登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬的一個(gè)血清型亞群,根據(jù)其抗原性的不同可以分為5個(gè)不同的血清型。同一血清型中又可因?yàn)榭乖缘牟町惙譃椴煌幕蛐汀５歉锊《臼且环N蟲媒病毒,其主要通過埃及伊蚊和白紋伊蚊進(jìn)行傳播。登革病毒主要流行于熱帶和亞熱帶地區(qū),在亞洲,太平洋群島及中、南美洲等許多國家均已造成嚴(yán)重的威脅。登革病毒感染人體后主要引起登革熱以及發(fā)病率和死亡率都很高的登革出血熱和登革休克綜合征。其中登革熱的癥狀主要是發(fā)熱,頭痛,皮疹以及肌肉和關(guān)節(jié)疼痛,人體在感染同一血清型之后會(huì)獲得終生免疫。但是不同血清型所造成的二次感染卻會(huì)造成嚴(yán)重危及生命的登革出血熱和登革休克綜合征,這種現(xiàn)象被稱作“抗體依賴性增強(qiáng)作用”。其主要的臨床癥狀是低血壓,血容量減少及血管通透性的改變。其中血管通透性的改變是其主要的研究熱點(diǎn),但是具體的機(jī)制還不是太清楚。臨床研究發(fā)現(xiàn)登革病毒感染會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量的炎癥因子,并且和登革疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。在登革病毒感染的過程中,炎癥因子參與調(diào)節(jié)宿主的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡以及參與疾病的發(fā)生。IL-1β,是宿主體內(nèi)產(chǎn)生的一類非常重要的炎癥因子,其主要由炎性小體激活產(chǎn)生。NLRP3炎性小體在宿主天然免疫系... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.1 登革病毒概述
        1.1.1 登革病毒的流行病毒學(xué)
        1.1.2 登革病毒的分子病毒學(xué)
        1.1.3 登革病毒的臨床癥狀和致病機(jī)制
        1.1.4 登革的早期診斷和治療
        1.1.5 登革疫苗的研發(fā)和展望
    1.2 炎性小體概述
        1.2.1 NLRP1 炎性小體
        1.2.2 NLRC4 炎性小體
        1.2.3 AIM2 炎性小體
        1.2.4 NLRP3 炎性小體
        1.2.5 非經(jīng)典的炎性小體
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 細(xì)胞系、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞因子
        2.1.3 抗體
        2.1.4 表達(dá)載體
        2.1.5 生化試劑
        2.1.6 核酸操作及檢測試劑盒
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 登革病毒的擴(kuò)增和檢測
        2.2.2 細(xì)胞系培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 THP-1 細(xì)胞刺激分化為巨噬細(xì)胞
        2.2.4 克隆構(gòu)建
        2.2.5 RNA提取和qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 Western-blot
        2.2.7 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(CO-IP)
        2.2.8 GST pull-down實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 ASC多聚化檢測
        2.2.11 HEK293T體外構(gòu)建NLRP3 炎性小體體系
        2.2.12 MMP-9 明膠酶活檢測
        2.2.13 跨內(nèi)皮細(xì)胞電阻檢測(TEER)
        2.2.14 小鼠器官血管滲漏檢測
        2.2.15 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
第三章 登革病毒M蛋白通過激活NLRP3 炎性小體誘導(dǎo)血管滲漏機(jī)制的研究
    3.1 研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 登革病毒通過激活NLRP3 炎性小體來誘導(dǎo)IL-1β的分泌
        3.2.2 登革病毒M蛋白通過和NLRP3 相互作用促進(jìn)NLRP3 炎性小體的組裝
        3.2.3 登革病毒通過上調(diào)器官中的IL-1β水平來誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏
        3.2.4 登革病毒M蛋白通過激活NLRP3 炎性小體誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏
        3.2.5 IL-1β可以直接誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏的發(fā)生
    3.3 本章小結(jié)和討論
第四章 登革病毒NS1 蛋白通過招募MMP-9 蛋白誘導(dǎo)血管滲漏機(jī)制的研究
    4.1 研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 登革病毒感染誘導(dǎo)MMP-9 的產(chǎn)生和分泌
        4.2.2 登革病毒NS1 蛋白可以和MMP-9 相互作用
        4.2.3 登革病毒NS1 蛋白通過激活NF-κB信號(hào)通路來促進(jìn)MMP-9 的分泌
        4.2.4 登革病毒NS1 蛋白通過招募MMP-9 蛋白來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞通透性改變
        4.2.5 登革病毒NS1 蛋白通過招募MMP-9 蛋白來破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的交聯(lián)
        4.2.6 登革病毒NS1 蛋白促進(jìn)MMP-9 和交聯(lián)分子的相互作用
        4.2.7 MMP-9 蛋白在NS1 誘導(dǎo)小鼠血管滲漏過程中發(fā)揮重要作用
    4.3 本章小結(jié)和討論
參考文獻(xiàn)
博士期間發(fā)表和待發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Dengue in China: not a passing problem[J]. QIN Cheng Feng,SHI Pei Yong.  Science China（Life Sciences）. 2014(12)
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[3]中國登革熱的流行現(xiàn)狀[J]. 毛祥華,張?jiān)倥d.  中國病原生物學(xué)雜志. 2007(05)



本文編號(hào)：3174779