Sigma-1受體對N型鈣通道的負(fù)性調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-04-08 06:49
Sigma受體是具有伴侶蛋白活性的一類受體蛋白。鑒于其與其他哺乳動(dòng)物蛋白沒有同源性以及與其他受體相比所具有的獨(dú)特的生理功能,現(xiàn)在也被認(rèn)為是一類孤兒受體。目前認(rèn)為Sigma受體家族包括兩個(gè)亞型,一個(gè)亞型為Sigma-1受體,另一個(gè)亞型為Sigma-2受體。由于到現(xiàn)在為止,還未獲得Sigma-2受體的克隆,也不清楚其氨基酸序列和結(jié)構(gòu),所以對它的研究比較少也比較滯后,研究重點(diǎn)一般集中在Sigma-1受體。Sigma-1受體主要聚集于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng),并廣泛分布在MAM膜、細(xì)胞膜以及核膜等細(xì)胞膜系統(tǒng)上。經(jīng)過研究人員對該受體將近40年的研究,尤其在獲得Sigma-1受體的克隆及Sigma-1受體敲除鼠后,我們對其在結(jié)構(gòu)和功能上的認(rèn)識越來越清晰。Sigma-1受體是包含223個(gè)氨基酸的一條蛋白質(zhì)單鏈,其分子量大小約為26 k Da。之前大多數(shù)研究認(rèn)為Sigma-1受體包括兩個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,且N端和C端均位于膜內(nèi)側(cè)。而在2016年,對人源Sigma-1受體的晶體結(jié)構(gòu)解析結(jié)果表明,Sigma-1受體是以寡聚體（一般是三聚體）形式存在的一類單次跨膜蛋白,其N端在膜外,C端則位于膜內(nèi)側(cè)。在其功能方面,Sigma-...
【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】：87 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
ChIs中Sigma-1受體與N型鈣通道的表達(dá)
第 1 章 Sigma-1 受體在 ChIs 上對鈣離子通道的調(diào)節(jié)作用of ChAT, Sigma-1 receptor and 1A-C in ChIs by scRT-PCR. The 1B subunit ofN-type Ca2+channel was found in 92.1% detected cells.3.2 免疫熒光染色為了從蛋白水平證實(shí) Sigma-1 受體的表達(dá)，我們在 5 m 連續(xù)切片上進(jìn)行免疫熒光染色，由于是連續(xù)切片，熒光顯示的細(xì)胞形態(tài)并不完全相同，從細(xì)胞的相對位置我們可以看出箭頭標(biāo)示出的細(xì)胞確實(shí)來源于同一個(gè)神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1-2，其中 ChAT 染色結(jié)果以紅色熒光表示，表明這些神經(jīng)元是 ChIs；綠色熒光代表對 Sigma-1 受體的染色結(jié)果。對結(jié)果進(jìn)行分析比較，可以確定 Sigma-1 受體在蛋白水平上在背側(cè)紋狀體內(nèi)的 ChIs 中有表達(dá)。
圖 2-1 N 型鈣通道以及 Sigma-1 受體在爪蟾卵母細(xì)胞上的表達(dá)。(A) 上圖：向卵母細(xì)胞中注射 N 型鈣通道 cRNA 后記錄到的 N 型鈣電流；下圖：記錄被 0.2 μM的 CTX 阻斷后的 N 型鈣電流。表明 N 型鈣通道已在卵母細(xì)胞中成功表達(dá)。(B)A圖中所記錄到的電流的I-V曲線。(C) 注射了Sigma-1受體cRNA的卵母細(xì)胞 (以“+”表示，第一泳道) 與空白細(xì)胞 (以“-”表示，中間三條泳道) 的全蛋白 WesternBlot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該結(jié)果表明 Sigma-1 受體已在卵母細(xì)胞中成功表達(dá)。最后一條泳道為蛋白 Marker。Fig 2-1 Expression of N-type Ca2+channel and Sigma-1 receptor in xenopus oocytes.(A) Upper panel: the current of N-type Ca2+channel recorded in oocytes aftermicroinjection with N-type Ca2+channel cRNA. Lower panel: the current wasblocked by N-type Ca2+channel blocker CTX (0.2 μM). (B) I-V plot of the recordedN-type Ca2+channel current in Figure 3A. (C) Schematic Western blot strap ofoocytes injected with Sigma-1 cRNA (the first lane) and control group (the middlethree lanes), which indicated the Sigma-1 receptor expressed successfully. The last
本文編號：3125068
【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】：87 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
ChIs中Sigma-1受體與N型鈣通道的表達(dá)
第 1 章 Sigma-1 受體在 ChIs 上對鈣離子通道的調(diào)節(jié)作用of ChAT, Sigma-1 receptor and 1A-C in ChIs by scRT-PCR. The 1B subunit ofN-type Ca2+channel was found in 92.1% detected cells.3.2 免疫熒光染色為了從蛋白水平證實(shí) Sigma-1 受體的表達(dá)，我們在 5 m 連續(xù)切片上進(jìn)行免疫熒光染色，由于是連續(xù)切片，熒光顯示的細(xì)胞形態(tài)并不完全相同，從細(xì)胞的相對位置我們可以看出箭頭標(biāo)示出的細(xì)胞確實(shí)來源于同一個(gè)神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1-2，其中 ChAT 染色結(jié)果以紅色熒光表示，表明這些神經(jīng)元是 ChIs；綠色熒光代表對 Sigma-1 受體的染色結(jié)果。對結(jié)果進(jìn)行分析比較，可以確定 Sigma-1 受體在蛋白水平上在背側(cè)紋狀體內(nèi)的 ChIs 中有表達(dá)。
圖 2-1 N 型鈣通道以及 Sigma-1 受體在爪蟾卵母細(xì)胞上的表達(dá)。(A) 上圖：向卵母細(xì)胞中注射 N 型鈣通道 cRNA 后記錄到的 N 型鈣電流；下圖：記錄被 0.2 μM的 CTX 阻斷后的 N 型鈣電流。表明 N 型鈣通道已在卵母細(xì)胞中成功表達(dá)。(B)A圖中所記錄到的電流的I-V曲線。(C) 注射了Sigma-1受體cRNA的卵母細(xì)胞 (以“+”表示，第一泳道) 與空白細(xì)胞 (以“-”表示，中間三條泳道) 的全蛋白 WesternBlot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該結(jié)果表明 Sigma-1 受體已在卵母細(xì)胞中成功表達(dá)。最后一條泳道為蛋白 Marker。Fig 2-1 Expression of N-type Ca2+channel and Sigma-1 receptor in xenopus oocytes.(A) Upper panel: the current of N-type Ca2+channel recorded in oocytes aftermicroinjection with N-type Ca2+channel cRNA. Lower panel: the current wasblocked by N-type Ca2+channel blocker CTX (0.2 μM). (B) I-V plot of the recordedN-type Ca2+channel current in Figure 3A. (C) Schematic Western blot strap ofoocytes injected with Sigma-1 cRNA (the first lane) and control group (the middlethree lanes), which indicated the Sigma-1 receptor expressed successfully. The last
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