發(fā)布時(shí)間：2021-06-01 03:58

　　基因治療是將治療型核酸藥物輸送到細(xì)胞中特定靶點(diǎn)來(lái)更改基因表達(dá)的過(guò)程,因具備高療效低毒副作用的特點(diǎn)成為腫瘤等基因類疾病的理想治療方法。基因治療的臨床應(yīng)用受制于缺乏安全、高效基因輸送載體。用于體內(nèi)基因治療的載體主要分為兩類:病毒載體和非病毒載體。病毒載體是工程化改造后的病毒,能介導(dǎo)攜帶的基因在靶細(xì)胞中高效轉(zhuǎn)染并長(zhǎng)期表達(dá),因而成為基因治療臨床試驗(yàn)中應(yīng)用最多的載體。但病毒載體存在生物安全性隱患和生產(chǎn)困難等缺點(diǎn),限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。非病毒載體,特別是陽(yáng)離子聚合物,具有低免疫原性和低毒性、通用性、容易擴(kuò)大制備等優(yōu)點(diǎn)。然而,陽(yáng)離子聚合物的主要缺陷之一是在血清存在下基因轉(zhuǎn)染效率會(huì)極大降低。以陽(yáng)離子聚合物載體的金標(biāo)準(zhǔn),分子量25kDa的枝狀聚乙烯亞胺（bPEI25k）為例,其納米復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效率會(huì)在血清存在下降低2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。目前關(guān)于血清蛋白影響納米復(fù)合物轉(zhuǎn)染的機(jī)理已有研究,但仍存在爭(zhēng)議且研究缺乏系統(tǒng)性。因此,在第二章,我們以bPEI25k為模型載體,研究了血清蛋白和牛血清白蛋白（BSA）對(duì)PEI納米復(fù)合物理化特性及對(duì)基因轉(zhuǎn)染的影響。血清蛋白或BSA吸附在PEI納米復(fù)合物表面,形成了穩(wěn)定的納米復(fù)合物/... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：232 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．２０１６年基因治療臨床試驗(yàn)中處理的病例統(tǒng)計(jì)

借助病毒高效轉(zhuǎn)染能力，使得外源基因高效輸送到宿主細(xì)胞中并使之持續(xù)高表達(dá)。目前，??在基因治療中常見(jiàn)的病毒載體有逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒，腺病毒，腺相關(guān)病毒，單純皰疹病??毒和痘病毒。ｍ迄今為止約有６７％的基因治療臨床試驗(yàn)采用病毒載體（圖１．３）。２０００年，??世界首例基因治療獲得成功，該治療采用逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，對(duì)重癥聯(lián)合免疫缺陷進(jìn)行治??療。２３世界首個(gè)基因治療產(chǎn)品Ｇｌｙｂｅｍ，即采用腺相關(guān)病毒來(lái)治療脂蛋白脂肪酶缺乏癥??（ＬＰＬＤ）。盡管病毒載體由于其高效性在臨床試驗(yàn)上已取得了一些成功，而其安全性問(wèn)題??仍是制約病毒載體進(jìn)一步應(yīng)用的瓶頸。２４?１９９９年，１８歲的病人Ｊｅｓｓｅ?Ｇｅｌｓｉｎｇｅｒ在接受腺病??毒為載體的基因治療后，病毒的免疫原性誘發(fā)強(qiáng)烈的人體免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致多器官衰竭??而死亡；２００２－２００３年兩位患者在接受以小鼠白血病病毒（一種逆轉(zhuǎn)錄病毒）為載體的基因??治療后，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組插入到Ｔ細(xì)胞的致癌基因附近，激活其表達(dá)，從而使病人患上??白血病。２１除此之外，病毒載體缺乏腫瘤靶向特異性，攜載目的基因容量小，價(jià)格高昂，難??以大規(guī)模制備

體序列中而導(dǎo)致致癌基因表達(dá)，具有很高的生物安全性。２７此外，非病毒載體結(jié)構(gòu)筒單，易??于化學(xué)修飾來(lái)改變其功能，易于規(guī)模化生產(chǎn)和制備。２６，２８基于如上特性，在近２０年來(lái)非病??毒基因載體輸送的研究得到越來(lái)越多的關(guān)注，已成為基因治療研究的熱點(diǎn)（圖１．４）。非病??毒載體主要包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體，陽(yáng)離子聚合物，樹(shù)枝狀大分子等。２９??８００?ｔ??－＾Ｖｒｉａｌ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｉｖｅｒｙ??Ｓ?．．．?－＾－Ｎｏｎ－ｖｒｉａｌ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｉｖｅｒｙ??｜?６００?．??ＴＯ??茗４００?■?產(chǎn)??ｊ＝?Ｘ?產(chǎn)氣，？嘩??｜?２００－?／??Ｑ－??０?ｆ?，———，?，?，??１９９０?１９９５?２０００?２００５?２０１０?２０１５??Ｙｅａｒ??圖１．４．?１９９２年到２０１５年病毒載體與非病毒載體輸送領(lǐng)域所發(fā)表文章。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４．?Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ?ａｒｔｉｃｌｅｓ?ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇ?ｖｉｒａｌ?ａｎｄ?ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｉｖｅｒｙ?ｆｒｏｍ?１９９２?ｔｏ?２０１５．??４??


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