本文關(guān)鍵詞：HIF-VEGF-Notch通路相關(guān)因子在嬰幼兒血管瘤組織中的表達(dá)和意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的嬰幼兒血管瘤(Infantile Hemangiomas,IHs)是嬰幼兒最常見(jiàn)的血管性良性腫瘤,根據(jù)Mulliken等提出的生物學(xué)分類法,通過(guò)病理學(xué)特點(diǎn)、生長(zhǎng)方式及臨床表現(xiàn)等將其分為血管瘤(Hemangiomas)和血管畸形(Vascular malformations)兩大類。其中血管瘤約占先天性血管性病變的80%以上,并且絕大部分嬰幼兒血管瘤的生長(zhǎng)過(guò)程具有典型“分期”特點(diǎn)：病灶大約在出生后即刻或2周內(nèi)出現(xiàn),經(jīng)過(guò)平均約10個(gè)月左右的快速增殖期后,大概1歲之后進(jìn)入消退期(持續(xù)7-10年)和消退后期。嬰幼兒血管瘤的增殖和消退過(guò)程與血管內(nèi)皮細(xì)胞的異常增殖和分化、成熟關(guān)系密切,因此對(duì)嬰幼兒血管瘤發(fā)病機(jī)制及治療的研究多數(shù)集中在影響血管發(fā)生和血管生成的諸多因素之中。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)是細(xì)胞缺氧狀態(tài)下分泌的最重要細(xì)胞因子之一,是腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中促進(jìn)新生血管生成的始動(dòng)因素,HIF-1α的高表達(dá)可以對(duì)包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)信號(hào)在內(nèi)的多種下游靶基因進(jìn)行調(diào)控,促進(jìn)新生血管生成,緩解瘤體細(xì)胞供血不足,保證瘤體快速生長(zhǎng)。VEGF是參與血管發(fā)生和生長(zhǎng)的重要因子之一,是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性最高的有絲分裂原。通過(guò)與相應(yīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR)結(jié)合,激活一系列下游信號(hào),發(fā)揮促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和增加血管內(nèi)皮通透性等生物效應(yīng),從而促進(jìn)腫瘤內(nèi)部新生血管的生成。Notch信號(hào)通路是近年來(lái)研究較多的參與細(xì)胞分化、腫瘤血管形成和生長(zhǎng)的熱點(diǎn)信號(hào)通路之一。其中Notch1受體、Jagged1以及D114均在血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)并被認(rèn)為與腫瘤新生血管生成關(guān)系最為密切。有研究表明,以上三條信號(hào)通路均在實(shí)體腫瘤新生血管發(fā)生和成熟過(guò)程中具有重要作用,對(duì)腫瘤的早期生長(zhǎng)和血管形成意義重大。但是在嬰幼兒血管瘤的發(fā)病及疾病進(jìn)展的不同時(shí)期,缺氧、VEGF以及Notch信號(hào)通路的相互作用,尤其是Notc h信號(hào)通路在嬰幼兒血管瘤新生血管生成過(guò)程中的意義,目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)明確報(bào)道。本文擬通過(guò)免疫熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time Quantitative PCR,Q-PCR)對(duì)增殖期和消退期嬰幼兒血管瘤組織中HIF-VEGF-Notch信號(hào)通路相關(guān)細(xì)胞因子RNA相對(duì)表達(dá)定量進(jìn)行檢測(cè),并分析各相關(guān)因子之間相關(guān)性。同時(shí)使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Notch通路因子Notch1、Jaggedl和D114在不同時(shí)期嬰幼兒血管瘤組織中蛋白表達(dá),并分析其與微血管密度(Microvessel Density,MVD)關(guān)系。探尋缺氧、VEGF和Notch信號(hào)通路在嬰幼兒血管瘤生長(zhǎng)過(guò)程中表達(dá)水平變化及相互影響,對(duì)Notch通路在嬰幼兒血管瘤增殖和消退過(guò)程中對(duì)微血管新生的作用及意義進(jìn)行初步探討。材料與方法1、收集2012年1月至2013年12月期間在山東省立醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的27例嬰幼兒血管瘤患兒手術(shù)切除標(biāo)本,即刻液氮轉(zhuǎn)運(yùn)至-80℃冰箱保存。根據(jù)Mulliken生物分類法,結(jié)合年齡及病理切片HE染色結(jié)果,將所有病例分為增生期組(n=15),消退期組(n=12),另取10例患兒瘤旁正常皮膚作為對(duì)照組。采用Trizol法提取保存組織中總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。分別合成HIF-1α、 VEGF、VEGFR2、Notch1、Jaaged1和D114目的基因引物進(jìn)行Q-PCR檢測(cè),使用GFPAH作為內(nèi)參對(duì)照。繪制溶解及擴(kuò)增曲線結(jié)合GAPD H內(nèi)參表達(dá)水平計(jì)算相應(yīng)因子nRNA相對(duì)定量。2、收集2009年1月至2013年12月期間在山東省立醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除治療的61例血管瘤患兒所保存病灶組織蠟塊,復(fù)習(xí)資料后將所有病例分為增生期組(n=26),消退期組(n=35)。另取10例患兒瘤旁正常皮膚作為對(duì)照組。所有蠟塊標(biāo)本進(jìn)行切片后以鏈霉抗生物素-生物素復(fù)合物(S-ABC法)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,以Image-Pro Plus6.0分析軟件測(cè)量Notch1、Jagged1和D114等蛋白表達(dá)的平均光密度值(Optical Density,OD)。以CD34染色標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞以計(jì)算MVD。3、應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理,對(duì)服從正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)進(jìn)行表示,不同分組間之間差異比較使用單因素方差分析,相應(yīng)指標(biāo)相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)系數(shù)檢測(cè)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)于偏態(tài)分布數(shù)據(jù)采用中位數(shù)(范圍)形式表示,組間數(shù)據(jù)采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析進(jìn)行檢驗(yàn)和兩兩比較,利用Spearmann相關(guān)檢測(cè)對(duì)不同指標(biāo)間相關(guān)性進(jìn)行分析。P0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、由Q-PCR檢測(cè)計(jì)算所得目標(biāo)因子mRNA相對(duì)表達(dá)定量進(jìn)行比較可知,增殖期IHs組織中HIF-1α mRNA顯著高于消退期和正常皮膚,消退期與對(duì)照組之間差異不顯著。增殖期VEGF表達(dá)高于消退期及對(duì)照組,消退期表達(dá)高于正常皮膚,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。增殖期VEGFR2表達(dá)高于其他兩組,消退期和對(duì)照組之間差異不顯著。Notch1表達(dá)在增殖期和消退期均高于對(duì)照組,在增殖期和消退期之間表達(dá)水平相近。Jagged1在消退期的表達(dá)高于增殖期和對(duì)照組,而Dl14在增殖期表達(dá)高于消退期和對(duì)照組。2、在增殖期IHs組織內(nèi),HIF-1 α相對(duì)表達(dá)水平與VEGF、VEGFR2之間分別呈顯著性正向相關(guān)(p0.05)。而在消退期,HIF-1α與VEGF關(guān)系與增殖期類似,與VEGFR2呈接近正向相關(guān)關(guān)系。在增殖期IHs組織內(nèi),HIF-1α相對(duì)表達(dá)水平與Notch1、D114之間呈顯著性正向相關(guān)關(guān)系,而消退期未檢測(cè)到HIF-1 α與Notch通路之間有顯著相關(guān)。在增殖期,VEGFR2與Notch1存在正向相關(guān)關(guān)系,同時(shí)VEGF與D114之間也存在正向相關(guān)。而在消退期,VEGF與D114之間仍存在顯著性正向相關(guān)關(guān)系,其余指標(biāo)間相關(guān)性并不顯著。此外,增生期D114分別與Notch1、Jagged1之間呈顯著正向相關(guān)關(guān)系。在消退期Jagged1與Notch1之間接近正向相關(guān),與D114之間相關(guān)性不顯著。3、通過(guò)免疫組織化學(xué)染色法測(cè)得目的蛋白平均OD值可知,Notch1和DLL4蛋白在增生期及消退期嬰幼兒血管瘤組織中的表達(dá)均高于正常皮膚,其中D114在增殖期表達(dá)水平最高(p0.01),而Notchl在增殖期表達(dá)與消退期相仿,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。Jagged1在增殖期及消退期表達(dá)雖然都高于正常皮膚,但在消退期其平均OD值高于增殖期(p0.01)。增殖期血管瘤組織MVD(100.69±22.54)明顯高于對(duì)照組(43.35±13.08)及正常皮膚對(duì)照組(11.67±7.19),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。4、增殖期嬰幼兒血管瘤組織中,Notch1、D114平均OD值與MVD之間存在正向相關(guān)(p0.05),Jagged1與MVD未檢測(cè)到顯著性相關(guān)關(guān)系。而在消退期,D114與MVD之間存在正向相關(guān)關(guān)系(p0.05),而Jagged1與MVD之間接近負(fù)向相關(guān)關(guān)系,Notch1與MVD之間相關(guān)性不明顯。結(jié)論1、不同時(shí)期嬰幼兒血管瘤組織內(nèi)缺氧、VEGF與Notch信號(hào)通路相關(guān)因子存在相互影響,提示HIF-VEGF-Notch信號(hào)通路共同參與調(diào)節(jié)嬰幼兒血管瘤的發(fā)生和發(fā)展。2、增殖期和消退期嬰幼兒血管瘤組織內(nèi)Notch1、Jagged1和Dll4因子的異�；罨�,提示Notch信號(hào)通路在嬰幼兒血管瘤增殖和消退過(guò)程中均具有重要意義。3、D114信號(hào)通路作為缺氧、VEGF下游靶信號(hào)在血管瘤的生長(zhǎng)和微血管密度的保持過(guò)程中具有十分重要的協(xié)同作用,而Jagged1蛋白在血管瘤消退過(guò)程中可能具有更為重要的作用。對(duì)Notch信號(hào)通路的干預(yù)有望為抑制嬰幼兒血管瘤生長(zhǎng)和促進(jìn)其由增殖期向消退期快速轉(zhuǎn)化提供新的治療思路。
【關(guān)鍵詞】：嬰幼兒血管瘤 缺氧誘導(dǎo)因子 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 Notch信號(hào)通路 受體 免疫組織化學(xué) Q-PCR
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R732.2
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 符號(hào)說(shuō)明15-16
• 背景及目的16-18
• 實(shí)驗(yàn)一18-24
• 材料與方法18-22
• 結(jié)果22-24
• 實(shí)驗(yàn)二24-28
• 材料與方法24-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-37
• 結(jié)論37-38
• 附錄38-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 綜述51-69
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 英文文章169-82
• 英文文章282-97
• 致謝97-98
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄98-100
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況100

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郭禎;陳紹林;胡衛(wèi)彬;;平頂山市嬰幼兒血管瘤發(fā)病情況調(diào)查分析[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2012年21期

  本文關(guān)鍵詞：HIF-VEGF-Notch通路相關(guān)因子在嬰幼兒血管瘤組織中的表達(dá)和意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：294671