發(fā)布時間：2021-05-26 13:21

　　多能性干細胞擁有自我更新同時可以分化為任何類別細胞的能力,因此有著無限的應(yīng)用前景。近些年來的研究表明,代謝重編程對于多能性干細胞至關(guān)重要,多能干細胞擁有一套獨特的代謝系統(tǒng),并且這種獨特的代謝體系往往與其狀態(tài)密切相關(guān),然而有關(guān)多能性干細胞中獨特的代謝系統(tǒng)目前研究很少,關(guān)于這些獨特的代謝系統(tǒng)在多能干細胞中是如何被調(diào)控的以及發(fā)揮的作用是什么也鮮有報道。在本課題中,我們發(fā)現(xiàn)多能性干細胞通過表達GLDC進而活化甘氨酸剪切系統(tǒng),活化的甘氨酸剪切系統(tǒng)一方面幫助多能性干細胞維持一碳單位儲備,一方面避免丙酮醛的積累,同時,活化的甘氨酸剪切系統(tǒng)也是體細胞重編程的必要條件。代謝的改變已經(jīng)成為腫瘤的重要標志之一,例如腫瘤細胞傾向于利用有氧糖酵解而不是相對更加高效的氧化磷酸化的方式產(chǎn)能,雖然對于這方面的研究已經(jīng)有了許多,但是代謝重編程和腫瘤的關(guān)系仍然不是十分清楚。在我們的工作中,我們鑒定出CUEDC2對于腫瘤細胞Warburg效應(yīng)的促進至關(guān)重要。機制上,我們發(fā)現(xiàn)CUEDC2通過GLUT3和LDHA來調(diào)控腫瘤的Warburg效應(yīng)。同時我們也在肝癌病人臨床樣本中發(fā)現(xiàn)了CUEDC2與GLUT3和LDHA存在著異常的共... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 胚胎干細胞與誘導(dǎo)多能性干細胞
        1.2.1 胚胎干細胞研究狀況
        1.2.2 體細胞重編程
        1.2.3 體細胞重編程的研究進展
        1.2.4 誘導(dǎo)多能性干細胞的調(diào)控研究
    1.3 多能性干細胞與代謝
        1.3.1 胚胎干細胞的代謝系統(tǒng)及調(diào)控
        1.3.2 體細胞重編程與代謝
        1.3.3 體細胞重編程的代謝調(diào)控
    1.4 甘氨酸剪切系統(tǒng)的功能及研究
        1.4.1 甘氨酸剪切系統(tǒng)
        1.4.2 甘氨酸剪切系統(tǒng)的研究進展
        1.4.3 甘氨酸剪切系統(tǒng)的研究展望
    1.5 腫瘤細胞與代謝異常
        1.5.1 脂代謝與腫瘤
        1.5.2 氨基酸代謝與腫瘤
        1.5.3 糖代謝與腫瘤
    1.6 CUEDC2與腫瘤
        1.6.1 CUEDC2
        1.6.2 CUEDC2與腫瘤
        1.6.3 CUEDC2與腫瘤代謝的研究展望
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 所用細胞,動物及來源
        2.1.2 實驗材料與試劑
        2.1.3 實驗所用引物
        2.1.4 實驗所用抗體
        2.1.5 實驗所用儀器
        2.1.6 實驗所用培養(yǎng)基及緩沖液
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠原代成纖維細胞MEF的制備
        2.2.2 滋養(yǎng)層細胞(feeder)制作
        2.2.3 小鼠胚胎干細胞/iPS細胞培養(yǎng)
        2.2.4 人胚胎干細胞/iPS細胞培養(yǎng)
        2.2.5 小鼠體細胞重編程
        2.2.6 誘導(dǎo)多能性干細胞的鑒定
        2.2.7 Western blot
        2.2.8 實時熒光定量PCR實驗
        2.2.9 分子克隆
        2.2.10 細胞系的轉(zhuǎn)染以及建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系
        2.2.11 染色質(zhì)免疫共沉淀實驗(ChIP)
        2.2.12 熒光素酶雙報告基因?qū)嶒?br>        2.2.13 GC-MS檢測相關(guān)代謝產(chǎn)物
        2.2.14 LC-MS檢測相關(guān)代謝產(chǎn)物
        2.2.15 C14閃爍計數(shù)檢測甘氨酸剪切系統(tǒng)的活性
        2.2.16 RNA免疫沉淀實驗
        2.2.17 衰老相β-半乳糖苷酶染色
        2.2.18 丙酮醛含量檢測
第三章 GLDC激活甘氨酸剪切系統(tǒng)促進干細胞生存
    3.1 多能性干細胞與體細胞存在著巨大的代謝差異
    3.2 Sox2和Lin28A協(xié)作促進GLDC表達的激活
    3.3 甘氨酸剪切系統(tǒng)促進—碳單位的生成同時防止丙酮醛的積累
    3.4 總結(jié)與討論
第四章 CUEDC2促進腫瘤的Warburg效應(yīng)
    4.1 CUEDC2在肝癌細胞中促進腫瘤的Warburg效應(yīng)
    4.2 CUEDC2通過GLUT3以及LDHA促進肝癌的Warburg效應(yīng)
    4.3 CUEDC2通過糖皮質(zhì)激素受體GR調(diào)控GLUT3的表達
    4.4 CUEDC2通過14-3-3ζ調(diào)控LDHA的泛素化降解
    4.5 CUEDC2通過GLUT3和LDHA調(diào)控肝癌的進程
    4.6 GLUT3和LDHA在肝癌臨床樣本中與CUEDC2存在著共表達
    4.7 總結(jié)和討論
參考文獻
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的論文與取得的其他成果



本文編號：3206443