目的:研究加味芍藥甘草湯通過介導(dǎo)miR-27a調(diào)控P53/EGFR/STAT3信號通路來治療子宮腺肌病的干預(yù)機制,從分子水平上闡釋加味芍藥苷草湯治療子宮腺肌病的深層機理,為進一步研究加味芍藥苷草湯有效作用部位和臨床優(yōu)化處方提供實驗基礎(chǔ)。方法:1.選擇自2015年9月至2016年5月在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院并接受手術(shù)治療的子宮腺肌病患者共10例,取其病灶組織進行細胞培養(yǎng)。2.以免疫化學(xué)法鑒定所培養(yǎng)的原代細胞;MTT法和流式細胞技術(shù)檢測細胞的增殖情況、細胞周期分布和凋亡率;劃痕實驗以檢測細胞的體外遷移能力;蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細胞中 p53-273H、LIF、EGFR、p-EGFR、c-Src、STAT3、p-STAT3、COX-2 的表達;RT-qPCR 技術(shù)檢測細胞中 p53-273HmRNA、LIFRmRNA、miR-27a、EGFR mRNA的表達。結(jié)果:1.本研究共收集了 10例子宮腺肌病病灶組織,均培養(yǎng)成功。原代細胞培養(yǎng)24h后,其中的間質(zhì)細胞基本貼壁,呈梭形排列;腺上皮細胞則呈漩禍狀排列;平滑肌細胞呈長梭形或橢圓形,呈放射、平行排列。2.經(jīng)免... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２技術(shù)路線示意圖??

（從左至右依次為角蛋白、波形蛋白、平滑肌肌動蛋白）??２．１．?５討論??本課題的研究是基于子宮腺肌病病灶細胞體外培養(yǎng)基礎(chǔ)上的，故細胞模型的建立??尤為重要。??細胞是人體最基本的單位，具備個體特有的遺傳信息和功能特性。細胞培養(yǎng)是功??能基因組和疾病基因組研究中最方便、最快捷的研究工具，可用于生命現(xiàn)象的各項研??究，如細胞的活動及其調(diào)控；可應(yīng)用在對某種疾病的研究，如炎癥的發(fā)生；也可分析??生物工程相關(guān)的問題，如核酸的合成和復(fù)制；還可應(yīng)用在組織工程方面，如千細胞的??組織修復(fù)等。??原代細胞培養(yǎng)是利用酶消化、機械或化學(xué)方法等單用或聯(lián)合應(yīng)用，使細胞從組織、??器官分散處理，在體外進行培養(yǎng)的方法［１１８］。由于原代培養(yǎng)的ＡＭ細胞保持了體內(nèi)ＡＭ??細胞的性狀，故有利于進行相關(guān)的檢測，是一種較為理想的模型。其次，ＡＭ的發(fā)病機??制較為復(fù)雜。在動物模型中，常用激素誘導(dǎo)ＡＭ的形成，但此法常并發(fā)其他疾病，如??子宮內(nèi)膜癌等；而垂體移植法則對操作者的技術(shù)水平較高的要求，且造模需要的時間??較長［１１９］。與動物模型相比，ＡＭ病灶細胞體外培養(yǎng)更利于反映在體情況，而且實驗條??

（從左至右依次為角蛋白、波形蛋白、平滑肌肌動蛋白）??２．１．?５討論??本課題的研究是基于子宮腺肌病病灶細胞體外培養(yǎng)基礎(chǔ)上的，故細胞模型的建立??尤為重要。??細胞是人體最基本的單位，具備個體特有的遺傳信息和功能特性。細胞培養(yǎng)是功??能基因組和疾病基因組研究中最方便、最快捷的研究工具，可用于生命現(xiàn)象的各項研??究，如細胞的活動及其調(diào)控；可應(yīng)用在對某種疾病的研究，如炎癥的發(fā)生；也可分析??生物工程相關(guān)的問題，如核酸的合成和復(fù)制；還可應(yīng)用在組織工程方面，如千細胞的??組織修復(fù)等。??原代細胞培養(yǎng)是利用酶消化、機械或化學(xué)方法等單用或聯(lián)合應(yīng)用，使細胞從組織、??器官分散處理，在體外進行培養(yǎng)的方法［１１８］。由于原代培養(yǎng)的ＡＭ細胞保持了體內(nèi)ＡＭ??細胞的性狀，故有利于進行相關(guān)的檢測，是一種較為理想的模型。其次，ＡＭ的發(fā)病機??制較為復(fù)雜。在動物模型中，常用激素誘導(dǎo)ＡＭ的形成，但此法常并發(fā)其他疾病，如??子宮內(nèi)膜癌等；而垂體移植法則對操作者的技術(shù)水平較高的要求，且造模需要的時間??較長［１１９］。與動物模型相比，ＡＭ病灶細胞體外培養(yǎng)更利于反映在體情況，而且實驗條??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]三七總皂苷對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖、遷移及凋亡的影響[J]. 孫樹凱,馬磊,張海紅,賈棟.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2016(05)
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[3]磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（Y705）在子宮腺肌癥中的表達及其臨床意義[J]. 王靜,楊陽,楊寧,鄧曉惠,楊興升,晁嵐.  解剖學(xué)報. 2016(02)
[4]腹腔鏡病灶切除術(shù)聯(lián)合左炔諾孕酮宮內(nèi)緩釋系統(tǒng)治療子宮腺肌癥的療效觀察[J]. 趙蓉,王麗梅,顧玉嬋,陳圓,魏特曼,吳楠,王樹鶴.  中國婦產(chǎn)科臨床雜志. 2016(01)
[5]甘草查爾酮A對小鼠黑色素瘤B16F10細胞體外遷移能力的影響[J]. 馬曉懿,楊新惠,鄭秋生.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2015(18)
[6]三七抗腫瘤作用實驗研究概況[J]. 張靜宇,張靜波.  環(huán)球中醫(yī)藥. 2015(08)
[7]中藥芍藥甘草湯基原及藥效組分和藥理作用研究概況[J]. 朱廣偉,張貴君,汪萌,王晶娟,渠磊,蔡悅萍.  中華中醫(yī)藥雜志. 2015(08)
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[9]腹腔鏡下子宮動脈阻斷術(shù)結(jié)合中藥治療子宮腺肌癥的臨床觀察[J]. 張小強,惠新平.  中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2015(03)
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博士論文
[1]子宮腺肌病ER及miR-21介導(dǎo)的Ras/Raf通路作用機制及加味芍藥甘草湯對其的干預(yù)[D]. 曾玉燕.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[2]加味芍藥甘草湯對子宮腺肌病MAPK/ERK信號通路干預(yù)機制[D]. 王帥.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[3]P53突變體獲得性功能在腫瘤發(fā)生中作用機制的研究[D]. 王文宇.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]琥珀散加減治療子宮腺肌病痛經(jīng)（寒凝血瘀證）的臨床觀察[D]. 于淼.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2012



本文編號：2962297