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高血壓病心房顫動(dòng)患者血尿酸代謝異常及CYP11B2-344T>C基因多態(tài)性研究

發(fā)布時(shí)間:2017-04-18 17:10

  本文關(guān)鍵詞:高血壓病心房顫動(dòng)患者血尿酸代謝異常及CYP11B2-344T>C基因多態(tài)性研究,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:研究背景與目的:心房顫動(dòng)(Atrial fibrillation)是臨床最常見的心律失常之一,據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示,我國(guó)三十歲以上的人群,心房顫動(dòng)的患病率為0.77%,且該患病率呈現(xiàn)隨年齡增長(zhǎng)而逐漸增加的趨勢(shì),其中男性患病率高于女性,但在女性絕經(jīng)期后,男女患病率沒有明顯差異。心房顫動(dòng)常發(fā)生于某些器質(zhì)性心血管疾病,如高血壓病、冠心病、心肌病、心臟瓣膜病及心力衰竭等,其發(fā)病率增加和心力衰竭患者死亡率增加相關(guān),最主要危害是卒中。然而,大多數(shù)心房顫動(dòng)的發(fā)病原因不明。有研究證實(shí)14%的心房顫動(dòng)由高血壓病導(dǎo)致,且高血壓病是新發(fā)心房顫動(dòng)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。臨床上可見某些心房顫動(dòng)患者血尿酸(Uric acid)值偏高,除合并高血壓外無(wú)其他心血管病并存。尿酸是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)與多種心血管疾病發(fā)病率及死亡率有關(guān)的危險(xiǎn)因素,作為人體內(nèi)嘌呤核苷酸代謝的終產(chǎn)物,尿酸如何引起心房顫動(dòng)發(fā)生,尚不清楚!我們推測(cè)高尿酸血癥可影響心房肌小動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,導(dǎo)致血管舒張能力下降,血管持續(xù)收縮,引起局部心肌發(fā)生缺血性改變及纖維化,進(jìn)而導(dǎo)致心房結(jié)構(gòu)改變及心房顫動(dòng)發(fā)生。而動(dòng)脈血管舒張功能和血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)關(guān)系密切,eNOS可催化L-精氨酸生成一氧化氮(NO),而NO有強(qiáng)大的血管舒張作用。當(dāng)eNOS表達(dá)水平下降時(shí),NO減少將會(huì)使血管舒張功能受到影響。此外,醛固酮合酶CYP11B2基因多態(tài)性將會(huì)影響腎功能,導(dǎo)致尿酸排泄障礙,從而引發(fā)高尿酸血癥。據(jù)此認(rèn)為,高血壓病患者心房顫動(dòng)的發(fā)生可能與血尿酸代謝異常及醛固酮合成酶CYP11B2-344TC基因多態(tài)性有關(guān)。為驗(yàn)證上述假設(shè),本研究將通過(guò)臨床病例回顧性分析、用不同濃度尿酸干預(yù)人類動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞觀察其對(duì)于eNOS表達(dá)水平的影響及CYP11B2-344TC基因多態(tài)性對(duì)心房顫動(dòng)易感性影響的薈萃分析,多角度探討高血壓病患者心房顫動(dòng)發(fā)生的相關(guān)因素及可能機(jī)制。研究方法:一、病例資料回顧性分析研究1.選擇2010年1月至2014年12月在我院心內(nèi)科住院的高血壓病患者為研究對(duì)象,所有患者均符合中國(guó)高血壓防治指南制定的高血壓病診斷標(biāo)準(zhǔn),心房顫動(dòng)以經(jīng)體表12導(dǎo)聯(lián)心電圖或24小時(shí)動(dòng)態(tài)心電圖診斷為標(biāo)準(zhǔn)。并以此分為高血壓病合并心房顫動(dòng)組與高血壓病對(duì)照組。2.排除標(biāo)準(zhǔn)為:合并冠心病、繼發(fā)性高血壓、心臟瓣膜病、先心病、心肌病、心力衰竭、心臟手術(shù)后、糖尿病、家族性血脂異常、甲狀腺功能異常、血清肌酐大于110μmol/l、重度感染性疾病、自身免疫性疾病或炎癥性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病及應(yīng)用影響尿酸代謝藥物(利尿劑除外)的患者。3.查閱電子病歷數(shù)據(jù)庫(kù),完整記錄所有入選患者的基本信息、臨床基本指標(biāo)及相關(guān)輔助檢查結(jié)果,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。二、尿酸對(duì)人動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能影響及機(jī)制研究1.應(yīng)用不同濃度尿酸(400umol/l,600umol/l,800umol/l,1000umol/l)作用于人冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用real-time-pcr和westernblot檢測(cè)不同濃度尿酸作用下enosmrna和蛋白表達(dá)水平的變化,從而篩選出最適合的尿酸濃度。并以此尿酸濃度作用于兩種人血管內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用real-time-pcr和westernblot方法在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)enosmrna和蛋白表達(dá)水平變化,從而選出變化最明顯的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.用轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素d預(yù)處理人血管內(nèi)皮細(xì)胞,再以尿酸進(jìn)行干預(yù),應(yīng)用real-timepcr在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)enosmrna表達(dá)水平,以判斷尿酸對(duì)rna穩(wěn)定性的影響。3.用enos特異性抑制劑l-name預(yù)處理人血管內(nèi)皮細(xì)胞,再用尿酸進(jìn)行干預(yù),mtt方法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況,以判斷尿酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響是否直接與enos有關(guān)。4.用westernblot方法分別檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(10min,20min,30min,40min)經(jīng)尿酸作用的人血管內(nèi)皮細(xì)胞mapks(p38mapk,jnkmapk,erkmapk)通道是否有激活,判斷不同血管內(nèi)皮細(xì)胞是否被激活的mapks通道種類及激活時(shí)間不同。5.應(yīng)用p38mapk通道特異性藥物抑制劑(sb203580)預(yù)處理人冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,然后加入尿酸,通過(guò)real-timepcr的方法檢測(cè)enosmrna表達(dá)水平變化,判斷尿酸對(duì)enosmrna表達(dá)水平的調(diào)節(jié)是否通過(guò)p38mapk通道激活實(shí)現(xiàn)的。應(yīng)用腺病毒負(fù)性突變體p38-dn-adv轉(zhuǎn)染人冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞后再加入尿酸,通過(guò)westernblot方法檢測(cè)enos蛋白表達(dá)水平的變化,判斷尿酸對(duì)enos蛋白表達(dá)水平的調(diào)節(jié)是否通過(guò)p38mapk通道激活實(shí)現(xiàn)的。6.pgl2-enos(-331/+109)-fireflyluciferasereporter質(zhì)粒和pgl2-β-actin-renillaluciferase共轉(zhuǎn)染hcaec細(xì)胞后,加入600umol/l尿酸繼續(xù)培養(yǎng),雙熒光報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)尿酸是否影響enos啟動(dòng)子的活性,判斷尿酸是否在轉(zhuǎn)錄前水平調(diào)節(jié)enos基因表達(dá)。7.用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子gata-4與enos啟動(dòng)子的結(jié)合情況,以判斷尿酸是否對(duì)該結(jié)合狀況有影響。8.通過(guò)大鼠腹腔動(dòng)脈血管環(huán)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)尿酸對(duì)動(dòng)脈血管舒張功能的影響,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。三、cyp11b2-344tc基因多態(tài)性與高血壓病心房顫動(dòng)發(fā)生的相關(guān)性1.通過(guò)病例-對(duì)照研究進(jìn)行meta分析,探討cyp11b2-344tc基因多態(tài)性和心房顫動(dòng)易感性的關(guān)系。2.應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算等位基因模型,純合子模型,隱性模型和顯性模型的優(yōu)勢(shì)比(or)和95%可信區(qū)間(ci),并通過(guò)固定效應(yīng)和隨機(jī)效應(yīng)模型評(píng)估二者的關(guān)聯(lián)性。3.根據(jù)異質(zhì)性來(lái)源的不同進(jìn)行亞組分析,最后達(dá)到應(yīng)用單一原因?qū)τ诳傮w結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià),并對(duì)文章的發(fā)表偏倚進(jìn)行評(píng)估。研究結(jié)果:1.研究發(fā)現(xiàn)高血壓病患者血尿酸水平升高與心房顫動(dòng)的發(fā)生密切相關(guān)(1)本研究共納入940例患者,其中高血壓病合并心房顫動(dòng)患者362例,高血壓病不合并心房顫動(dòng)患者578例(對(duì)照組)。兩組患者的性別、白細(xì)胞值、血鉀值、肌酐值、收縮壓、舒張壓、左心室后壁厚度及室間隔厚度與心房顫動(dòng)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。與對(duì)照組比較,高血壓病合并心房顫動(dòng)組平均年齡更大(67.13±10.59vs.56.78±14.92,p0.01)、患高血壓病平均時(shí)間更長(zhǎng)(9.27±9.50vs.3.85±3.57,p0.01),且血尿酸水平及左心房直徑明顯高于對(duì)照組,分別為388.11±112.51vs.311.54±122.51(p0.01)及45.79±7.56vs.34.08±4.36(p0.01)。(2)通過(guò)患者年齡、患高血壓病年限、血尿酸水平及左心房直徑對(duì)心房顫動(dòng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析發(fā)現(xiàn),心房顫動(dòng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和患者血尿酸值(or=1.014;95%可信區(qū)間=1.005-1.023,p=0.002)及左心房直徑(or=1.390;95%可信區(qū)間=1.221-1.582,p0.001)具有獨(dú)立的相關(guān)性。2.研究發(fā)現(xiàn)尿酸對(duì)人動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能產(chǎn)生明顯影響(1)不同濃度尿酸作用于人冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞后檢測(cè)結(jié)果顯示:尿酸濃度為600umol/l和1000umol/l時(shí),24小時(shí)hcaec細(xì)胞enosmrna表達(dá)量分別降低39.22%和69.22%(p0.01);蛋白表達(dá)量分別降低62.10%和65.67%(p0.05)。在huvec細(xì)胞中,當(dāng)尿酸濃度為600umol/l和1000umol/l時(shí),24小時(shí)enosmrna表達(dá)水平分別下降27.44%和51.87%(p0.01);蛋白表達(dá)水平分別下降7.21%(p0.05)和52.88%(p0.01);當(dāng)尿酸作用達(dá)48小時(shí),600umol/l濃度組enos蛋白表達(dá)量下降40.31%(p0.01)。(2)用轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素d1ug/ul預(yù)處理人血管內(nèi)皮細(xì)胞,再用600umol/l尿酸干預(yù)hcaec細(xì)胞和huvec細(xì)胞,與無(wú)放線菌素d的尿酸組比較,兩種細(xì)胞enosmrna降解趨勢(shì)無(wú)顯著性差別。(3)用enos特異性抑制劑l-name100um預(yù)處理人血管內(nèi)皮細(xì)胞,再應(yīng)用600umol/l尿酸干預(yù),與無(wú)l-name的尿酸組比較,hcaec和huvec細(xì)胞增殖趨勢(shì)無(wú)明顯差異。(4)600umol/l尿酸作用于hcaec細(xì)胞時(shí),p38mapk通道和erkmapk通道分別被激活,相同濃度尿酸作用于huvec細(xì)胞時(shí),被激活的通道是jnkmapk和erkmapk通道。(5)用p38mapk通道特異性藥物抑制劑(sb203580)預(yù)處理hcaec細(xì)胞后,加入600umol/l尿酸,與對(duì)照組比較enosmrna表達(dá)水平幾乎無(wú)變化,表明尿酸降低enosmrna表達(dá)的作用被逆轉(zhuǎn)。(6)腺病毒負(fù)性突變體p38-dn-adv轉(zhuǎn)染hcaec細(xì)胞,再加入600umol/l尿酸,與對(duì)照組比較enos蛋白表達(dá)水平幾乎無(wú)變化,表明尿酸降低enos蛋白表達(dá)的作用被逆轉(zhuǎn)。(7)pgl2-enos(-331/+109)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hcaec細(xì)胞后,加入600umol/l尿酸繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后,檢測(cè)細(xì)胞enos啟動(dòng)子活性較無(wú)尿酸對(duì)照組下降43.58%(p0.01)。(8)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)與對(duì)照組相比,尿酸使轉(zhuǎn)錄因子gata-4與hcaec細(xì)胞啟動(dòng)子的結(jié)合力增強(qiáng)。(9)在內(nèi)皮依賴型緩激肽作用下,對(duì)照組大鼠離體腹腔主動(dòng)脈血管環(huán)發(fā)生舒張。作為陰性對(duì)照組的l-name組動(dòng)脈血管環(huán)舒張幅度明顯減弱,和對(duì)照組相比,尿酸組動(dòng)脈血管環(huán)的舒張幅度減弱48.53%(p0.01)。3.通過(guò)9項(xiàng)病例對(duì)照研究證實(shí),在高血壓病人群中,cyp11b2-344tc多態(tài)性明顯與心房顫動(dòng)易感性顯著相關(guān)(等位基因模型:or=1.18,95%ci=1.04-1.33,p0.01;純合子模型:or=1.54,95%ci=1.17-2.03,p0.01;隱性模型:or=1.70,95%CI=1.24-2.32,p0.01)。結(jié)論:1.初步闡明了尿酸代謝異常促發(fā)高血壓病患者心房顫動(dòng)發(fā)生的作用及可能機(jī)制。即尿酸通過(guò)下調(diào)HCAEC細(xì)胞eNOS mRNA和蛋白表達(dá)水平,影響動(dòng)脈血管舒張功能,使血管持續(xù)收縮,進(jìn)而導(dǎo)致局部心房肌發(fā)生缺血性變化及纖維化,成為心房顫發(fā)生的因素。2.從臨床和基礎(chǔ)研究?jī)蓚(gè)方面均證實(shí)了血尿酸水平與心房顫動(dòng)發(fā)生密切相關(guān),這種相關(guān)性在高血壓病合并心房顫動(dòng)患者中表現(xiàn)尤為明顯。3.通過(guò)Meta分析從基因多態(tài)性的角度分析高血壓病心房顫動(dòng)的病因,證實(shí)在高血壓病人群中,CYP11B2-344TC基因多態(tài)性與心房顫動(dòng)易感性存在顯著的相關(guān)性。豐富了對(duì)心房顫動(dòng)發(fā)病因素的認(rèn)識(shí),4.通過(guò)心房顫動(dòng)病因方面的認(rèn)識(shí),可以從控制體內(nèi)尿酸值的角度預(yù)防高血壓病患者心房顫動(dòng)的發(fā)生,為臨床防治高血壓病心房顫動(dòng)的發(fā)生提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】:心房顫動(dòng) 尿酸 ENOS C%E5%9F%BA%E5%9B%A0" target="_blank">CYP11B2-344T>C基因 高血壓病
【學(xué)位授予單位】:第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R541.75
【目錄】:
  • 縮略語(yǔ)表4-6
  • 英文摘要6-13
  • 中文摘要13-18
  • 第一章 前言18-21
  • 第二章 高血壓病患者血尿酸水平與心房顫動(dòng)發(fā)生的相關(guān)性21-28
  • 2.1 方法21-23
  • 2.2 結(jié)果23-25
  • 2.3 討論25-27
  • 2.4 小結(jié)27-28
  • 第三章 尿酸對(duì)人類動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響及機(jī)制28-66
  • 3.1 材料與方法28-50
  • 3.2 結(jié)果50-60
  • 3.3 討論60-65
  • 3.4 小結(jié)65-66
  • 第四章 CYP11B2- 344T>C基因多態(tài)性與高血壓病心房顫動(dòng)發(fā)生相關(guān)性66-75
  • 4.1 方法66-68
  • 4.2 結(jié)果68-73
  • 4.3 討論73-74
  • 4.4 小結(jié)74-75
  • 全文總結(jié)75-76
  • 參考文獻(xiàn)76-85
  • 文獻(xiàn)綜述 血尿酸與心血管疾病的相關(guān)性研究進(jìn)展85-100
  • 參考文獻(xiàn)93-100
  • 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文100-101
  • 致謝101

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6 吳綺;李剛;劉虹;劉學(xué)群;段峰森;劉如亮;馬西祥;覃瑞;;利用稻屬A、C基因組gDNA和C0t-1 DNA對(duì)兩個(gè)異源四倍體野生稻的比較分析[A];基因開啟未來(lái):新時(shí)代的遺傳學(xué)與科技進(jìn)步——湖北省遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

7 徐邦牢;王蓉;李榮新;周小棉;;2型糖尿病患者apoAV-1131T/C基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性研究[A];第四屆全國(guó)血脂分析與臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第九屆全國(guó)脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 府曉丹;高血壓病心房顫動(dòng)患者血尿酸代謝異常及CYP11B2-344T>C基因多態(tài)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 成芳芳;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子+405G/C、-460T/C、+936T/C基因多態(tài)性與手足口病腦炎易感性關(guān)系研究[D];蘇州大學(xué);2015年

2 李嘉;乙肝病毒C基因區(qū)變異與機(jī)體細(xì)胞免疫功能關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

3 朱會(huì)麗;應(yīng)用Real-time PCR定量血型糖蛋白C基因在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病不同階段外周血表達(dá)水平[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

4 李俊;外源基因定向插入甘藍(lán)型油菜C基因組的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

5 李擁軍;白細(xì)胞介素6-634C/G、-572G/C基因多態(tài)性與腦出血的關(guān)系[D];中南大學(xué);2013年

6 徐曉;B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白及其變異體的功能差別研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2004年

7 吳小玲;甲狀腺素對(duì)氣道黏蛋白5AC基因表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

8 趙沙沙;水稻色素原C基因的圖位克隆與表達(dá)分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

9 張秀瑜;熒光定量PCR分型法檢測(cè)乙肝病毒B、C基因型的方法學(xué)評(píng)價(jià)及應(yīng)用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 王琳;我國(guó)流行C基因型野生和耐藥HBV穩(wěn)定復(fù)制細(xì)胞系的建立及應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年


  本文關(guān)鍵詞:高血壓病心房顫動(dòng)患者血尿酸代謝異常及CYP11B2-344T>C基因多態(tài)性研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



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