發(fā)布時間：2021-05-09 14:33

　　Imjin20virus（MJNV）是一種感染鼩鼱的新型漢坦病毒,于2009年首次在韓國發(fā)現(xiàn)。MJNV是否感染人在本研究之前尚不明確。2017年,MJNV在我國山東青島地區(qū)的鼩鼱中也被檢測到,且陽性率高達(dá)10%。在MJNV之前,該地區(qū)報道的流行的漢坦病毒有漢灘（HNTV）和漢城（SEOV）兩種,這兩種病毒都能感染人且引起腎綜合征出血熱（HFRS）。本研究旨在通過檢測健康人和HFRS病人血清中MJNV的特異性抗體以驗證MJNV是否感染人及是否引起HFRS。該研究在原核系統(tǒng)中克隆表達(dá)了MJNV的核衣殼蛋白（NP）的部分片段,通過建立雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、IgM捕獲法ELISA和斑點印跡法（Dot20blot）來檢測人血清中的抗體。目標(biāo)人群是HFRS病人和鼩鼱中MJNV流行地區(qū)的健康人群。病人血清標(biāo)本來自山東省淄博市和青島市臨床診斷的急性期HFRS病人。健康人血清來自青島MJNV流行地區(qū)的易感人群。本研究總共收集了227份病人血清和385份疫區(qū)健康人血清。因為該疫區(qū)已知的引起HFRS的病毒為漢灘和漢城病毒,因此,收集的227份HFRS病人血清首先檢測了漢灘或漢城抗體,其中... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
論文創(chuàng)新點
中文摘要
ABSTRACT
引言
    1.漢坦病毒概述
    2.Imjin virus概述
    3.中國腎綜合征出血熱及Imjin virus流行情況
    4.發(fā)熱伴血小板減少綜合征概述
    5.研究地區(qū)發(fā)熱伴血小板減少綜合征流行情況
    6.研究目的和意義
第一章 鼩鼱漢坦病毒Imjin virus可以感染人的研究
    一、材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 蛋白表達(dá)材料
            1.1.2 蛋白純化材料
            1.1.3 小鼠免疫材料
            1.1.4 ELISA材料
            1.1.5 斑點印跡材料
            1.1.6 核酸檢測材料
            1.1.7 主要實驗儀器
        1.2 研究人群
            1.2.1 腎綜合征出血熱病人
            1.2.2 疫區(qū)健康人群
        1.3 抗體檢測
            1.3.1 抗原預(yù)測
            1.3.2 抗原表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.3.3 抗原表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與克隆
            1.3.4 抗原蛋白的試表達(dá)
            1.3.5 抗原蛋白的大量表達(dá)
            1.3.6 抗原蛋白的提取與純化
            1.3.7 MJNV NP全長蛋白的表達(dá)
            1.3.8 小鼠免疫
            1.3.9 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
        1.4 核酸檢測
        1.5 倫理學(xué)聲明
    二、結(jié)果
        2.1 MJNV NP抗原片段篩選
        2.2 NP N端蛋白的表達(dá)及純化
            2.2.1 MJNV NP小片段及全長的載體構(gòu)建
            2.2.2 MJNV NP小片段及全長的表達(dá)
            2.2.3 MJNV NP小片段的純化
        2.3 NP N端蛋白的有效性
        2.4 酶聯(lián)免疫吸附實驗的建立及工作條件
        2.5 實驗方法的特異度及交叉反應(yīng)
            2.5.1 特異度
            2.5.2 交叉性
        2.6 人群抗體流行情況
            2.6.1 Imjin virus總抗體
            2.6.2 IgM檢測
        2.7 RT-PCR
    三、討論
        3.1 實驗設(shè)計策略討論
        3.2 感染發(fā)生的可能原因
        3.3 NP片段的選擇
        3.4 MJNV致病的可能性
        3.5 不足之處
    四、本章小結(jié)
第二章 臨床診斷腎綜合癥出血熱中發(fā)熱伴血小板減少綜合癥的研究
    一、材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 研究人群
        1.3 臨床診斷HFRS中漢坦病毒Ig M抗體的檢測
        1.4 臨床診斷HFRS中 SFTSV IgM抗體的檢測
        1.5 HFRS與 SFTS癥狀分析
        1.6 倫理學(xué)聲明
    二、結(jié)果
        2.1 臨床診斷HFRS病例的特征
        2.2 HFRS中的SFTS病例
        2.3 HFRS與 SFTS的臨床癥狀比較(本研究數(shù)據(jù))
        2.4 HFRS與 SFTS的臨床癥狀比較(文獻(xiàn)數(shù)據(jù))
    三、討論
        3.1 流行病學(xué)暴露史對診斷的討論
        3.2 研究結(jié)果的公共衛(wèi)生意義
        3.3 本研究檢測方法的表現(xiàn)
        3.4 樣本量問題的解決
        3.5 不足之處
    四、本章小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄 、附圖
攻讀博士期間已發(fā)表的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Current20status20of20severe20fever20with20thrombocytopenia20syndrome20in20China[J]. Jianbo Zhan,Qin Wang,Jing Cheng,Bing Hu,Jing Li,Faxian Zhan,Yi Song,Deyin Guo.  Virologica Sinica. 2017(01)



本文編號：3177476