研究背景與目的:血管介入治療是廣泛使用的治療腦血管疾病患者的技術(shù),然而面臨血管介入術(shù)后再狹窄的難題。介入相關(guān)的血管內(nèi)皮細胞損傷是再狹窄的發(fā)生和發(fā)展的始發(fā)因素,因此促進介入后損傷的血管內(nèi)皮的早期再內(nèi)皮化非常關(guān)鍵。在我們的前期研究中,人臍血EPCs來源的外泌體能夠促進球囊損傷的大鼠頸動脈的早期再內(nèi)皮化,但是其分子機制仍然不清楚。本研究通過檢測EPCs來源的外泌體包含的主要miRNA對內(nèi)皮靶細胞的影響,探索其促進血管內(nèi)皮細胞修復(fù)的機制。實驗方法:采用密度梯度離心法分離、誘導(dǎo)人臍血來源的EPCs,用流式細胞分析技術(shù)檢測細胞表面標志物表達及內(nèi)皮細胞功能的檢測來鑒定細胞。用超濾法結(jié)合超速離心法提取EPCs培養(yǎng)液中的外泌體。納米顆粒示蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis,NTA）、透射電鏡、Western Blotting鑒定外泌體。體外實驗表明觀察其促進HUVECs的增殖、遷移及成管能力;伊文氏藍染色觀察EPCs外泌體對損傷血管第14天再內(nèi)皮化的作用,HE染色檢測外泌體對大鼠頸動脈損傷后內(nèi)膜增生的影響。二代基因測序檢測祖細胞外泌體microRNA表達及內(nèi)皮細胞差異... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

2頸動脈蹼CTA、DSA表現(xiàn)

46intra-membranethickeningofCTAwasreviewed3monthsaftersurgery(f).3.2EPCs及其分泌的外泌體的鑒定3.2.1EPCs的形態(tài)學(xué)觀察倒置相差顯微鏡下觀察用密度離心法分離誘導(dǎo)培養(yǎng)人臍帶血來源的EPCs形態(tài)。培養(yǎng)4天后，細胞培養(yǎng)板中可見貼壁細胞，呈圓形或梭形(圖3.2.1A)；第7-10天，圓形貼壁細胞，以集落為中心，呈發(fā)芽式向外生長的典型的內(nèi)皮細胞群，即細胞集落(圖3.2.1B)；在2-3周左右，細胞形態(tài)呈鵝卵石狀，集落生長融合(圖3.2.1C)。細胞傳至第6代，逐漸呈梭形，排列緊密(圖3.2.1D)。圖3.2.1EPCs細胞形態(tài)。(A)：原代培養(yǎng)第4天，細胞呈梭形或圓形貼壁；(B)：7-10天后，出現(xiàn)典型的細胞集落；(C)：2-3周后，細胞形態(tài)呈鵝卵石狀，集落發(fā)生融合；(D)：P6細胞逐漸呈梭形。比例尺：100μm。Figure3.2.1EPCsMorphologyA:Atday4,spindle-likeandroundcellsappearedB:After7-10

47days,typicalcellclusterappearedC:After2and3weeks,cellswithinthecoloniesexhibitedthetypicalcobblestonemorphologyuponconfluence.D:TheP6EPCsshowedfusiformappearanceandcloselyarranged.Scalebarsrepresent100μm.3.2.2EPCs流式細胞儀檢測結(jié)果流式細胞儀(FACS)分別檢測分離培養(yǎng)P3代細胞表面CD31、CD34、VEGF2和CD45的表達，CD31、CD34、VEGF2及CD45在培養(yǎng)細胞中的陽性率分別為99.26%、57.51%、5.14%、98.12%和0.24%，可以認為本實驗獲得純度較高的EPCs。見圖3.2.2。圖3.2.2CD31、CD34和VEGF2表達陽性，CD45表達陰性。Figure3.2.2CD31,CD34andVEGF2werepositiveinculturedEPCs,butthehematopoieticcell-specificmarkerCD45wasnegative

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)



本文編號：3123078