發(fā)布時間：2021-02-17 07:11

　　原發(fā)性肝癌具有較高的致死率和腫瘤異質(zhì)性,其中約90%為肝細胞癌（HCC）。在HCC中已鑒定了多種腫瘤干細胞（CSC）的生物標志物,但對于不同CSC亞群中的代謝表型和共享信號分子或通路仍知之甚少。本課題圍繞肝細胞癌的CSC展開,分為如下兩個主要部分。第一部分:miR-192-5p（miR-192）在多組肝細胞癌CSC標記物陽性的HCC患者中,表達顯著沉默。在HCC病人隊列（n=241）中,定義五組CSC陽性的HCC患者,即EpCAM⁺,CD90⁺,CD133⁺,CD44⁺和CD24⁺HCC,及相對應陰性患者,進而比較分析陽性與陰性患者組間miRNA表達譜,發(fā)現(xiàn)14個miRNA在各組陽性患者中均顯著表達下調(diào),且與預后相關(guān)。其中最顯著的miRNA為miR-192。隨后研究發(fā)現(xiàn),miR-192在肝臟中含量豐富且特異性強。在2個獨立的HCC隊列中（n=613）驗證發(fā)現(xiàn),miR-192在五組CSC陽性亞群中均顯著下調(diào)。此外,過表達miR-192能顯著抑制HCC細胞的惡性表型如細胞遷移、侵襲... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 肝癌
        1.1.1 肝癌分類
        1.1.2 肝癌的原發(fā)驅(qū)動因素
    1.2 HCC的異質(zhì)性
        1.2.1 HCC的腫瘤干性（所用的CSC標志物）
        1.2.2 腫瘤干性的信號通路調(diào)控
    1.3 腫瘤代謝
        1.3.1 HCC的腫瘤代謝
        1.3.2 腫瘤代謝與腫瘤干性的關(guān)系
        1.3.3 靶向糖酵解對腫瘤干性抑制
    1.4 微小RNA（microRNA）
        1.4.1 MicroRNA發(fā)現(xiàn)、功能
        1.4.2 MicroRNA參與HCC的腫瘤代謝
        1.4.3 MicroRNA參與HCC腫瘤干性
    1.5 腫瘤微環(huán)境
        1.5.1 廣譜定義
        1.5.2 代謝分子參與調(diào)控腫瘤微環(huán)境——乳酸
    1.6 本課題的主要科學問題
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 主要實驗儀器
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要實驗試劑盒
        2.1.6 抗體
        2.1.7 常規(guī)試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.4 慢病毒包裝及感染細胞
        2.2.5 雙熒光素酶報告質(zhì)粒實驗
        2.2.6 Western blot
        2.2.7 ECAR和 OCR檢測
        2.2.8 TRIzol法提細胞總RNA
        2.2.9 mRNA逆轉(zhuǎn)錄和實時定量PCR
        2.2.10 microRNA逆轉(zhuǎn)錄和實時定量PCR
        2.2.11 CRISPR/Cas9 基因編輯
        2.2.12 流式細胞分析
        2.2.13 2-NBDG的攝取,葡萄糖水平和乳酸水平檢測
        2.2.14 共培養(yǎng)體系
        2.2.15 細胞惡性程度體現(xiàn)（克隆形成、細胞遷移、侵襲、劃痕、懸浮小球）
        2.2.16 小鼠皮下成瘤實驗
        2.2.17 統(tǒng)計學處理
        2.2.18 引物序列
3 miR-192 抑制肝細胞癌的腫瘤干性
    3.1 前言
    3.2 miR-192-5p在5類腫瘤干細胞陽性亞群中均顯著降低
+的HCC病例">    3.3 作為肝臟特異性和高豐度的miRNA,miR-192-5p在 HCC病例中表達下降,尤其是CSC⁺的HCC病例
    3.4 miR-192-5p顯著抑制HCC細胞系的腫瘤干細胞表型
    3.5 miR-192KO細胞系的建立,及其干性表型
    3.6 miR-192 表達受甲基化影響
    3.7 miR-192 在癌癥中的相關(guān)研究
+肝細胞癌中過度的糖酵解">4 miR-192 的缺失導致CSC⁺肝細胞癌中過度的糖酵解
    4.1 前言
    4.2 miR-192 低水平表達的HCC病例中,糖酵解相關(guān)的代謝分子和基因呈現(xiàn)高表達
    4.3 miR-192 抑制肝細胞癌的糖酵解
    4.4 miR-192 缺失的HCC細胞消耗更多的葡萄糖
    4.5 三個關(guān)鍵糖酵解調(diào)控因子是miR-192 潛在靶基因,同時對增強HCC的腫瘤干性有重要意義
+HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反饋機制">    4.6 c-Myc抑制miR-192 轉(zhuǎn)錄水平,進而維持高糖酵解水平的CSC⁺HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反饋機制
+的HCC細胞產(chǎn)生過量的乳酸激活微環(huán)境中非HCC細胞的p-Erk,從而促進HCC細胞自身的腫瘤干性和惡性表型">    4.7 CSC⁺的HCC細胞產(chǎn)生過量的乳酸激活微環(huán)境中非HCC細胞的p-Erk,從而促進HCC細胞自身的腫瘤干性和惡性表型
5 討論及意義
小結(jié)
參考文獻
附錄
    附錄1 引物列表
個人簡歷



本文編號：3037634