第一部分驚厥持續(xù)狀態(tài)后海馬損傷與樹突的變化目的:確立腹腔注射海人藻酸（kainic acid,KA）建立驚厥持續(xù)狀態(tài)（Status Convulsion,SC）及癲癇模型。評估不同年齡鼠SC后第7天、14天及28天海馬突觸的損傷狀況及海馬DG、CA1及CA3區(qū)樹突、樹突棘（Dendritic spine,DS）的動態(tài)變化。方法:以8周齡（成年）、14天齡（幼年）C57BL/6J雄性小鼠為對象,分為正常對照組和SC模型組,SC模型組采用腹腔注射KA誘導(dǎo)SC,正常照組腹腔注射等劑量0.9%氯化鈉溶液,觀察各組誘導(dǎo)SC發(fā)作以及SC后自發(fā)性癲癇發(fā)作（Spontaneous recurrent seizures,SRS）情況,并對成年鼠進行同步腦電檢測驗證。在SC后第7天、14天及28天時間點上,使用Western blot檢測成年及未成年鼠海馬突觸囊泡蛋白（Synaptophysin,SYP）、突觸后致密蛋白-95（Postsynaptic density95,PSD-95）及生長相關(guān)蛋白-43（Growth Associated Protein 43,GAP-43）的表達情況。用Golgi-... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

動物分組Fig.1-1Animalgroups

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文41（2）圖像分析：每只鼠選取4張含有海馬背側(cè)的腦組織切片，每張切片含有左右2個海馬，每側(cè)海馬的DG區(qū)、CA1區(qū)及CA3區(qū)各隨機選擇2個視野，每區(qū)共4個視野，使用ImageJ，NeuronStudio及Photoshop進行圖像分析。對海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的錐體細胞，以及DG區(qū)的顆粒細胞進行樹突復(fù)雜性、樹突總長度、DS密度及DS種類進行觀察及分析。用測量結(jié)果的均值進行比較。①樹突復(fù)雜性分析方法：樹突復(fù)雜性是指神經(jīng)元樹突的總長度及分枝情況。Shollanalysis是以神經(jīng)元胞體為圓心（不包括胞體）開始按照每10μm的距離畫一系列同心圓，得到隨著距離從圓心到最遠距離的同心圓與神經(jīng)元的樹突可形成數(shù)個交點，用交點個數(shù)的變化來反映樹突復(fù)雜性（圖1-2）[13]。本研究使用Sholl-Analysis方法分析成年及幼年鼠在SC后第7天、14天及28天海馬CA1及CA3區(qū)的錐體細胞，及DG區(qū)的顆粒細胞的樹突與同心圓的交點，并測量這一神經(jīng)元的樹突總長度。圖1-2ShollAnalysis分析樹突與同心圓的交點Fig.1-2ShollAnalysisfortheintersectionofdendritesandtheconcentriccircles②DS密度及類型的分析：100×油浸物鏡下選擇長度≥50μm的三級樹突分

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文42析。選擇符合以下所有標準的樹突進行分析：I）樹突全長連續(xù)不中斷；II）所有樹突顏色深且均勻；III）能夠與附近神經(jīng)元的樹突區(qū)分開，可以避免干擾分析。利用100×油浸物鏡在白光下進行照相，利用Z-Stack技術(shù)掃描（厚度120μm；Z-step：2μm），用反卷積技術(shù)合成三維圖像。這種方法彌補了二維圖像評估方法可能低估了棘突數(shù)量的缺陷。測量120μm層厚的腦組織中的樹突長度，選擇30μm長的樹突進行分析。DS分為以下幾類：1）細長型：頸部細長，頭部小而圓（長＜2μm）；2）蘑菇型：頸部細而粗，頭部大（寬＞0.6μm）；3）短粗型，沒有可分辨的頸（長：寬=1：1）；IV）分枝型：頭部分為多個分枝；V）絲狀偽足：細而長，無頸部（長＞2μm）。（圖1-3）圖1-3DS的形態(tài)Fig.1-3ThemorphologyofDSs2數(shù)據(jù)統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差（x±SD）表示，采用GraphPadPrism8軟件進行統(tǒng)計分析及制作統(tǒng)計圖，采用單因素方差分析one-wayANOVA及t檢驗進行組間比較進行組間比較，P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。


本文編號：3095881