成人T細胞白血�。ˋdult T-cell leukemia/lymphoma,ATL）是一種由感染人類T淋巴細胞白血病I型病毒（Human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1）誘發(fā)的惡性淋巴系增殖性疾病。Notch1信號通路是一條在進化上極為保守的信號通路,該信號通路能夠反復(fù)調(diào)控細胞增殖、分化、凋亡等生命進程。有報道稱Notch1信號通路在ATL中存在異常活化,但迄今尚未對其活化機制進行深入的研究。本文對HTLV-1病毒感染與ATL中Notch1信號通路異常活化之間的關(guān)系展開一系列研究,并獲得相關(guān)實驗數(shù)據(jù)如下:1.本研究首次發(fā)現(xiàn)HTLV-1感染激活Notch1信號通路:研究發(fā)現(xiàn)ATL細胞系中功能性Notch1（Notch1 intracellular domain,NICD1）及Notch1信號通路下游基因HES1的表達水平偏高;同時,還發(fā)現(xiàn)HTLV-1感染會引起NICD1高表達,進而誘導(dǎo)Notch下游基因HES1的高表達,實現(xiàn)對Notch信號通路的活化作用。2.證明Tax是HTLV-1激活Notch信號通路的關(guān)鍵病毒蛋白:采用報告基因技術(shù)篩選HBZ和Tax對... 

【文章來源】：華僑大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第1章 引言
    1.1 人類T淋巴細胞白血病I型病毒簡介
        1.1.1 HTLV-1 感染流行病學(xué)
        1.1.2 HTLV-1 相關(guān)性疾病及其治療方法
        1.1.3 HTLV-1 病毒顆粒概況
        1.1.4 HTLV-1 基因組結(jié)構(gòu)及其功能
        1.1.5 HTLV-1 基因表達調(diào)控
    1.2 Tax蛋白研究進展
        1.2.1 Tax蛋白概述
        1.2.2 Tax蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2.3 Tax蛋白功能
    1.3 Notch信號通路
        1.3.1 Notch信號通路組成
        1.3.2 Notch信號轉(zhuǎn)錄激活
        1.3.3 病毒與Notch信號通路的關(guān)系
    1.4 本研究的目的及意義
第2章 HTLV-1 激活Notch1 信號通路
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 抗體
        2.1.6 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)與凍存
        2.2.2 E?coli DH5α感受態(tài)的制備
        2.2.3 報告基因質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.4 堿裂解法大量提取質(zhì)粒
        2.2.5 貼壁細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 Trizol法提取總RNA提取
        2.2.7 c DNA合成
        2.2.8 Real-time PCR
        2.2.9 Western blot
        2.2.10 雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 NICD1在ATL細胞中高表達
        2.3.2 HTLV-1 病毒促進NICD1蛋白高表達
        2.3.3 HES1在ATL細胞中高表達
        2.3.4 HTLV-1 病毒激活Notch1信號通路
    2.4 結(jié)果分析與討論
第3章 HTLV-1 編碼的Tax激活Notch1信號通路
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 菌株
        3.1.3 質(zhì)粒
        3.1.4 主要試劑藥品
        3.1.5 抗體
        3.1.6 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 Cd Cl2誘導(dǎo)JPX9細胞表達Tax
        3.2.2 堿裂解法大量提取質(zhì)粒
        3.2.3 懸浮細胞轉(zhuǎn)染
        3.2.4 報告基因?qū)嶒?br>        3.2.5 Real-time PCR
        3.2.6 Western blot
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 HBZ不激活Notch1信號通路
        3.3.2 Tax激活Notch信號通路
    3.4 結(jié)果分析與討論
第4章 Tax通過NICD1激活Notch1信號通路
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 菌株
        4.1.3 質(zhì)粒
        4.1.4 主要試劑
        4.1.5 抗體
        4.1.6 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)與凍存
        4.2.2 h NICD1表達載體及其突變體構(gòu)建
        4.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        4.2.4 報告基因?qū)嶒?br>        4.2.5 Real-time PCR
        4.2.6 Western blot
        4.2.7 染色質(zhì)免疫共沉淀
        4.2.8 免疫熒光
        4.2.9 免疫共沉淀
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 Tax延長NICD1的半衰期
        4.3.2 Tax增強NICD1與CSL響應(yīng)元件的結(jié)合能力
        4.3.3 Tax與NICD1相互結(jié)合
    4.4 結(jié)果分析與討論
第5章 RBP-Jκ 參與Tax對Notch1信號通路的調(diào)控
    5.1 實驗材料
        5.1.1 細胞株
        5.1.2 菌株
        5.1.3 質(zhì)粒
        5.1.4 主要試劑
        5.1.5 抗體
        5.1.6 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 h RBP-Jκ 表達載體構(gòu)建
        5.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        5.2.3 雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)
        5.2.4 染色質(zhì)免疫共沉淀
        5.2.5 免疫共沉淀
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 RBP-Jκ 與NICD1、Tax形成三聚體
        5.3.2 Tax/NICD1/RBP-Jκ 三聚體與CSL響應(yīng)元件結(jié)合
        5.3.3 RBP-Jκ 促進Tax-NICD1介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活作用
    5.4 結(jié)果分析與討論
第6章 Notch1信號通路促使ATL發(fā)生
    6.1 實驗材料
        6.1.1 細胞株
        6.1.2 菌株
        6.1.3 質(zhì)粒
        6.1.4 主要試劑
        6.1.5 主要儀器
    6.2 實驗方法
        6.2.1 p LKO.1-puro-sh Notch1載體構(gòu)建
        6.2.2 sh Notch1穩(wěn)定株構(gòu)建
        6.2.3 細胞活力檢測
        6.2.4 Trans-well遷移實驗
        6.2.5 動物實驗
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 Notch1沉默效率檢測
        6.3.2 沉默Notch1抑制細胞增殖
        6.3.3 沉默Notch1抑制MT-2 細胞遷移
        6.3.4 沉默Notch1抑制體內(nèi)腫瘤形成
    6.4 結(jié)果分析與討論
第7章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
參考文獻
致謝
個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
    個人簡歷
    發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of post-translational modifications of HTLV-1 Tax in NF-κB activation[J]. Noula Shembade,Edward W Harhaj.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(01)



本文編號：3189216