發(fā)布時間：2021-06-07 20:04

　　腸道病毒EVD68是小RNA病毒科,腸道病毒屬D種的病毒,近年來腸道病毒的在全球范圍內(nèi)爆發(fā)感染,引起了廣泛的關(guān)注。全球各個國家紛紛將EVD68病毒作為公共衛(wèi)生系統(tǒng)的重點(diǎn)監(jiān)測對象。目前針對EVD68病毒感染尚沒有有效的預(yù)防性疫苗和治療性藥物上市。本研究工作的第一部分內(nèi)容,介紹了一種基于滅活全病毒顆粒的EVD68疫苗。首先我們在500ml的攪拌瓶中,使用cytodex-1微載體密度為5g/L的培養(yǎng)條件下,實(shí)現(xiàn)了微載體輔助的Vero細(xì)胞懸浮培養(yǎng),隨后經(jīng)過病毒感染條件的優(yōu)化,確定了以MOI=1/5000的病毒感染,并在病毒感染之后第5天收獲病毒上清液的最佳病毒培養(yǎng)條件。收獲的病毒滴達(dá)10^8.15TCID₅₀/ml。隨后病毒液經(jīng)過β丙內(nèi)酯（β-propiolactone,BPL）滅活與PEG沉淀濃縮和蔗糖梯度超速離心純化等步驟,獲得了高純度的滅活病毒顆粒。經(jīng)過病毒衣殼蛋白生化分析和病毒形態(tài)的電鏡分析,明確了病毒的衣殼蛋白的組成以及病毒³0nm球形顆粒形態(tài)。最后用EVD68滅活病毒疫苗免疫小鼠之后,在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生了針對EVD68... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院上海巴斯德研究所)上海市

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小RNA病毒基因組結(jié)構(gòu)和蛋白切割模式圖

第1章背景介紹7非翻譯區(qū)，衣殼區(qū)VP4/VP2和VP1以及3DRNA聚合酶基因的部分核苷酸序列的同源性分別為97.3,97.8,95.2和95.9％。兩者衣殼蛋白氨基酸序列相似性98.1%，3DRNA聚合酶氨基酸序列相似性97.9%。因此在早期，EVD68病毒的分類被定義為HRV病毒。臨床研究發(fā)現(xiàn)，EVD68病毒和HRV病毒經(jīng)常出現(xiàn)共流行的情況，而且EVD68病例通常比鼻病毒的患者更有可能是哮喘病史的患者，同時在發(fā)病之后，更容易出現(xiàn)哮喘癥狀的復(fù)發(fā)[46]。EVD68兒童入院時的呼吸系統(tǒng)疾病似乎比患有HRV的兒童更嚴(yán)重，因?yàn)榘l(fā)熱，喘息，支氣管擴(kuò)張劑使用率和兒科重癥監(jiān)護(hù)病房入院率較高[47,48]。盡管嚴(yán)重程度存在差異，但EVD68的病程和恢復(fù)與HRV一樣快，沒有顯著性差異[49]。1.6EVD68的復(fù)制周期EVD68病毒的生活周期和其他腸道病毒的生活周期類似。EVD68完整的復(fù)制周期包括病毒的進(jìn)入、病毒的RNA復(fù)制、病毒蛋白的翻譯，病毒衣殼蛋白和基因組的組裝，病毒的釋放。病毒進(jìn)入的過程，包括了病毒在細(xì)胞表面的吸附，細(xì)胞的內(nèi)吞，病毒脫衣殼，RNA釋放這些步驟。圖1.2腸道病毒的生活周期示意圖。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.2Schematicoverviewoftheenteroviruslifecycle.Afterbindingtoitsreceptor,orreceptors,andendocyticuptakeinthecell,theviriondeliversitspositive-strand(+)RNAgenomeacrosstheendosomalmembraneintothecytoplasm.Theviral

organizeintoprotomersandpentamersand,inconcertwithreplicationmachineryandgenomicRNA,assembleintoprovirionsthatareconvertedintoinfectious,maturevirionsuponthegenome-inducedcleavageofVP0intoVP4andVP2.Maturevirionsexitthehostcellvianon-lyticreleaseofextracellularvesiclesorviacelllysisinalatestageofinfection.dsRNA,double-strandedRNA.目前關(guān)于腸道病毒生活周期的研究，主要集中在EVD68的受體和病毒脫衣殼過程的研究方面。這部分內(nèi)容在后面病毒的受體部分講到。針對其他過程的研究，目前比較少。圖1.3腸道病毒脫衣殼機(jī)制示意圖。（引自Thelifecycleofnon-polioenterovirusesandhowtotargetit.2018.）Figure1.3Theenterovirusuncoatingmechanism.


本文編號：3217220