類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯淖陨砻庖咝约膊?臨床表現(xiàn)為滑膜炎,繼發(fā)軟骨破壞、關(guān)節(jié)間隙變窄,晚期因骨質(zhì)破壞而致殘。研究表明:Th17細(xì)胞在關(guān)節(jié)炎發(fā)病中發(fā)揮重要作用,抑制其分化和功能會(huì)是一種有效的治療方法。人們對T細(xì)胞內(nèi)在因素如何調(diào)控Th17細(xì)胞的分化和功能研究得較為清楚,但對T細(xì)胞外在因素如何調(diào)控Th17細(xì)胞的分化及Th17細(xì)胞介導(dǎo)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎還知之甚少。Th17細(xì)胞的分化需要抗原遞呈細(xì)胞提供固有免疫信號。樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cells,DCs）是抗原遞呈能力最強(qiáng)的固有免疫細(xì)胞,但DCs在外界刺激后如何通過其胞內(nèi)的信號通路來調(diào)控Th17細(xì)胞的分化還不是十分清楚。有絲分裂原激活的蛋白激酶信號通路是DCs感知外界刺激并作出免疫應(yīng)答的重要信號通路之一,主要包括p38、JNK和ERK,其中p38是最主要的調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)的蛋白激酶,但是DCs中p38α如何調(diào)控關(guān)節(jié)炎的發(fā)病是不清楚的。本文研究了在DCs中特異性地敲除p38α(p38α^△DC)對于關(guān)節(jié)炎的影響。我們發(fā)現(xiàn)敲除DCs中p38α可以降低CFA/CII誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率和嚴(yán)重程度,伴隨p38α

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
        1.1.1 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎概述
        1.1.2 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理變化
        1.1.3 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病原因
    1.2 樹突狀細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
        1.2.1 樹突狀細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)起源
        1.2.2 樹突狀細(xì)胞的功能概述
        1.2.3 樹突狀細(xì)胞的分類以及亞群功能
        1.2.4 樹突狀細(xì)胞在T細(xì)胞分化中的作用
        1.2.5 樹突狀細(xì)胞與RA的發(fā)生與發(fā)展
    1.3 p38α信號通路與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
        1.3.1 MAPK家族
        1.3.2 p38 MAPK家族
        1.3.3 p38 MAPKs的上游信號
        1.3.4 p38 MAPKs的下游靶點(diǎn)
        1.3.5 p38 MAPKs在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 小鼠基因型鑒定引物
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要液體試劑的配制
        2.1.4 主要的儀器設(shè)備
        2.1.5 其他實(shí)驗(yàn)用材料及器具
    2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.1 條件性敲除小鼠p38α~(△DC)構(gòu)建
        2.2.2 K/BxN小鼠
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 小鼠組織DNA樣本的制備
        2.3.2 PCR法鑒定小鼠基因型
        2.3.3 小鼠關(guān)節(jié)炎疾病模型的制備
        2.3.4 小鼠脾臟單細(xì)胞懸液制備
        2.3.5 小鼠脾臟單細(xì)胞懸液制備(檢測脾臟中的DC)
        2.3.6 小鼠淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液制備
        2.3.7 小鼠淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液制備(檢測淋巴結(jié)中的DC)
        2.3.8 小鼠關(guān)節(jié)浸潤細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備
        2.3.9 小鼠外周血血清制備
        2.3.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子的表達(dá)
        2.3.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞胞內(nèi)蛋白的表達(dá)
        2.3.12 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞核內(nèi)蛋白的表達(dá)
        2.3.13 小鼠初始T淋巴細(xì)胞的分選
        2.3.14 小鼠樹突狀細(xì)胞DC的分選
        2.3.15 ELISA法檢測自身抗體
        2.3.16 ELISA法檢測細(xì)胞因子
        2.3.17 RNA提取(Trizol法)
        2.3.18 RNA提取(試劑盒法)
        2.3.19 逆轉(zhuǎn)錄
        2.3.20 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.3.21 Westernblot檢測蛋白樣本的制備
        2.3.22 BCA法檢測蛋白濃度
        2.3.23 Westernblot檢測蛋白
        2.3.24 關(guān)節(jié)組織石蠟切片制備
        2.3.25 關(guān)節(jié)組織蘇木素-伊紅染色
        2.3.26 關(guān)節(jié)組織番紅固綠染色
        2.3.27 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 實(shí)驗(yàn)小鼠的建立及鑒定
        3.1.1 樹突狀細(xì)胞條件性敲除p38α小鼠的建立
        3.1.2 樹突狀細(xì)胞條件性敲除p38α小鼠的鑒定
        3.1.3 KRN小鼠基因型的鑒定
        3.1.4 K/BxN小鼠模型的建立
    3.2 DCs p38α介導(dǎo)CIA誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)生
        3.2.1 p38α參與CIA的發(fā)病過程
        3.2.2 DCs中 p38α參與關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展
    3.3 DCs中 p38α促進(jìn)膠原誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)炎進(jìn)展
        3.3.1 DC中 p38α促進(jìn)關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展以及炎性細(xì)胞浸潤
        3.3.2 p38α~(△DC)小鼠中Th17 細(xì)胞減少
        3.3.3 DCs中 p38α不影響CD4+T 淋巴細(xì)胞的比例、凋亡和增殖
        3.3.4 DCs中 p38α不影響CD4+T 淋巴細(xì)胞的活化
        3.3.5 p38α~(△DC)小鼠中初始T淋巴細(xì)胞啟動(dòng)缺陷
    3.4 DCs中 p38α如何促進(jìn)Th17 細(xì)胞的產(chǎn)生
        3.4.1 p38α的缺失并不影響DCs自身的凋亡與增殖
        3.4.2 p38α缺失的DCs誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化的第一信號減弱
        3.4.3 p38α缺失的DCs并不影響誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化的第二信號
        3.4.4 p38α缺失的DCs中細(xì)胞因子的變化情況
        3.4.5 p38α缺失的DCs遷移至引流淋巴結(jié)功能缺陷
        3.4.6 FITC誘導(dǎo)的皮膚中p38α缺失的DCs遷移缺陷
        3.4.7 p38α缺失的DCs通過JNK-c-Jun上調(diào)IL-27的表達(dá)
    3.5 DCs中 p38α促進(jìn)抗體的產(chǎn)生以及抗體介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病
        3.5.1 p38α~(△DC)小鼠血清中自身抗體濃度下降
        3.5.2 DCs中 p38α促進(jìn)Tfh和 GC B的生成
        3.5.3 DCs中 p38α促進(jìn)抗體誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎發(fā)病
        3.5.4 DCs中 p38α促進(jìn)血清誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎并不依賴Th17 細(xì)胞
        3.5.5 DCs中 p38α促進(jìn)抗體介導(dǎo)的Tfh和 GC B細(xì)胞的生成
    3.6 p38α在成纖維樣滑膜細(xì)胞中的作用
        3.6.1 成纖維樣滑膜細(xì)胞中p38α可以被多種刺激活化
        3.6.2 p38α促進(jìn)成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖和遷移,抑制其凋亡
        3.6.3 p38α-MK2介導(dǎo)IL-17 誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的分泌
    3.7 p38α在 CFA/CII誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎中的治療效果
第四章 全文總結(jié)與討論
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文編號：3193956