細胞分裂是由一系列精密調(diào)控的事件組成,而胞內(nèi)代謝水平與細胞的生存狀態(tài)緊密相關(guān),因此細胞分裂的不同階段會引發(fā)不同的代謝變化。E3泛素酶后期促進復(fù)合物（Anaphase-promoting Complex,APC/C）作為細胞周期重要的中心調(diào)控機制,與其共激活因子CDH1和CDC20共同催化周期相關(guān)蛋白及時降解,以保證細胞順利分裂。然而,APC/C不僅調(diào)控細胞周期,還被發(fā)現(xiàn)能作用于PFKFB3以及GLS1,進而調(diào)控腫瘤細胞的糖酵解途徑和谷氨酰胺代謝途徑,提示APC/C具有連接細胞周期及腫瘤代謝的作用。本課題在2752個代謝酶和轉(zhuǎn)運體中篩選同時含有APC/C結(jié)合序列KEN box和D box且在食管鱗癌測序數(shù)據(jù)中拷貝數(shù)變異頻率超過20%的基因,得到17個可能受到APC/C調(diào)控的酶和轉(zhuǎn)運體。由于APC/C對TCA循環(huán)的調(diào)控尚未被發(fā)現(xiàn),而我們在食管鱗癌細胞中觀察到三羧酸（Tricarboxylic acid cycle,TCA）循環(huán)的代謝產(chǎn)物α-酮戊二酸（α-ketoglutarate,α-KG）、延胡索酸及蘋果酸與S期具有正相關(guān)關(guān)系,暗示了細胞周期與TCA循環(huán)的潛在聯(lián)系。因此我們在17個候選蛋... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：170 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
第一部分 APC/C-CDH1調(diào)控的TCA循環(huán)代謝酶IDH3β促進細胞生長的機制研究
    中英文縮略詞表
    中文摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
        1. 實驗材料
            1.1 菌種、質(zhì)粒和細胞株
            1.2 實驗動物
            1.3 主要試劑
            1.4 引物合成與設(shè)計
            1.5 siRNA的合成
            1.6 主要儀器設(shè)備
            1.7 常用試劑的配置
        2. 實驗方法
            2.1 細胞處理方法
            2.2 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
            2.3 細胞增殖實驗
            2.4 細胞周期檢測
            2.5 細胞克隆形成實驗
            2.6 細胞周期同步化
            2.7 細胞藥物處理
            2.8 細胞總蛋白和總RNA的提取
            2.9 細胞和RNA濃度測定
            2.10 Western blot
            2.11 胞膜-胞漿-胞核蛋白制備(參見說明書要求)
            2.12 逆轉(zhuǎn)錄與Real-time PCR
            2.13 細胞免疫熒光
            2.14 EDU增殖檢測
            2.15 原位PLA檢測
            2.16 質(zhì)粒大量提取(按照說明書要求操作)
            2.18 免疫共沉淀實驗
            2.19 裸鼠移植瘤實驗
            2.20 TCA代謝產(chǎn)物檢測
            2.21 穩(wěn)定細胞系的篩選
            2.22 統(tǒng)計分析
    實驗結(jié)果
        1. 篩選APC/C的潛在底物
        2. IDH3β是APC/C-CDH1的特異性結(jié)合底物
        3. APC/C-CDH1參與調(diào)控IDH3β的周期依賴性表達
        4. IDH3β調(diào)控食管鱗癌細胞G1/S期轉(zhuǎn)換
        5. IDH3β促進管鱗癌細胞細胞增殖
        6. IDH3β作為IDH3的亞基之一能促進TCA循環(huán)的氧化代謝
        7. IDH3β依賴其催化產(chǎn)物α-KG來加快G1/S期轉(zhuǎn)換并促進細胞增殖
        8. 過表達IDH3β上調(diào)PFKFB3的總蛋白以及在細胞核內(nèi)的水平
        9. IDH3β在食管鱗癌組織中高表達并且與預(yù)后相關(guān)
        10. IDH3β在本研究中的主要功能模式圖
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
第二部分 腫瘤抗原在食管鱗癌進展中的作用及分子機制研究
    中英文縮略詞表
    中文摘要
    Abstract
    前言
    材料與方法
        1. 實驗材料
            1.1 菌種、質(zhì)粒和細胞株
            1.2 實驗動物
            1.3 主要試劑
            1.4 引物合成與設(shè)計
            1.5 siRNA的合成
            1.6 主要儀器設(shè)備
            1.7 常用試劑的配置
        2. 實驗方法
            2.1 細胞處理方法
            2.2 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
            2.3 細胞增殖實驗
            2.4 細胞總蛋白和總RNA的提取
            2.5 細胞和RNA濃度測定
            2.6 逆轉(zhuǎn)錄與Real-time PCR
            2.7 胞膜-胞漿-胞核蛋白制備
            2.8 Western blot
            2.9 原位PLA檢測
            2.10 細菌轉(zhuǎn)化
            2.11 質(zhì)粒大量提取
            2.12 免疫共沉淀實驗
            2.13 裸鼠移植瘤實驗
            2.14 小鼠尾靜脈注射實驗
            2.15 免疫組織化學(xué)實驗
            2.16 穩(wěn)定細胞系的篩選
            2.17 ELISA實驗
            2.18 組織單個細胞分離
            2.19 人外周血淋巴細胞分離實驗
            2.20 細胞殺傷實驗
            2.21 T細胞活化及共培養(yǎng)(以單孔為例)
            2.22 細胞膜表面染色實驗
            2.23 統(tǒng)計分析
    實驗結(jié)果
        1. MAGE-C3在食管鱗癌中具有突變和拷貝數(shù)擴增現(xiàn)象
        2. MAGE-C3在食管鱗癌組織中高表達并且與預(yù)后負相關(guān)
        3. MAGE-C3促進食管鱗癌細胞的侵襲遷移但不影響腫瘤細胞生長
        4. 轉(zhuǎn)錄組測序分析
        5. MAGE-C3作用于IFN-γ受體激活I(lǐng)FN-γ通路
        6. MAGE-C3可上調(diào)PD-L1的mRNA水平和膜表面水平
        7. MAGE-C3抑制淋巴細胞殺傷以及T細胞的因子分泌功能
        8. MAGE-C3在免疫完全小鼠中促進黑色素瘤小鼠細胞生長和轉(zhuǎn)移
        9. MAGE-C3影響黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移灶中腫瘤浸潤T細胞的類型
        10. MAGE-C3可能通過STAT3誘導(dǎo)食管鱗癌EMT
        11. MAGE-C3在本研究中的主要功能模式圖
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
附錄
基金資助
在讀期間已發(fā)表或待發(fā)表的文章
腫瘤抗原MAGE的研究進展(文獻綜述）
    參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



本文編號：3192331