發(fā)布時(shí)間：2021-05-18 04:46

　　DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOP2）作為一種復(fù)雜的分子機(jī)器,它在RNA的轉(zhuǎn)錄、DNA的復(fù)制以及染色體的壓縮和解凝等細(xì)胞基礎(chǔ)活動(dòng)中通過(guò)短暫的剪切雙鏈DNA并在原位重新連接斷端的方式,松弛、解螺旋DNA雙鏈來(lái)調(diào)整DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),是細(xì)胞生長(zhǎng)存活必不可少的酶類。針對(duì)TOP2的這一特性已開(kāi)發(fā)出了多種干擾細(xì)胞增殖的藥物,比如臨床上廣泛使用的TOP2靶向化療藥物替尼泊苷（VM-26）、依托泊苷（VP-16）和阿霉素（DOX）等。這類藥物通過(guò)抑制TOP2的DNA再連接活性,增加并穩(wěn)定TOP2-DNA共價(jià)復(fù)合物（TOP2ccs）,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡,因此也被稱為T(mén)OP2毒藥。目前研究表明與DNA形成共價(jià)復(fù)合物的TOP2會(huì)被26S蛋白酶體降解,從而暴露出隱藏在TOP2ccs復(fù)合物中的DNA雙鏈斷裂（DSBs）,觸發(fā)DNA損傷反應(yīng);如果這些DSBs不能正確修復(fù)則會(huì)導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定性以及染色體重排。臨床上用這類藥物治療的患者,常常會(huì)產(chǎn)生復(fù)發(fā)性的惡性腫瘤和心臟毒性也正是因?yàn)檫@個(gè)原因。在人類基因組上編碼了兩種類型的TOP2分別為T(mén)OP2α和TOP2β,有研究表明TOP2α是介導(dǎo)TOP2毒藥細(xì)胞毒性的亞型,而TOP... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
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英文摘要
縮略詞表
1引言
    1.1 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)
    1.2 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 靶向TOP2抗腫瘤藥物的作用機(jī)制
    1.4 本研究的創(chuàng)新性和意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系與菌株
        2.1.2 質(zhì)粒、siRNA及sgRNA
        2.1.3 重要化合物
        2.1.4 抗體
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.1.6 試劑耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟和方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 TOP2β是CRLE3s泛素連接酶的新底物
    3.2 SCFβ-TrCP通過(guò)泛素化修飾TOP2β調(diào)控其蛋白水平
    3.3 TOP2β的泛素化依賴于β-TrCP的降解基序
    3.4 ATM激酶磷酸化TOP2β并促進(jìn)其降解
    3.5 CK1激酶磷酸化TOP2β并促進(jìn)其降解
    3.6 SCFβ-TrCP的失活抑制TOP2β的降解而降低DNA損傷應(yīng)答反應(yīng)
    3.7 TOP2β降解受抑制促進(jìn)細(xì)胞凋亡并增敏腫瘤細(xì)胞對(duì)V M-26 的應(yīng)答
4 討論和展望
5 參考文獻(xiàn)
6 附錄常用試劑及其配方
綜述 泛素化和SUMO化介導(dǎo)調(diào)控拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ-DNA剪切復(fù)合物水平的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果



本文編號(hào)：3193139