背景:皮膚作為人體最大的器官,維持著人體內(nèi)外環(huán)境的平衡。當皮膚的正常解剖結(jié)構(gòu)和功能完整性發(fā)生紊亂時,在機體自身的保護機制下,將啟動一系列與創(chuàng)面愈合相關(guān)的生理和病理修復機制。愈合是一種復雜而動態(tài)的細胞信號反應(yīng),是一種由止血、炎癥、增殖、遷移和重塑等重疊階段組成的生物和分子活動,以實現(xiàn)組織修復。損傷發(fā)生后,脂肪組織可以促進恢復原始組織結(jié)構(gòu),其機制可能與ADSCs內(nèi)含豐富的分泌體有關(guān),這些分泌體已被證實在細胞增殖、分化、遷移和改善細胞與細胞外微環(huán)境之間聯(lián)系中發(fā)揮重要的作用。外分泌體具有與干細胞類似的功能,其富含蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和其他物質(zhì),少數(shù)miRNA被報道在愈合過程中發(fā)揮作用。miRNA為近年來一研究熱點,但是關(guān)于外泌體分泌的miRNA在皮膚損傷愈合過程中的作用研究較少。目的:本研究主要探討ADSCs源性外泌體分泌的miR-486-5p在皮膚損傷愈合中的作用及其機制,并為用于臨床治療提供理論基礎(chǔ)。方法:本課題中主要使用的實驗包括小鼠皮膚損傷模型、組織免疫熒光和HE染色、Masson三色染色、細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)、CCK8、蛋白免疫印跡實驗、劃痕實驗、遷移實驗和小管形成實驗等。結(jié)果:1.... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

流式細胞計數(shù)檢測細胞的表面分子（CD105、CD44、CD73和CD90）

第2章體外分離脂肪源性干細胞和外泌體鑒定14圖2：茜素紅、油紅O、阿爾西亞藍染色實驗，其染色結(jié)果分別代表具有成骨、成脂肪和成軟骨潛能2.2.3ADSCs源性外泌體判斷最后，我們采用外泌體粒徑檢測和電鏡檢查實驗，發(fā)現(xiàn)所獲得的粒子直徑高峰在100nm左右（圖3A），電鏡下也在該大小視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)該粒子（圖3B）。Westernblot實驗提示，相比對照組，所獲得的粒子CD63蛋白和TSG101蛋白表達較高，而calnexin蛋白表達較少（圖3C）。圖3：外泌體粒徑檢測和電鏡檢查（A）粒徑檢測（B）電鏡檢查（C）Westernblot檢測CD63、Calnexin和TSG101蛋白2.3討論該部分實驗我們采用經(jīng)典的ADSCs細胞分離方法，從脂肪組織中分離ADSCs，并于體外進行培養(yǎng)，傳代3次后，進行ADSCs細胞鑒定和外泌體檢測。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，該細胞系表面分子CD105、CD44、CD73和CD90表達豐富；而其他分子如CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR表達陰性。茜素

第2章體外分離脂肪源性干細胞和外泌體鑒定14圖2：茜素紅、油紅O、阿爾西亞藍染色實驗，其染色結(jié)果分別代表具有成骨、成脂肪和成軟骨潛能2.2.3ADSCs源性外泌體判斷最后，我們采用外泌體粒徑檢測和電鏡檢查實驗，發(fā)現(xiàn)所獲得的粒子直徑高峰在100nm左右（圖3A），電鏡下也在該大小視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)該粒子（圖3B）。Westernblot實驗提示，相比對照組，所獲得的粒子CD63蛋白和TSG101蛋白表達較高，而calnexin蛋白表達較少（圖3C）。圖3：外泌體粒徑檢測和電鏡檢查（A）粒徑檢測（B）電鏡檢查（C）Westernblot檢測CD63、Calnexin和TSG101蛋白2.3討論該部分實驗我們采用經(jīng)典的ADSCs細胞分離方法，從脂肪組織中分離ADSCs，并于體外進行培養(yǎng)，傳代3次后，進行ADSCs細胞鑒定和外泌體檢測。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，該細胞系表面分子CD105、CD44、CD73和CD90表達豐富；而其他分子如CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR表達陰性。茜素


本文編號：3056435