本文關(guān)鍵詞：腫瘤血管靶向肽GX1用于胃癌的分子影像研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:胃癌是常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率居高不下,給我國造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其防治的關(guān)鍵是早發(fā)現(xiàn)早治療,而我國胃癌的早診率較低,致使病人確診時(shí)已是中晚期,延誤了手術(shù)時(shí)機(jī)。分子影像的出現(xiàn)為胃癌的診治提供了新的思路,其關(guān)鍵是找到一個(gè)具有靶向特異性的分子。腫瘤血管靶向多肽的研究應(yīng)用是目前國際公認(rèn)的有效方法,利用噬菌體肽庫篩選出腫瘤血管靶向肽有些已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段,具有良好的應(yīng)用價(jià)值。我課題組一直致力于胃癌血管生成的研究,并在前期篩選出了腫瘤血管靶向性多肽GX1,研究顯示其可以特異性地與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合,并在體內(nèi)具有一定的腫瘤靶向作用。利用GX1我們制備了一系列探針或藥物,在胃癌的診斷和治療方面做了大量研究,顯示出了GX1的應(yīng)用前景。但是GX1的親和力及靶向性仍不足,我們又對(duì)其進(jìn)行了修飾,以期彌補(bǔ)這些不足。本文即是將GX1制成二聚體,利用多種方法鑒定其體內(nèi)外的特征,為胃癌的診治提供一條新的思路。目的:1)合成GX1的二聚體,鑒定其是否親和力及靶向性優(yōu)于單體;2)摸索188Re的標(biāo)記方法,制備188Re-PEG-(GX1)2,將其用于胃癌的SPECT成像,研究其用于胃癌診斷及治療的可行性;3)摸索68Ga的標(biāo)記方法,制備68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2,將其用于胃癌的PET成像,研究其用于胃癌診斷的可行性;方法:1)制備188Re-PEG-(GX1)2并做質(zhì)量鑒定,測定標(biāo)記率和穩(wěn)定性;體外細(xì)胞結(jié)合分析及競爭性抑制實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證188Re-PEG-(GX1)2與Co-HUVECs結(jié)合的特異性,判斷GX1二聚體的親和力是夠增加;MTT分析及流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證188Re-PEG-(GX1)2抑制Co-HUVECs增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用;2)荷瘤裸鼠的SPECT成像及T/H定量驗(yàn)證188Re-PEG-(GX1)2的在體靶向性;BLI監(jiān)測荷瘤裸鼠的腫瘤生長,判斷188Re-PEG-(GX1)2的治療效果;3)離體腫瘤組織的CD 31染色、Ki 67染色、TUNEL等驗(yàn)證188Re-PEG-(GX1)2抑制腫瘤血管生成、抑制細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡作用;對(duì)肝、腎的HE染色及生化分析判斷188Re-PEG-(GX1)2對(duì)肝、腎功能的影響。4)制備68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2并做質(zhì)量鑒定,測定標(biāo)記率和穩(wěn)定性;體外細(xì)胞結(jié)合分析及競爭性抑制實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2與Co-HUVECs結(jié)合的特異性;細(xì)胞免疫熒光和攝取及外排實(shí)驗(yàn)判斷GX1二聚體的親和力是夠增加;5)Nano PET/CT成像、SUV值定量、生物學(xué)分布等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2在荷瘤裸鼠體內(nèi)的腫瘤靶向性,定量分析其在體分布。結(jié)果:1)成功制備了188Re-PEG-(GX1)2,標(biāo)記率大于96%,在血清中72 h穩(wěn)定存在;體外細(xì)胞結(jié)合分析及競爭性抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明188Re-PEG-(GX1)2能夠與Co-HUVECs特異性結(jié)合,且親和力高于188Re-GX1和188Re-URP;MTT分析和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果證實(shí)188Re-PEG-(GX1)2在體外可有效抑制Co-HUVECs增殖、誘導(dǎo)Co-HUVECs凋亡,作用效果優(yōu)于188Re-GX1和188Re-URP;2)SPECT成像結(jié)果證實(shí)188Re-PEG-(GX1)2在荷瘤裸鼠體內(nèi)具有良好的胃癌靶向性,T/H比值高于188Re-GX1;BLI監(jiān)測荷瘤裸鼠治療過程中的腫瘤變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)188Re-PEG-(GX1)2在體內(nèi)具有抑制腫瘤增殖的效果,且效果優(yōu)于188Re-GX1;3)對(duì)離體腫瘤組織的CD 31、Ki 67、TUNEL染色,結(jié)果表明與188Re-GX1相比,188Re-PEG-(GX1)2在體內(nèi)更能抑制腫瘤血管新生、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡;HE染色及生化分析結(jié)果表明探針在體內(nèi)未對(duì)肝腎形態(tài)及功能造成可見的影響;4)成功制備了68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2,標(biāo)記率大于97%,在血清中90 min穩(wěn)定存在;體外細(xì)胞受體結(jié)合分析及競爭性抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2與Co-HUVECs的結(jié)合高于HUVEC、BGC 823和GES等細(xì)胞,說明該探針特異性地與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合;同時(shí)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2與Co-HUVECs的結(jié)合高于68Ga-DOTA-GX1,說明二聚體確實(shí)提高了GX1的親和力;細(xì)胞免疫熒光證實(shí),KEK-(GX1)2與Co-HUVECs的結(jié)合明顯高于單體GX1;細(xì)胞的攝取和外排實(shí)驗(yàn)證明,Co-HUVECs攝取68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2高于68Ga-DOTA-GX1,并且在60 min時(shí)達(dá)到最大;5)Nano PET/CT成像結(jié)果顯示,注射68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2的裸鼠腫瘤顯像清晰,腫瘤部位的SUV值明顯高于注射68Ga-DOTA-GX1的裸鼠,說明探針的體內(nèi)靶向性較好;最后我們用生物學(xué)分布定量地觀察探針在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布,結(jié)果顯示當(dāng)腎臟和肝臟等器官快速代謝的時(shí)候,注射68Ga-DOTA-GX1的裸鼠腫瘤部位放射性有相對(duì)緩慢的下降;同時(shí),在60 min時(shí)除了肝腎以外,腫瘤部位的%ID/g超過其他正常器官,結(jié)果說明腫瘤對(duì)探針有較好的吸收。結(jié)論:1)對(duì)GX1的修飾成功,GX1二聚體的體內(nèi)外屬性明顯優(yōu)于單體;2)成功制備了既能用于胃癌診斷也能用于胃癌治療的診療一體化探針188Re-PEG-(GX1)2,具有胃癌診療的應(yīng)用前景;3)成功制備了胃癌的PET成像探針68Ga-DOTA-KEK-(GX1)2,為胃癌PET診斷提供了一個(gè)候選探針;4)成功應(yīng)用了188Re和68Ga兩個(gè)新型核素,為二者的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：GX1 分子影像 血管生成 腫瘤靶向
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 縮略語表6-10
• 中文摘要10-13
• ABSTRACT13-17
• 前言17-19
• 文獻(xiàn)回顧19-36
• 第一部分 ~(188)RE-PEG-(GX1)_2 的制備及用于胃癌的SPECT成像和治療研究36-74
• 引言36-37
• 1 材料37-40
• 1.1 試劑和耗材37-39
• 1.2 儀器設(shè)備39-40
• 1.3 細(xì)胞株、臍帶和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 2 方法40-52
• 2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇40-42
• 2.2 HUVECs的分離培養(yǎng)及鑒定42-43
• 2.3 Co-HUVECs細(xì)胞模型的建立43-44
• 2.4 胃癌裸鼠皮下模型的建立44
• 2.5 探針的制備及鑒定44-45
• 2.6 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及競爭性抑制分析45-47
• 2.7 荷瘤裸鼠的SPECT成像47
• 2.8 MTT分析觀察探針對(duì)細(xì)胞增殖的影響47-48
• 2.9 流式細(xì)胞術(shù)觀察探針對(duì)細(xì)胞凋亡的影響48
• 2.10 BLI觀察藥物在體對(duì)荷瘤裸鼠的治療作用48-49
• 2.11 離體腫瘤組織的切片染色49-51
• 2.11.1 CD31染色判斷腫瘤MVD49-50
• 2.11.2 Ki67染色判斷腫瘤增殖情況50-51
• 2.11.3 TUNEL分析判斷腫瘤細(xì)胞凋亡情況51
• 2.12 藥物副作用的觀察51-52
• 3 結(jié)果52-68
• 3.1 HUVECs的鑒定52-53
• 3.2 探針的制備及鑒定53-56
• 3.3 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及競爭性抑制分析56-57
• 3.4 ~(188)Re-PEG-(GX1)_2 具有更強(qiáng)的體內(nèi)靶向性57-58
• 3.5 ~(188)Re-PEG-(GX1)_2 可明顯抑制Co-HUVECs的增殖58-59
• 3.6 ~(188)Re-PEG-(GX1)_2 可誘導(dǎo)Co-HUVECs的凋亡59-60
• 3.7 ~(188)Re-PEG-(GX1)_2 體內(nèi)可抑制腫瘤的生長60-62
• 3.8 離體腫瘤組織的切片染色62-66
• 3.8.1 CD31染色計(jì)數(shù)腫瘤MVD62-64
• 3.8.2 Ki67染色觀察腫瘤增殖情況64
• 3.8.3 TUNEL分析觀察腫瘤凋亡情況64-66
• 3.9 藥物對(duì)正常器官毒副作用的觀察66-68
• 3.9.1 生化分析判斷藥物對(duì)肝腎功能的影響66
• 3.9.2 HE染色觀察有無臟器的損傷66-68
• 4 討論68-74
• 第二部分 ~(68)GA-DOTA-KEK-(GX1)_2 的制備及用于胃癌的PET成像研究74-98
• 引言74
• 1 材料74-78
• 1.1 試劑和耗材74-76
• 1.2 儀器設(shè)備76-77
• 1.3 細(xì)胞株、臍帶和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物77-78
• 2 方法78-85
• 2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇78-79
• 2.2 HUVECs的分離培養(yǎng)及鑒定79
• 2.3 Co-HUVECs細(xì)胞模型的建立79
• 2.4 胃癌裸鼠皮下模型的建立79-80
• 2.5 探針的制備及鑒定80-81
• 2.6 細(xì)胞免疫熒光81-82
• 2.7 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及競爭性抑制分析82-83
• 2.8 細(xì)胞攝取與外排實(shí)驗(yàn)83-85
• 2.9 荷瘤裸鼠的Nano PET/CT成像85
• 2.10 生物學(xué)分布85
• 3 結(jié)果85-95
• 3.1 HUVECs的鑒定86
• 3.2 探針的制備及鑒定86-89
• 3.3 細(xì)胞免疫熒光89
• 3.4 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及競爭性抑制分析89-91
• 3.5 細(xì)胞攝取及外排實(shí)驗(yàn)91-93
• 3.6 ~(68)Ga-DOTA-KEK-(GX1)_2 在體具有良好的胃癌靶向性93
• 3.7 生物學(xué)分布93-95
• 4 討論95-98
• 小結(jié)98-99
• 參考文獻(xiàn)99-126
• 附錄126-143
• 個(gè)人簡歷和研究成果143-145
• 致謝145-146

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤血管靶向肽GX1用于胃癌的分子影像研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：321791