－??２７??

?第１章多能干細(xì)胞分化再生的Ｔ細(xì)胞體內(nèi)抗腫瘤評(píng)估???圖１．３．２?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ多能干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化ｄａｙ?２１流式分析ｉＨＰＣｓ細(xì)胞??圖注：將第１１天分選的ｉＨＥＣｓ與０Ｐ９－ＤＬ１基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)經(jīng)歷造血成熟，經(jīng)歷１０天成熟??后即ｄａｙ?２１時(shí)流式分析共培養(yǎng)成熟的誘導(dǎo)型造血祖細(xì)胞ｉＨＰＣｓ，免疫表型限定為：??Ｌｉｎ?（ＣＤ２／ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ１?ｌｂ／Ｇｒｌ／Ｔｅｒｌ?１９／ＣＤ１９／ＮＫ１?？?１／ＴＣＲｙＳ）?－ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ１２７＋／ＣＤ１３５＋。??１．３．?２?ｉ?Ｒ９?ｍＥＳＣｓ來源的ｉ?ＨＰＣｓ移植免疫缺陷鼠再生Ｔ淋巴細(xì)胞??接下來，我們利用重度免疫缺陷鼠（Ｂ－ＮＤＧ，類似于ＮＳＧ）作為ｉＨＰＣｓ分??化產(chǎn)生ｉＴ細(xì)胞的反應(yīng)器，在ｉＨＥＣｓ進(jìn)行共培養(yǎng)的第１０天，收集其分化形成的造??血祖細(xì)胞ｉＨＰＣｓ?（２?ｘ?１〇６／只）通過眼靜脈注射，移植到經(jīng)過Ｘ－ｒａｙ照射處理（２．２５??Ｇｙ）的Ｂ－ＮＤＧ小鼠中，在移植后第５周，我們利用流式技術(shù)檢測(cè)到其脾臟有供??體來源的成熟ｉＴ細(xì)胞（ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋或ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋，注：再生的Ｔ??細(xì)胞命名為ｉＴ細(xì)胞）。流式數(shù)據(jù)顯示供體來源的細(xì)胞中ＣＤ４＋細(xì)胞和ＣＤ８＋細(xì)胞??比例分別為?６３．２°／。、３５．５％?（圖?１．３．３）。??ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋??議Ｉｔ??￣｜ｉｍ＇ｌＩ?ｆＵ＇?ｉ＇Ｖ＇ｉ?Ｉ＇ｍ?１｜?１?？?＇?Ｉ?＇！？�。�?Ｉ?？？？Ｊ??？１０３?０?１０３?１〇４?１０５??ＣＤ４－ＰＥ????圖１．３．３?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ來源的ｉＨＰＣｓ移植受體鼠脾臟ｉＴ細(xì)胞流式分析?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Phase 1 clinical trial demonstrated that MUC1 positive metastatic seminal vesicle cancer can be effectively eradicated by modified Anti-MUC1 chimeric antigen receptor transduced T cells[J]. Fengtao You,Licui Jiang,Bozhen Zhang,Qiang Lu,Qiao Zhou,Xiaoyang Liao,Hong Wu,Kaiqi Du,Youcai Zhu,Huimin Meng,Zhishu Gong,Yunhui Zong,Lei Huang,Man Lu,Jirong Tang,Yafen Li,Xiaochen Zhai,Xiangling Wang,Sisi Ye,Dan Chen,Lei Yuan,Lin Qi,Lin Yang.  Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[2]Treatment of solid tumors with chimeric antigen receptor-engineered T cells: current status and future prospects[J]. Shengmeng Di,Zonghai Li.  Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[3]Gastric cancer and the epoch of immunotherapy approaches[J]. Elena Niccolai,Antonio Taddei,Domenico Prisco,Amedeo Amedei.  World Journal of Gastroenterology. 2015(19)



本文編號(hào)：3222366