多能性干細(xì)胞擁有自我更新同時(shí)可以分化為任何類(lèi)別細(xì)胞的能力,因此有著無(wú)限的應(yīng)用前景。近些年來(lái)的研究表明,代謝重編程對(duì)于多能性干細(xì)胞至關(guān)重要,多能干細(xì)胞擁有一套獨(dú)特的代謝系統(tǒng),并且這種獨(dú)特的代謝體系往往與其狀態(tài)密切相關(guān),然而有關(guān)多能性干細(xì)胞中獨(dú)特的代謝系統(tǒng)目前研究很少,關(guān)于這些獨(dú)特的代謝系統(tǒng)在多能干細(xì)胞中是如何被調(diào)控的以及發(fā)揮的作用是什么也鮮有報(bào)道。在本課題中,我們發(fā)現(xiàn)多能性干細(xì)胞通過(guò)表達(dá)GLDC進(jìn)而活化甘氨酸剪切系統(tǒng),活化的甘氨酸剪切系統(tǒng)一方面幫助多能性干細(xì)胞維持一碳單位儲(chǔ)備,一方面避免丙酮醛的積累,同時(shí),活化的甘氨酸剪切系統(tǒng)也是體細(xì)胞重編程的必要條件。代謝的改變已經(jīng)成為腫瘤的重要標(biāo)志之一,例如腫瘤細(xì)胞傾向于利用有氧糖酵解而不是相對(duì)更加高效的氧化磷酸化的方式產(chǎn)能,雖然對(duì)于這方面的研究已經(jīng)有了許多,但是代謝重編程和腫瘤的關(guān)系仍然不是十分清楚。在我們的工作中,我們鑒定出CUEDC2對(duì)于腫瘤細(xì)胞Warburg效應(yīng)的促進(jìn)至關(guān)重要。機(jī)制上,我們發(fā)現(xiàn)CUEDC2通過(guò)GLUT3和LDHA來(lái)調(diào)控腫瘤的Warburg效應(yīng)。同時(shí)我們也在肝癌病人臨床樣本中發(fā)現(xiàn)了CUEDC2與GLUT3和LDHA存在著異常的共... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 胚胎干細(xì)胞與誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞
        1.2.1 胚胎干細(xì)胞研究狀況
        1.2.2 體細(xì)胞重編程
        1.2.3 體細(xì)胞重編程的研究進(jìn)展
        1.2.4 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的調(diào)控研究
    1.3 多能性干細(xì)胞與代謝
        1.3.1 胚胎干細(xì)胞的代謝系統(tǒng)及調(diào)控
        1.3.2 體細(xì)胞重編程與代謝
        1.3.3 體細(xì)胞重編程的代謝調(diào)控
    1.4 甘氨酸剪切系統(tǒng)的功能及研究
        1.4.1 甘氨酸剪切系統(tǒng)
        1.4.2 甘氨酸剪切系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.4.3 甘氨酸剪切系統(tǒng)的研究展望
    1.5 腫瘤細(xì)胞與代謝異常
        1.5.1 脂代謝與腫瘤
        1.5.2 氨基酸代謝與腫瘤
        1.5.3 糖代謝與腫瘤
    1.6 CUEDC2與腫瘤
        1.6.1 CUEDC2
        1.6.2 CUEDC2與腫瘤
        1.6.3 CUEDC2與腫瘤代謝的研究展望
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 所用細(xì)胞,動(dòng)物及來(lái)源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用抗體
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)所用儀器
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基及緩沖液
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠原代成纖維細(xì)胞MEF的制備
        2.2.2 滋養(yǎng)層細(xì)胞(feeder)制作
        2.2.3 小鼠胚胎干細(xì)胞/iPS細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.4 人胚胎干細(xì)胞/iPS細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.5 小鼠體細(xì)胞重編程
        2.2.6 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的鑒定
        2.2.7 Western blot
        2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 分子克隆
        2.2.10 細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染以及建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
        2.2.11 染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(ChIP)
        2.2.12 熒光素酶雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.13 GC-MS檢測(cè)相關(guān)代謝產(chǎn)物
        2.2.14 LC-MS檢測(cè)相關(guān)代謝產(chǎn)物
        2.2.15 C14閃爍計(jì)數(shù)檢測(cè)甘氨酸剪切系統(tǒng)的活性
        2.2.16 RNA免疫沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 衰老相β-半乳糖苷酶染色
        2.2.18 丙酮醛含量檢測(cè)
第三章 GLDC激活甘氨酸剪切系統(tǒng)促進(jìn)干細(xì)胞生存
    3.1 多能性干細(xì)胞與體細(xì)胞存在著巨大的代謝差異
    3.2 Sox2和Lin28A協(xié)作促進(jìn)GLDC表達(dá)的激活
    3.3 甘氨酸剪切系統(tǒng)促進(jìn)—碳單位的生成同時(shí)防止丙酮醛的積累
    3.4 總結(jié)與討論
第四章 CUEDC2促進(jìn)腫瘤的Warburg效應(yīng)
    4.1 CUEDC2在肝癌細(xì)胞中促進(jìn)腫瘤的Warburg效應(yīng)
    4.2 CUEDC2通過(guò)GLUT3以及LDHA促進(jìn)肝癌的Warburg效應(yīng)
    4.3 CUEDC2通過(guò)糖皮質(zhì)激素受體GR調(diào)控GLUT3的表達(dá)
    4.4 CUEDC2通過(guò)14-3-3ζ調(diào)控LDHA的泛素化降解
    4.5 CUEDC2通過(guò)GLUT3和LDHA調(diào)控肝癌的進(jìn)程
    4.6 GLUT3和LDHA在肝癌臨床樣本中與CUEDC2存在著共表達(dá)
    4.7 總結(jié)和討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的論文與取得的其他成果



本文編號(hào)：3206443