第一部分陽離子脂質(zhì)微泡的制備及物理性能檢測目的:制備表面電位為正電荷的陽離子脂質(zhì)微泡（CMB）,檢測其外觀形態(tài)、穩(wěn)定性、分散度、粒徑、表面電位等基本物理特征,通過評價CMBs體內(nèi)、外顯影的能力及超聲敏感性,探尋低強度聚焦超聲（LIFU）的適宜工作參數(shù),為制備載質(zhì)粒的陽離子微泡及超聲介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染提供實驗基礎(chǔ)。方法:使用薄膜水化-機械振蕩法,用DPPC和SPEG-PEG2000加入DC-Chol制備陽離子脂質(zhì)微泡,用C3F8氣體替換微泡空氣內(nèi)核,同時制備DIO標記的陽離子脂質(zhì)微泡用以更清晰觀察微泡的表面物理特征。分別用光鏡、透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察微泡的外觀形態(tài)及分散性,用細胞計數(shù)板檢測微泡濃度,馬爾文儀器檢測微泡的粒徑和Zeta表面電位。制備3%瓊脂糖凝膠,檢測陽離子脂質(zhì)微泡的體外顯影能力,使用LIFU在不同工作參數(shù)及輻照時間觀察微泡被完全擊破的時間,探索LIFU的最適應(yīng)工作條件。使用百盛超聲儀的高頻探頭定位頸動脈體的位置,并靜脈注射CMBs,通過觀察頸總動脈增強超聲影像評價其體內(nèi)顯影能力。結(jié)果:CMBs由脂質(zhì)外殼、內(nèi)含C3F8氣體構(gòu)成,外觀呈高密度乳白色,形態(tài)穩(wěn)定。光學(xué)顯微鏡及... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CB外周化學(xué)反射示意圖[5]

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文21等因素引起Ⅰ型細胞釋放大量ATP，可作用于P2X3受體并將信號傳遞至巖神經(jīng)元，興奮交感和呼吸中樞（圖2）[15]。在低氧動物模型中，使用P2X3受體抑制劑或P2X3基因敲除均可明顯抑制交感中樞放電，降低低氧刺激所誘發(fā)的通氣反應(yīng)[16]。最新動物和臨床前研究發(fā)現(xiàn)，在高血壓和HF動物模型中的CBP2X3受體表達明顯上調(diào)，CBI型細胞的P2X3受體表達水平與其活性及交感興奮性程度密切相關(guān)[17，18]。當給予SHR不同濃度P2X3受體抑制劑時，CB的興奮程度、交感神經(jīng)系統(tǒng)活性及血壓呈劑量相關(guān)性降低，但血壓正常的大鼠則無此效應(yīng)[17]。此外，該研究還進一步證實在高血壓患者CB中P2X3受體同樣處于高表達狀態(tài)[17]。但是，P2X3受體廣泛分布于人體不同組織器官，其活性與疼痛、咳嗽、膀胱功能等相關(guān)，發(fā)揮不同的生理作用，因而靜脈使用P2X3受體抑制劑雖可使CB活性降低并降低血壓，但不具靶器官特異性，可能導(dǎo)致疼痛反射減弱或膀胱功能不全等不良反應(yīng)[19]。如應(yīng)用AF-219治療頑固性慢性咳嗽的臨床試驗發(fā)現(xiàn)癥狀控制同時出現(xiàn)味覺減退或喪失[20]。以上研究結(jié)果表明：P2X3受體是參與CB興奮信號傳遞的關(guān)鍵受體之一，其表達水平與機體的CB和交感神經(jīng)活性強度存在一定的量-效關(guān)系。因此，靶向下調(diào)CB的P2X3受體表達水平有望成為治療高血壓的新方法。圖2CB細胞間神經(jīng)及受體相互作用機制圖[21]Figure2InteractionsbetweencellularelementsintheCB[21].(a)CarotidbifurcationandlocationoftheCB.(b)SchematicrepresentationofaCBglomerulus.Chemosensoryandchemoproliferativesynapsesareindicated.(c)Schematicrepresentationofthetripartitesynapse.CB,carotidbody.

微泡負載DNA示意


本文編號：3216779