本文關(guān)鍵詞：多光子顯微成像技術(shù)診斷胰腺肝臟疾病的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景胰腺癌早期的確診率低,目前常見(jiàn)的檢查手段均存在不足,且需較長(zhǎng)時(shí)間才能獲得診斷。胰腺癌的有效治療手段是手術(shù)切除,手術(shù)切緣無(wú)腫瘤殘余是決定預(yù)后的重要因素,術(shù)中常需要多次切除送冰凍病理才能明確手術(shù)切緣陰性。因此胰腺癌的術(shù)前診斷和術(shù)中即時(shí)診斷是目前臨床上急需解決的問(wèn)題。胰頭癌容易壓迫膽總管引起梗阻性黃疸,胰頭癌單發(fā)肝轉(zhuǎn)移可考慮聯(lián)合肝切除。此外肝臟、膽道腫瘤也常常合并梗阻性黃疸。外科手術(shù)是梗阻性黃疸重要治療手段之一,解除膽道梗阻的同時(shí)常需要行肝部分切除,在肝切除術(shù)經(jīng)常需要做肝門(mén)阻斷以減少出血,阻斷開(kāi)放后會(huì)導(dǎo)致肝缺血再灌注損傷(HIRI)。目前臨床上常見(jiàn)的檢查手段均存在不足,手術(shù)中對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注損傷程度的判斷亦是目前在臨床上急需解決的問(wèn)題。多光子顯微成像技術(shù)(MPM)能夠反映組織學(xué)特征,還能夠反映細(xì)胞代謝水平。目前為止,MPM在胰腺腫物及梗阻性黃疸HIRI的診斷尚未見(jiàn)報(bào)道�；谀壳芭R床上急需解決的上述問(wèn)題,本課題研究多光子顯微成像技術(shù)診斷胰腺腫物及梗阻性黃疸HIRI的可行性。第一部分:多光子顯微成像技術(shù)對(duì)胰腺腫物的光學(xué)診斷目的:多光子顯微成像技術(shù)診斷胰腺腫物的可行性。方法:使用MPM研究胰腺石蠟片和新鮮組織,將檢查結(jié)果與HE染色的結(jié)果對(duì)比。結(jié)果:在胰腺石蠟片和新鮮組織中,MPM圖像均能夠和HE染色一樣反應(yīng)腫瘤的特征,多光子圖片與HE圖片均具備可比性。結(jié)論:MPM成像技術(shù)可以區(qū)分胰腺腫物和正常胰腺組織,鑒別胰腺良惡性腫瘤。第二部分多光子顯微成像技術(shù)在梗阻性黃疸HIRI中的應(yīng)用一梗阻性黃疸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立目的:建立梗阻性黃疸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。方法:將20只雄性SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(SO組,N=10)和梗阻性黃疽組(OJ組,N=10)2組,OJ組開(kāi)腹后游離膽管并結(jié)扎。SO組開(kāi)腹后游離膽管,但不結(jié)扎膽管。檢測(cè)兩組的肝功能、腎功能。結(jié)果:SO組術(shù)后肝功能各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化。OJ組術(shù)后肝腎功能指標(biāo)水平逐漸升高,且明顯高于相應(yīng)的SO組(P0.05)。結(jié)論:成功建立梗阻性黃疸的動(dòng)物模型。二梗阻性黃疸HIRI的機(jī)制研究目的:探討TNF a、IL 1β和NF κB在梗阻性黃疸HIRI中的作用。方法:將80只雄性SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(SO組)和肝缺血再灌注損傷組(HIRI組)2組,各組再按照肝缺血后再灌注的時(shí)間分為4個(gè)亞組:0h組、3h組、6h組和12h組,每組10只。梗阻性黃疸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型構(gòu)建1周后,建立肝缺血再灌注損傷模型,檢測(cè)SO組和HIRI組肝腎功能指標(biāo)及TNF a、IL 1β及NF κB并比較。結(jié)果:SO組術(shù)后肝功能各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化。HIRI組肝腎功能指標(biāo)、TNF a和IL 1β含量增加高于相應(yīng)的SO組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。0h組、3h組、6h組和12h組的肝組織NF κB、TNF α及IL 1β的表達(dá)強(qiáng)度,HIRI組均比對(duì)應(yīng)的SO組高(P0.01)。結(jié)論:梗阻性黃疸HIRI中TNF a、IL 1β表達(dá)增高,TNF a、IL 1β的表達(dá)是梗阻性黃疸大鼠HIRI重要因素之一,NF κB通過(guò)調(diào)控TNF a、IL 1β表達(dá)造成肝組織的損傷。三MPM對(duì)梗阻性黃疸HIRI的光學(xué)診斷目的:多光子顯微成像技術(shù)診斷梗阻性黃疸HIRI的可行性。方法:SO組和HIRI組中各亞組的新鮮肝組織,每組有10例。新鮮標(biāo)本的冰凍切片行MPM檢測(cè)及HE染色后光鏡檢測(cè)。結(jié)果:SO組各亞組肝組織MPM圖像特征基本相似,均清晰地顯示肝細(xì)胞腫脹變性,寬窄不一的肝血竇,散在浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞。HIRI組MPM圖像特征表現(xiàn)如下:0h肝組織顯示肝細(xì)胞明顯腫脹變性,肝血竇寬窄不一,浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞,明顯膠原纖維增生。3h肝組織顯示大片狀壞死的肝細(xì)胞、浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞和腫脹變性的肝細(xì)胞。6h肝組織顯示浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞、腫脹變性的肝細(xì)胞、片狀壞死的肝細(xì)胞、增生的膠原纖維。12h肝組織顯示浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞、腫脹變性的肝細(xì)胞、片狀壞死的肝細(xì)胞、增生的膠原纖維。各組多光子圖片與H-E圖片均具備可比性。MPM顯示SO組細(xì)胞的NADH/FAD突光強(qiáng)度明顯高于同期HIRI組。各組(0h、3h、6h、12h)SO組細(xì)胞NADH/FAD氧化還原率高于同期HIRI組正常細(xì)胞,差別有顯著意義。結(jié)論:MPM成像技術(shù)可以反映梗阻性黃疸HIRI的損傷程度。
【關(guān)鍵詞】：多光子光學(xué)診斷 胰腺腫瘤 梗阻性黃疸 肝臟缺血再灌注損傷 NF κB
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735
【目錄】：

• 英文詞縮略表7-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 第一部分 多光子顯微成像技術(shù)診斷胰腺腫物的實(shí)驗(yàn)研究17-40
• 材料與方法18-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 1.1 HE染色系統(tǒng)18-19
• 1.2 多光子顯微成像系統(tǒng)19-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 2.1 石蠟片的實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 2.2 新鮮標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)方法25-26
• 結(jié)果26-36
• 1 石蠟片的實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 1.1 病人統(tǒng)計(jì)學(xué)資料和樣品特征26
• 1.2正常胰腺組織的MPM診斷學(xué)特征26-27
• 1.3 胰腺良性腫瘤的MPM診斷學(xué)特征27-28
• 1.4 胰腺惡性腫瘤的MPM診斷學(xué)特征28-30
• 1.5 正常胰腺和胰腺腫物的定量分析30-32
• 2 新鮮標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-36
• 2.1 病人統(tǒng)計(jì)學(xué)資料和樣品特征32-33
• 2.2 正常胰腺組織的MPM診斷學(xué)特征33-35
• 2.3 胰腺癌組織的MPM診斷學(xué)特征35-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 第二部分：多光子顯微成像技術(shù)在梗阻性黃疸肝缺血再灌注損傷中的應(yīng)用40-99
• 一 梗阻性黃疸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立41-48
• 材料與方法41-43
• 1.材料41-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、動(dòng)物喂養(yǎng)及術(shù)前準(zhǔn)備41
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器械41-42
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑42
• 2、方法42-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組42
• 2.2 梗阻性黃疽模型的建立42-43
• 結(jié)果43-46
• 1 手術(shù)情況的觀察43
• 2 兩組大鼠性狀的改變43-45
• 3 兩組大鼠肝功能變化45-46
• 討論46-47
• 結(jié)論47-48
• 二 梗阻性黃疸后肝缺血再灌注損傷的機(jī)制研究48-83
• 材料與方法48-58
• 1.材料48-51
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、動(dòng)物喂養(yǎng)及術(shù)前準(zhǔn)備48-49
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器械49
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑49-50
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器50-51
• 2.實(shí)驗(yàn)方法51-58
• 結(jié)果58-79
• 1 手術(shù)情況的觀察58
• 2 兩組大鼠肝功能改變58-62
• 3 兩組大鼠的TNF a和IL 1β 水平62-64
• 4 兩組大鼠病理學(xué)改變64-68
• 5 大鼠肝組織切片的免疫組化改變68-74
• 6 兩組大鼠NF κB、TNF α 和IL 1β m RNA表達(dá)水平74-79
• 討論79-82
• 結(jié)論82-83
• 三 多光子顯微成像技術(shù)對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注損傷的光學(xué)診斷83-99
• 材料與方法83-85
• 1 實(shí)驗(yàn)材料83-84
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器83-84
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑84
• 2 實(shí)驗(yàn)方法84-85
• 2.1.實(shí)驗(yàn)樣品準(zhǔn)備84
• 2.2 H&E病理染色過(guò)程84
• 2.3 MPM檢測(cè)84-85
• 2.4 統(tǒng)計(jì)方法85
• 結(jié)果85-95
• 1 SO組實(shí)驗(yàn)結(jié)果85-86
• 2 HIRI組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果86-91
• 3 SO組和HIRI組NADH/FAD熒光強(qiáng)度對(duì)比的實(shí)驗(yàn)結(jié)果91-95
• 討論95-98
• 結(jié)論98-99
• 參考文獻(xiàn)99-109
• 文獻(xiàn)綜述109-123
• 參考文獻(xiàn)117-123
• 致謝123

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