胚胎干細(xì)胞經(jīng)外胚層向髁突軟骨干細(xì)胞定向分化及其軟骨損傷修復(fù)應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-01 02:43
研究背景顳下頜關(guān)節(jié)（temporomandibular joint,TMJ）髁突“軟骨退變”是眾多TMJ疾病的共有病理特征,可導(dǎo)致軟骨下骨破壞吸收,引起TMJ疼痛、張口受限等關(guān)節(jié)癥狀。由于軟骨為無(wú)血管的組織,一旦發(fā)生損傷或破壞,其修復(fù)極為困難。通過(guò)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化進(jìn)而修復(fù)損傷的軟骨細(xì)胞已成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。目前常用的種子細(xì)胞主要包括以下幾種:骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stroma stem cells,BMSCs）、胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ESCs）等。盡管BMSCs向軟骨分化的技術(shù)已經(jīng)較為成熟,但由于其來(lái)源于中胚層的細(xì)胞特性及有限的增殖能力和多向分化等不可控因素,限制了BMSCs在修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨尤其是TMJ關(guān)節(jié)軟骨方面的應(yīng)用。而ESCs向關(guān)節(jié)軟骨分化雖已得到越來(lái)越多學(xué)者的認(rèn)可,但這些技術(shù)絕大多數(shù)通過(guò)中胚層誘導(dǎo)而來(lái),與TMJ的發(fā)育過(guò)程并不相符。其原因在于,在胚胎發(fā)育過(guò)程中,TMJ起源于神經(jīng)外胚層而非中胚層。研究目的本研究擬模擬TMJ髁突軟骨發(fā)育過(guò)程,誘導(dǎo)ESCs經(jīng)神經(jīng)外胚層分化成軟骨干細(xì)胞,并從體內(nèi)、外檢測(cè)軟骨干細(xì)胞的自我更新特性及分化...
【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
胚胎干細(xì)胞免疫熒光染色（標(biāo)尺：100μm）
圖 1. 胚胎干細(xì)胞免疫熒光染色（標(biāo)尺：100μm）。A. 胚胎干細(xì)胞 OCT4 免疫熒光染色。 B. 胚胎干細(xì)胞 SOX2 免疫熒光染色。Figure 1. Immunofluorescence staining of embryonic stem cells . A. Immunofluorescencestaining of OCT4. B. Immunofluorescence staining of SOX2. (bar 100μm )
上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士論文161.3.2誘導(dǎo)分化過(guò)程中多能干細(xì)胞標(biāo)志變化規(guī)律對(duì)ESCs、誘導(dǎo)分化不同階段的細(xì)胞分別收集其RNA，檢測(cè)全能干細(xì)胞標(biāo)志物OCT4、SOX2和NANOG的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，以ESCs為參考，在外胚層誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)后各時(shí)間點(diǎn)3天、6天、16天和更換軟骨干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基后12天，OCT4、SOX2和NANOG均無(wú)表達(dá)（圖3）。兩種不同胚胎干細(xì)胞系H1和Hues9較為一致。圖3.誘導(dǎo)過(guò)程中OCT4、SOX2和NANOG的表達(dá)（*表示與胚胎干細(xì)胞比，P<0.05；**表示與胚胎干細(xì)胞比，P<0.01）。Figure3.theexpressionofOCT4、SOX2andNANOGduringinductionprocess（*meanscomparedwithESCs，P<0.05；**meanscomparedwithESCs，P<0.01）.1.3.3誘導(dǎo)過(guò)程各個(gè)胚層標(biāo)志物變化規(guī)律隨后，我們對(duì)誘導(dǎo)過(guò)程各階段細(xì)胞的RNA采用RT-PCR方法檢測(cè)了外胚層（NESTIN、ALCAM、ANPEP）、中胚層（CD19、CD45、TNN2）和內(nèi)胚層（GATA4、GATA6、SOX7）主要標(biāo)志物的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)，更換軟骨干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基后外胚層標(biāo)志物在誘導(dǎo)末期表達(dá)都升高，與誘導(dǎo)前的ESCs相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而中胚層和內(nèi)胚層的標(biāo)志物，除了H1細(xì)胞系的Tnn2在誘導(dǎo)末期增高外，其他基因幾乎都沒(méi)有表達(dá)（圖4）。隨后我們對(duì)誘導(dǎo)各個(gè)階段的細(xì)胞進(jìn)行深度測(cè)序，并從中篩選出更多各個(gè)胚層的標(biāo)志基因。通過(guò)比較誘導(dǎo)后細(xì)胞與ESCs各胚層基因的表達(dá)差異，我們發(fā)現(xiàn)外胚層標(biāo)志基因在誘導(dǎo)完成后的細(xì)胞中普遍高表達(dá)，而中、內(nèi)胚層的基因表達(dá)則顯著降低（圖5）。
本文編號(hào)：3209506
【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
胚胎干細(xì)胞免疫熒光染色（標(biāo)尺：100μm）
圖 1. 胚胎干細(xì)胞免疫熒光染色（標(biāo)尺：100μm）。A. 胚胎干細(xì)胞 OCT4 免疫熒光染色。 B. 胚胎干細(xì)胞 SOX2 免疫熒光染色。Figure 1. Immunofluorescence staining of embryonic stem cells . A. Immunofluorescencestaining of OCT4. B. Immunofluorescence staining of SOX2. (bar 100μm )
上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士論文161.3.2誘導(dǎo)分化過(guò)程中多能干細(xì)胞標(biāo)志變化規(guī)律對(duì)ESCs、誘導(dǎo)分化不同階段的細(xì)胞分別收集其RNA，檢測(cè)全能干細(xì)胞標(biāo)志物OCT4、SOX2和NANOG的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，以ESCs為參考，在外胚層誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)后各時(shí)間點(diǎn)3天、6天、16天和更換軟骨干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基后12天，OCT4、SOX2和NANOG均無(wú)表達(dá)（圖3）。兩種不同胚胎干細(xì)胞系H1和Hues9較為一致。圖3.誘導(dǎo)過(guò)程中OCT4、SOX2和NANOG的表達(dá)（*表示與胚胎干細(xì)胞比，P<0.05；**表示與胚胎干細(xì)胞比，P<0.01）。Figure3.theexpressionofOCT4、SOX2andNANOGduringinductionprocess（*meanscomparedwithESCs，P<0.05；**meanscomparedwithESCs，P<0.01）.1.3.3誘導(dǎo)過(guò)程各個(gè)胚層標(biāo)志物變化規(guī)律隨后，我們對(duì)誘導(dǎo)過(guò)程各階段細(xì)胞的RNA采用RT-PCR方法檢測(cè)了外胚層（NESTIN、ALCAM、ANPEP）、中胚層（CD19、CD45、TNN2）和內(nèi)胚層（GATA4、GATA6、SOX7）主要標(biāo)志物的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)，更換軟骨干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基后外胚層標(biāo)志物在誘導(dǎo)末期表達(dá)都升高，與誘導(dǎo)前的ESCs相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而中胚層和內(nèi)胚層的標(biāo)志物，除了H1細(xì)胞系的Tnn2在誘導(dǎo)末期增高外，其他基因幾乎都沒(méi)有表達(dá)（圖4）。隨后我們對(duì)誘導(dǎo)各個(gè)階段的細(xì)胞進(jìn)行深度測(cè)序，并從中篩選出更多各個(gè)胚層的標(biāo)志基因。通過(guò)比較誘導(dǎo)后細(xì)胞與ESCs各胚層基因的表達(dá)差異，我們發(fā)現(xiàn)外胚層標(biāo)志基因在誘導(dǎo)完成后的細(xì)胞中普遍高表達(dá)，而中、內(nèi)胚層的基因表達(dá)則顯著降低（圖5）。
本文編號(hào)：3209506
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/yxlbs/3209506.html
最近更新
教材專著
