研究背景及目的阿爾茲海默�。ˋlzheimer’ s disease,AD）是一種以進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能衰退,同時(shí)伴有行為和人格改變?yōu)橹饕卣鞯纳窠?jīng)系統(tǒng)退行性疾病。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,在60歲以上人群中有10%的人飽受AD的困擾,而在85歲以上人群中AD的發(fā)病比例則高達(dá)50%。疾病不僅影響患者的身體和心理健康,而且對(duì)他們的照顧者、家庭和整個(gè)社會(huì)都造成了沉重的負(fù)擔(dān),因此AD已經(jīng)成為一項(xiàng)亟待解決的全球公共衛(wèi)生問題。但到目前為止,還沒有能明確治愈這種疾病的方法。由β淀粉樣蛋白（Aβ）構(gòu)成的細(xì)胞外的淀粉樣蛋白沉積是AD主要的神經(jīng)病理學(xué)特征之一。遺傳、生物化學(xué)和動(dòng)物模型的數(shù)據(jù)均表明,Aβ在AD的發(fā)病中起著核心作用,在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)都被認(rèn)為是治療AD的最有前景的目標(biāo)。因此,進(jìn)一步研究A β神經(jīng)毒性的作用機(jī)制對(duì)于了解AD的發(fā)病機(jī)制并開發(fā)有效的治療措施顯得尤為重要。線粒體是一種由線粒體外膜和線粒體內(nèi)膜包被的具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器。大量研究證實(shí)了線粒體在很多年齡相關(guān)性疾病中發(fā)揮著重要作用,AD作為一種復(fù)雜的多因素疾病,線粒體功能障礙也是其常見的病理改變。當(dāng)線粒體中大量錯(cuò)誤或未折疊蛋白累積時(shí),就會(huì)激活線粒... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ＡＰ細(xì)胞外干預(yù)的ＳＨＳＹ５Ｙ細(xì)胞中和ＡＰＰ／ＰＳ１轉(zhuǎn)基因小鼠中存在ＵＰＲｍｔ的激??活??圖Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ細(xì)胞經(jīng)不同濃度的Ａ?０?２５－３５處理２４ｈ后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＵＰＲｍ?

ａｓｔａｔｉｎ（ｕＭ）?０１１１１０１０１０?＿??Ｓｉｍｖａｓｔａ？ｎ（ｈ）?０?２?６?２４?２?６?２４?Ｃ｜｜｜｜｜ｇ｜?ｌＩ｜｜｜｜｜｜｜??Ｌ０ＮＰ１?———?，５里．１１］籃匱＿—?．■疆ＬｈＪ?＿?Ｈ??Ｈｓｐ６０?Ｗｌｔ＾?ｍｍｍ?？■？?＜ｍｒｎｍ?？ｍ？?Ｓｔｍｖａｓｔａｒｔｎｇ?ＳＵｎｖｘＭＵｎｇ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?輯？？必一＇…￣?等?ｔＡｌ?１Ｓ＂??二：：：：二：［ｗ＿?偏勤廳??ＳｋｎｖａａｂＭＭｔｇ?Ｂｉａｎｖａａｆａｔｉｎｇ??圖１．通過ＨＭＧＣＳ－１?ｓ?ｉＲＮＡｓ或ｓ?ｉｍｖａｓｔａｔ?ｉｎ阻斷甲輕戊酸通路會(huì)抑制由Ａ?（３?２５－３５誘導(dǎo)的??ＳＨＳＹ５Ｙ細(xì)胞ＵＰＲｍｔ反應(yīng)的激活??圖?Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ?細(xì)胞經(jīng)?２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５?干預(yù)?４ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測(cè)?ＨＭＧＣＳ－１?蛋??白的表達(dá)并定量，其中Ｐ－Ａｃｔｉｎ為內(nèi)參（＊，?ｐ＜０．０５）。圖Ｂ轉(zhuǎn)染對(duì)照組或??ＨＭＧＣＳ－ｌｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測(cè)?ＳＨＳＹ５Ｙ?細(xì)胞內(nèi)?ＨＭＧＣＳ－１?和?ＵＰＲｍｔ?相??關(guān)蛋白的表達(dá)并定量，其中３－Ａｃｔｉｎ為內(nèi)參（＊表示與轉(zhuǎn)染ｓｉＮＣ組相比ｐ＜０．?０５）。??圖Ｃ轉(zhuǎn)染對(duì)照組或ＨＭＧＣＳ－１?ｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ后再給與２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５干預(yù)４ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ檢測(cè)ＳＨＳＹ５Ｙ細(xì)胞內(nèi)１ＩＭＧＣＳ－１和ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白的表達(dá)并定量，其中３?－Ａｃｔｉｎ??為內(nèi)參（＊表不與轉(zhuǎn)染ｓｉＮＣ組相比ｐ＜０．?０５）。圖Ｄ經(jīng)過ｌｕＭ和１０ｕＭ?ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ??處理不同時(shí)間后再給與２０ｕＭ?Ａ?Ｐ

激活。為了檢測(cè)內(nèi)源性過表達(dá)ＡＰＰｓｗ基因后是否會(huì)??引起同樣的ＵＰＲｍｔ反應(yīng)，我們采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法檢測(cè)ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２細(xì)胞??中ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，與ＨＥＫ２９３細(xì)胞相比，２０Ｅ２細(xì)胞中ＡＰＰ蛋??白的水平明顯增加，再次驗(yàn)證了?ＡＤ細(xì)胞模型構(gòu)建成功。與ＨＥＫ２９３細(xì)胞相比，２０Ｅ２??細(xì)胞中ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白Ｈｓｐ６０的表達(dá)明顯增力［］。但是，另外兩個(gè)ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ、ＣＬＰＰ在２０Ｅ２細(xì)胞中的水平卻比ＨＥＫ２９３細(xì)胞下降（圖１）。上述結(jié)??果提示與ＨＥＫ２９３細(xì)胞相比，穩(wěn)定過表達(dá)ＡＰＰｓｗ基因后細(xì)胞內(nèi)ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白的??表達(dá)有所改變。??Ｔ?＊?■?ＨＥＫ２９３??…２＇５１?＊?ｍ?２０Ｅ２??ＡＰＰ?丄??２〇－幽??Ｈｓｐ６０?—＊?１５，?Ｈ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ｍ＂ｍ?？＊＊？?１?〇．?圖?＊?＊??ＣＬＰＰ?ｍｍ?ｍｍ?。＿５■■圍■幽■?＿??ＧＡＰＤＨ?ｏ．ｏ－Ｌ＊ｒ？￣￣■，開￣￣■■網(wǎng)??Ｈｓｐ６０?ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ＣＬＰＰ??圖１．穩(wěn)定過表達(dá)ＡＰＰｓｗ基因后ＨＥＫ２９３細(xì)胞內(nèi)ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白的表達(dá)有所改變??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２細(xì)胞中ＡＰＰ及ＵＰＲｍｔ相關(guān)蛋白的表達(dá)并定量，??其中?ＧＡＰＤＨ?為內(nèi)參（＊，ｐ＜０．０５）。??５４??


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