背景及目的:帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）是中老年人群中常見的神經(jīng)變性疾病,不僅給患者、家庭帶來了身體和心理的痛苦,同時也給社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。其病理特征是黑質(zhì)中的多巴能神經(jīng)元進(jìn)行性喪失,紋狀體內(nèi)多巴胺含量下降,α突觸核蛋白（α-Syn）聚集以及神經(jīng)炎癥過度表達(dá)在帕金森病中扮演了重要的角色�；谟锌蚣芰Ⅲw定向技術(shù)的丘腦底核腦深部電刺激術(shù)（Deep brain stimulation of Subthalamic nucleus,STN-DBS）可以顯著改善帕金森病運動癥狀,但對非運動癥狀的改善存在不確定性,如何改善患者運動癥狀的同時改善非運動癥狀是諸多醫(yī)療科技工作者研究的重點。近年來,小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥反應(yīng)在帕金森病發(fā)病機制和調(diào)控中的作用越來越得到重視,研究表明,mi RNA在α-syn誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,mi R-let-7a是let-7家族非常重要的成員,被發(fā)現(xiàn)在體外條件下可調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥,我們假設(shè)mi R-let-7a可能在PD發(fā)病中起作用,并試圖探討其機制。本研究從臨床上回顧性分析江西省人民醫(yī)院行STN-DBS手術(shù)治療的... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

(A-B)術(shù)前計劃，C術(shù)后電極與術(shù)前計劃對比，(D-E)術(shù)中電極植入照片，F(xiàn)術(shù)后頭顱CT，電極在位，無出血及顱內(nèi)積氣等表現(xiàn)

第3章立體定向技術(shù)在鼠帕金森病模型中的應(yīng)用：miR-let-7a通過靶向STAT3抑制α-突觸核蛋白誘導(dǎo)的帕金森病炎癥反應(yīng)27我們首先在帕金森病小鼠模型中檢測了上述指標(biāo)的表達(dá)。造模成功3周后，通過實時定量PCR(qRT-PCR)分析，模型組的小鼠SNpc中miR-let-7a的表達(dá)水平明顯低于對照組(圖6A)。同時，Westernblot實驗證實，STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)的表達(dá)水平較對照組顯著升高(圖6B)。以上結(jié)果表明了miR-let-7a和STAT3水平在小鼠帕金森病模型中負(fù)相關(guān)的表達(dá)模式。由于帕金森病病理過程中的神經(jīng)炎癥反應(yīng)主要由小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)，我們在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV-2中檢測了上述指標(biāo)，結(jié)果與動物模型一致。并且發(fā)現(xiàn)α-Syn以濃度依賴方式調(diào)控miR-let-7a水平（圖6C）、STAT3水平以及磷酸化STAT3水平（圖6D），隨著α-Syn濃度的提升，miR-let-7a水平逐漸降低，而STAT3水平以及磷酸化STAT3水平逐漸升高。圖6在α-sync誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型和小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株中，miR-let-7a和STAT3表達(dá)水平相反。(A)將AAV2-vector或AAV2-α-SynPBS溶液注射入小鼠SNpc。每組12只小鼠。注射后3周取出SNpc，通過qRT-PCR分析miR-let-7a水平。使用內(nèi)參對數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。(B)Westernblotting檢測SNpc中STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表達(dá)。每組4只小鼠。（C-D）用1、5、10ug/ml不同濃度的重組蛋白α-Syn處理BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞24h分別通過qRT-PCR和Westernblotting檢測miR-let-7a、STAT3、p-STAT3水平。3.3.2BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞株中，STAT3是miR-let-7a的直接靶標(biāo)miRNAs通常通過一種序列特異的方式負(fù)性調(diào)控基因表達(dá)。通過觀察α

第3章立體定向技術(shù)在鼠帕金森病模型中的應(yīng)用：miR-let-7a通過靶向STAT3抑制α-突觸核蛋白誘導(dǎo)的帕金森病炎癥反應(yīng)28-Syn誘導(dǎo)的miR-let-7a和STAT3的反向調(diào)控現(xiàn)象，我們猜測在小膠質(zhì)細(xì)胞中，STAT3是miR-let-7a的直接作用靶點。為了驗證這一假說，首先，我們進(jìn)行了數(shù)據(jù)庫檢索，通過TargetScan數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)miR-let-7a和STAT3之間有一段互補序列（圖7A）。為了進(jìn)一步驗證miR-let-7a和STAT3的相互作用，我們構(gòu)建了STAT3的3’UTR載體，通過熒光素酶報告實驗進(jìn)行驗證，發(fā)現(xiàn)miR-let-7a過表達(dá)或者敲低之后會反向調(diào)控野生型STAT3的3’UTR表達(dá)水平（圖7B-C）。除此之外，還證實了miR-let-7a的表達(dá)水平直接影響了STAT3的mRNA水平：miR-let-7a過表達(dá)后，STAT3表達(dá)顯著降低，而miR-let-7a敲除后，STAT3表達(dá)升高。以上實驗表明miR-let-7a可以直接靶向作用于STAT3（圖7D-E）。我們通過westernblot實驗檢測了STAT3和p-STAT3的蛋白水平，結(jié)果同前所述，進(jìn)一步證實了經(jīng)過α-Syn處理的BV-2細(xì)胞中miR-let-7a和STAT3的表達(dá)關(guān)系變化（圖7F）。圖7在BV-2細(xì)胞中STAT3作為miR-let-7a的直接靶標(biāo)。（A）通過Targetscan分析miR-let-7a和STAT33’UTR的序列關(guān)系。（B-C）miR-let-7a過表達(dá)或敲低時STAT33’UTR水平變化。（D-E）BV-2細(xì)胞中miR-let-7a過表達(dá)以及敲低之后miR-let-7a和STAT3的表達(dá)水平變化。（F）進(jìn)一步證實α-Syn、miR-let-7a和STAT3三者之間的相互作用關(guān)系，結(jié)論同前。3.3.3miR-let-7a在BV-2細(xì)胞中通過靶向STAT3抑制α-Syn誘導(dǎo)的促炎反應(yīng)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和激發(fā)炎癥對于帕金森病的發(fā)展至關(guān)重要，因此我們探究了miR-let-7a-STAT3信號軸對于α-Syn在體外誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和炎癥

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]立體定向微創(chuàng)穿刺置管引流與開顱血腫清除手術(shù)治療基底核區(qū)腦出血療效比較[J]. 周艷,夏莉君,陳映.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2020(02)
[2]轉(zhuǎn)突變型A53Tα-突觸核蛋白基因的帕金森模型小鼠中腦的全基因組甲基化測序分析[J]. 吳婷,劉琳,黎昭,林賢.  中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2020(01)
[3]伐侖克林靶向α-syn蛋白對帕金森病大鼠的機制研究[J]. 孫偉,趙守財,儲照虎.  腦與神經(jīng)疾病雜志. 2020(01)
[4]小鼠紋狀體與視網(wǎng)膜的比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析[J]. 須周恒,朱營利,孫孟菲,魏志遠(yuǎn),潘佳琪,潘旭斌,陳建歡.  深圳大學(xué)學(xué)報(理工版). 2020(01)
[5]單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂對帕金森病癡呆模型大鼠的保護(hù)性治療作用[J]. 潘燕,馬亞新,朱靜,白楊.  卒中與神經(jīng)疾病. 2019(06)
[6]基于視覺定位的國產(chǎn)機器人輔助腦深部電刺激電極植入的精準(zhǔn)性研究[J]. 劉煥光,楊岸超,劉德峰,張建國.  中華神經(jīng)外科雜志. 2019(10)
[7]硫辛酸對帕金森病小鼠模型自噬蛋白表達(dá)水平的影響[J]. 王文慧,趙虹,蘇正偉.  卒中與神經(jīng)疾病. 2019(05)
[8]TRIF在秋水仙素致小鼠紋狀體-黑質(zhì)軸突退變模型中的作用[J]. 周紅利,林森,李淑蓉,孫靜,蘇炳銀.  成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2019(05)
[9]我國成功完成世界首例5G遠(yuǎn)程操控顱腦手術(shù)[J].   微創(chuàng)醫(yī)學(xué). 2019(04)
[10]邊緣前皮質(zhì)α2腎上腺素受體調(diào)節(jié)帕金森病模型大鼠的抑郁樣行為[J]. 吳仲恒,王濤,惠艷娉,李立博,張巧俊.  西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019(05)



本文編號：3208863