本文關鍵詞：HIF-VEGF-Notch通路相關因子在嬰幼兒血管瘤組織中的表達和意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的嬰幼兒血管瘤(Infantile Hemangiomas,IHs)是嬰幼兒最常見的血管性良性腫瘤,根據(jù)Mulliken等提出的生物學分類法,通過病理學特點、生長方式及臨床表現(xiàn)等將其分為血管瘤(Hemangiomas)和血管畸形(Vascular malformations)兩大類。其中血管瘤約占先天性血管性病變的80%以上,并且絕大部分嬰幼兒血管瘤的生長過程具有典型“分期”特點：病灶大約在出生后即刻或2周內(nèi)出現(xiàn),經(jīng)過平均約10個月左右的快速增殖期后,大概1歲之后進入消退期(持續(xù)7-10年)和消退后期。嬰幼兒血管瘤的增殖和消退過程與血管內(nèi)皮細胞的異常增殖和分化、成熟關系密切,因此對嬰幼兒血管瘤發(fā)病機制及治療的研究多數(shù)集中在影響血管發(fā)生和血管生成的諸多因素之中。缺氧誘導因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)是細胞缺氧狀態(tài)下分泌的最重要細胞因子之一,是腫瘤生長過程中促進新生血管生成的始動因素,HIF-1α的高表達可以對包括血管內(nèi)皮細胞生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)信號在內(nèi)的多種下游靶基因進行調(diào)控,促進新生血管生成,緩解瘤體細胞供血不足,保證瘤體快速生長。VEGF是參與血管發(fā)生和生長的重要因子之一,是血管內(nèi)皮細胞特異性最高的有絲分裂原。通過與相應血管內(nèi)皮細胞生長因子受體(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR)結合,激活一系列下游信號,發(fā)揮促血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和增加血管內(nèi)皮通透性等生物效應,從而促進腫瘤內(nèi)部新生血管的生成。Notch信號通路是近年來研究較多的參與細胞分化、腫瘤血管形成和生長的熱點信號通路之一。其中Notch1受體、Jagged1以及D114均在血管內(nèi)皮細胞表達并被認為與腫瘤新生血管生成關系最為密切。有研究表明,以上三條信號通路均在實體腫瘤新生血管發(fā)生和成熟過程中具有重要作用,對腫瘤的早期生長和血管形成意義重大。但是在嬰幼兒血管瘤的發(fā)病及疾病進展的不同時期,缺氧、VEGF以及Notch信號通路的相互作用,尤其是Notc h信號通路在嬰幼兒血管瘤新生血管生成過程中的意義,目前國內(nèi)外尚未見明確報道。本文擬通過免疫熒光實時定量PCR(Real-time Quantitative PCR,Q-PCR)對增殖期和消退期嬰幼兒血管瘤組織中HIF-VEGF-Notch信號通路相關細胞因子RNA相對表達定量進行檢測,并分析各相關因子之間相關性。同時使用免疫組織化學法檢測Notch通路因子Notch1、Jaggedl和D114在不同時期嬰幼兒血管瘤組織中蛋白表達,并分析其與微血管密度(Microvessel Density,MVD)關系。探尋缺氧、VEGF和Notch信號通路在嬰幼兒血管瘤生長過程中表達水平變化及相互影響,對Notch通路在嬰幼兒血管瘤增殖和消退過程中對微血管新生的作用及意義進行初步探討。材料與方法1、收集2012年1月至2013年12月期間在山東省立醫(yī)院進行手術治療的27例嬰幼兒血管瘤患兒手術切除標本,即刻液氮轉運至-80℃冰箱保存。根據(jù)Mulliken生物分類法,結合年齡及病理切片HE染色結果,將所有病例分為增生期組(n=15),消退期組(n=12),另取10例患兒瘤旁正常皮膚作為對照組。采用Trizol法提取保存組織中總RNA,經(jīng)逆轉錄為cDNA。分別合成HIF-1α、 VEGF、VEGFR2、Notch1、Jaaged1和D114目的基因引物進行Q-PCR檢測,使用GFPAH作為內(nèi)參對照。繪制溶解及擴增曲線結合GAPD H內(nèi)參表達水平計算相應因子nRNA相對定量。2、收集2009年1月至2013年12月期間在山東省立醫(yī)院進行手術切除治療的61例血管瘤患兒所保存病灶組織蠟塊,復習資料后將所有病例分為增生期組(n=26),消退期組(n=35)。另取10例患兒瘤旁正常皮膚作為對照組。所有蠟塊標本進行切片后以鏈霉抗生物素-生物素復合物(S-ABC法)進行免疫組織化學染色,以Image-Pro Plus6.0分析軟件測量Notch1、Jagged1和D114等蛋白表達的平均光密度值(Optical Density,OD)。以CD34染色標記血管內(nèi)皮細胞以計算MVD。3、應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包進行處理,對服從正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(x±s)進行表示,不同分組間之間差異比較使用單因素方差分析,相應指標相關性分析用Pearson相關系數(shù)檢測進行統(tǒng)計學分析。對于偏態(tài)分布數(shù)據(jù)采用中位數(shù)(范圍)形式表示,組間數(shù)據(jù)采用Kruskal-Wallis檢驗分析進行檢驗和兩兩比較,利用Spearmann相關檢測對不同指標間相關性進行分析。P0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。結果1、由Q-PCR檢測計算所得目標因子mRNA相對表達定量進行比較可知,增殖期IHs組織中HIF-1α mRNA顯著高于消退期和正常皮膚,消退期與對照組之間差異不顯著。增殖期VEGF表達高于消退期及對照組,消退期表達高于正常皮膚,差異均具有統(tǒng)計學意義。增殖期VEGFR2表達高于其他兩組,消退期和對照組之間差異不顯著。Notch1表達在增殖期和消退期均高于對照組,在增殖期和消退期之間表達水平相近。Jagged1在消退期的表達高于增殖期和對照組,而Dl14在增殖期表達高于消退期和對照組。2、在增殖期IHs組織內(nèi),HIF-1 α相對表達水平與VEGF、VEGFR2之間分別呈顯著性正向相關(p0.05)。而在消退期,HIF-1α與VEGF關系與增殖期類似,與VEGFR2呈接近正向相關關系。在增殖期IHs組織內(nèi),HIF-1α相對表達水平與Notch1、D114之間呈顯著性正向相關關系,而消退期未檢測到HIF-1 α與Notch通路之間有顯著相關。在增殖期,VEGFR2與Notch1存在正向相關關系,同時VEGF與D114之間也存在正向相關。而在消退期,VEGF與D114之間仍存在顯著性正向相關關系,其余指標間相關性并不顯著。此外,增生期D114分別與Notch1、Jagged1之間呈顯著正向相關關系。在消退期Jagged1與Notch1之間接近正向相關,與D114之間相關性不顯著。3、通過免疫組織化學染色法測得目的蛋白平均OD值可知,Notch1和DLL4蛋白在增生期及消退期嬰幼兒血管瘤組織中的表達均高于正常皮膚,其中D114在增殖期表達水平最高(p0.01),而Notchl在增殖期表達與消退期相仿,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。Jagged1在增殖期及消退期表達雖然都高于正常皮膚,但在消退期其平均OD值高于增殖期(p0.01)。增殖期血管瘤組織MVD(100.69±22.54)明顯高于對照組(43.35±13.08)及正常皮膚對照組(11.67±7.19),差異均具有統(tǒng)計學意義(p0.01)。4、增殖期嬰幼兒血管瘤組織中,Notch1、D114平均OD值與MVD之間存在正向相關(p0.05),Jagged1與MVD未檢測到顯著性相關關系。而在消退期,D114與MVD之間存在正向相關關系(p0.05),而Jagged1與MVD之間接近負向相關關系,Notch1與MVD之間相關性不明顯。結論1、不同時期嬰幼兒血管瘤組織內(nèi)缺氧、VEGF與Notch信號通路相關因子存在相互影響,提示HIF-VEGF-Notch信號通路共同參與調(diào)節(jié)嬰幼兒血管瘤的發(fā)生和發(fā)展。2、增殖期和消退期嬰幼兒血管瘤組織內(nèi)Notch1、Jagged1和Dll4因子的異�；罨�,提示Notch信號通路在嬰幼兒血管瘤增殖和消退過程中均具有重要意義。3、D114信號通路作為缺氧、VEGF下游靶信號在血管瘤的生長和微血管密度的保持過程中具有十分重要的協(xié)同作用,而Jagged1蛋白在血管瘤消退過程中可能具有更為重要的作用。對Notch信號通路的干預有望為抑制嬰幼兒血管瘤生長和促進其由增殖期向消退期快速轉化提供新的治療思路。
【關鍵詞】：嬰幼兒血管瘤 缺氧誘導因子 血管內(nèi)皮細胞生長因子 Notch信號通路 受體 免疫組織化學 Q-PCR
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R732.2
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 符號說明15-16
• 背景及目的16-18
• 實驗一18-24
• 材料與方法18-22
• 結果22-24
• 實驗二24-28
• 材料與方法24-26
• 結果26-28
• 討論28-37
• 結論37-38
• 附錄38-45
• 參考文獻45-51
• 綜述51-69
• 參考文獻62-69
• 英文文章169-82
• 英文文章282-97
• 致謝97-98
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄98-100
• 學位論文評閱及答辯情況100

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭禎;陳紹林;胡衛(wèi)彬;;平頂山市嬰幼兒血管瘤發(fā)病情況調(diào)查分析[J];中國實用醫(yī)藥;2012年21期

  本文關鍵詞：HIF-VEGF-Notch通路相關因子在嬰幼兒血管瘤組織中的表達和意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：294671