目的:肺癌是我國最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率在我國男性患者中排第一位,在女性患者中排第二位,死亡率高。大部分患者肺癌早期缺乏明顯臨床體征和有效的早期篩查手段,很多患者確診時(shí)肺癌分期較晚,5年生存率不超過18%。因此,對肺癌機(jī)制、早期癌癥篩查的生物學(xué)標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)的研究具有重要意義。miRNA是目前腫瘤領(lǐng)域研究最為廣泛的非編碼RNA,miRNA既通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,又調(diào)控腫瘤細(xì)胞免疫逃避過程,還與腫瘤細(xì)胞耐藥性密切相關(guān)。此外,miRNA在腫瘤的早期診斷及篩查、預(yù)后及對治療的反應(yīng)評價(jià)中也具有一定的價(jià)值。循環(huán)系統(tǒng)中的游離miRNA容易受核糖核酸酶、PH等因素的影響,其理化性質(zhì)不穩(wěn)定。外泌體中的miRNA由于受到外膜的保護(hù)相對于循環(huán)中的游離miRNA,其穩(wěn)定性優(yōu)于游離miRNA。近年來越來越多的研究開始關(guān)注外泌體miRNA在肺癌發(fā)病機(jī)制及發(fā)展中的重要作用。方法:為了探究外泌體miRNA對非小細(xì)胞肺癌的影響,我們使用miRNA微陣列技術(shù)對肺癌患者的血液中的外泌體miRNA進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析。本研究共納入6個(gè)樣本,年齡均在50-60歲之間,其中4例非小細(xì)胞肺癌男性患者,包括2例為晚期轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌,2例為早期原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌,另外2例健康男性作為對照組。其后對GSE118370芯片進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘,將共同表達(dá)的mRNA進(jìn)行基因本體分析、信號通路分析、cytohubba分析,并應(yīng)用RNA干擾技術(shù)、蛋白電泳技術(shù)、細(xì)胞增殖和遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miRNA/mRNA在肺腺癌中的作用機(jī)制。結(jié)果:與非轉(zhuǎn)移組相比,miR-4436a和miR-4687-5p是轉(zhuǎn)移組中顯著上調(diào)的miRNA。在表達(dá)下調(diào)的差異基因中,轉(zhuǎn)移組中miR-22-3p、miR-3666、miR-4449、miR-4448、miR-6751-5p、miR-92a-3p較非轉(zhuǎn)移組明顯表達(dá)下調(diào),轉(zhuǎn)移組中miR-3160-5p和miR-4448較健康對照組明顯表達(dá)下調(diào)。miR-22-3p、miR-3666、miR-4449、miR-6751-5p和miR-92a-3p是非轉(zhuǎn)移組與健康對照組相比較,表達(dá)上調(diào)的差異miRNA。為了進(jìn)一步評估這些miRNA在非小細(xì)胞肺癌中的作用,我們對測序結(jié)果和GSE118370進(jìn)行了整合分析,GSE118370是GEO數(shù)據(jù)庫中的一個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集,包括6個(gè)肺腺癌組織和6個(gè)相鄰的正常肺組織。肺腺癌屬于非小細(xì)胞肺癌。cytohubba分析結(jié)果顯示,RRM2、AURKA、NEK2、CHEK1、BIRC5、CENPF、MCM10、UBE2D1、CDH1、HMMR等前10位基因?yàn)楹诵陌l(fā)病基因。這些靶基因參與p53信號通路,在腫瘤中發(fā)揮重要作用。RRM2位于差異基因的頂端,hsa-miR-3160-5p、hsa-miR-4448、hsa-miR-1254、hsa-miR-4324、hsa-miR-4687-5p和hsa-miR-4436a與RRM2有結(jié)合區(qū)域。但是,通過與非轉(zhuǎn)移組和對照組相比,只有hsa-miR-4448在轉(zhuǎn)移組呈現(xiàn)差異性下調(diào),故我們鎖定miR-4448/RRM2在肺癌中潛在的作用機(jī)制作為研究重點(diǎn)。另外在TCGA數(shù)據(jù)庫中,RRM2在肺癌組織中的表達(dá)高于正常組織。RRM2的高表達(dá)與肺癌的低生存率有關(guān)。因此這些miRNA可能參與了非小細(xì)胞肺癌的腫瘤發(fā)生、增殖、遷移和侵襲。特別是,miR-4448可能以RRM2為靶點(diǎn),有望成為非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物。綜合這些結(jié)果,我們認(rèn)為miR-4448可能通過調(diào)控RRM2表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的增殖和轉(zhuǎn)移。為了驗(yàn)證我們的結(jié)論,我們首先構(gòu)建了miR-4448過表達(dá)和表達(dá)下調(diào)的A549細(xì)胞系。miR-4448過表達(dá)后在RNA和蛋白水平使RRM2表達(dá)下調(diào),與此結(jié)果一致的是,miR-4448表達(dá)下調(diào)后從RNA和蛋白水平使RRM2表達(dá)增加,我們的結(jié)果初步說明了miR-4448與RRM2可能存在調(diào)控關(guān)系。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們的結(jié)論,我們又進(jìn)行了雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明了miR-4448可直接特異性結(jié)合RRM2的3'UTR并在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)RRM2基因的表達(dá)。miRNA-4448表達(dá)下調(diào)后使A549細(xì)胞增殖和克隆形成加快,并且出現(xiàn)了更高的侵襲力,這些結(jié)果表明:miRNA-4448可通過抑制RRM2的表達(dá)抑制肺癌的增殖和轉(zhuǎn)移。肺癌患者中低表達(dá)的miRNA-4448可能與腫瘤的惡性程度和不良的預(yù)后相關(guān)。結(jié)論:miR-4448/RRM2調(diào)控肺腺癌增殖和轉(zhuǎn)移,可能成為肺腺癌診斷的早期診療標(biāo)志物以及新的藥物作用靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R734.2
【部分圖文】：

各樣本RNA量和質(zhì)量結(jié)果見表3.1,滿足測序要求。RNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示RNA分子量主要分布在28S、18S和5S,RNA完整性滿足測序要求(圖3.1)。3.1.2.2 外泌體的提取、分離和鑒定

外泌體鑒定

將全部6例樣本分別與基因芯片進(jìn)行雜交,我們對目前已知的1028個(gè)基因進(jìn)行檢測,檢測芯片圖詳見圖3.3-圖3.8。圖3.4 GSW(metastasis)芯片雜交圖
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 程菊;茅矛;;肺腺癌的驅(qū)動(dòng)基因突變及相應(yīng)的靶向治療[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2016年02期

2 謝正強(qiáng),權(quán)瑞泉,李宏章,匡黎,殷娟,張謙,任志剛;兩種不同方案治療肺腺癌的療效比較[J];鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年05期

3 方喜生;劉國龍;劉霞;;微小RNA在肺腺癌發(fā)生與發(fā)展中的研究進(jìn)展[J];中華診斷學(xué)電子雜志;2014年03期

4 翟偉豐;張衛(wèi)民;丁小云;;HIF-1α表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌術(shù)后生存相關(guān)性研究[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2010年17期

5 曹玉娟;王德林;劉承偉;杜芳;郝龍英;曹鳳;李偉偉;趙聰;;肺腺癌新分類在預(yù)測Ⅰb期非小細(xì)胞肺癌預(yù)后中的價(jià)值[J];腫瘤學(xué)雜志;2014年06期

6 鄭于珠;張西;李浩;;非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后發(fā)生腦轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素分析[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2015年09期

7 劉先本;王淑玲;閆明;陳小兵;張瑞祥;李印;;雄激素和雌激素受體在肺腺癌和肺鱗癌中的表達(dá)[J];江蘇醫(yī)藥;2010年09期

8 段敏丹;陳雪;王悅;蘇雷;史茜;賈友超;霍燃;;微小RNA多態(tài)性和非小細(xì)胞肺癌遺傳易感性關(guān)系研究[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2017年07期

9 陳衛(wèi)松;朱丹;陳慧;駱健峰;楊錫光;徐繼林;王臨英;;厄洛替尼在晚期非小細(xì)胞肺癌中的臨床應(yīng)用分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2013年34期

10 劉微微;賈友超;畢雪冰;王志剛;段敏丹;臧愛民;;微小RNA基因區(qū)域多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌易感性的關(guān)系研究[J];山西醫(yī)藥雜志;2016年14期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 許哲男;外泌體miRNA-4448通過下調(diào)RRM2基因表達(dá)抑制肺癌轉(zhuǎn)移[D];吉林大學(xué);2020年

2 李晨光;非小細(xì)胞肺癌癌基因突變和相關(guān)分子標(biāo)記物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 李凱迪;液體活檢在非小細(xì)胞肺癌中的臨床應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

4 孫正亮;肺腺癌的分子分型特征及其與病理分型的關(guān)聯(lián)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 黃川鋒;miR-326對非小細(xì)胞肺癌增殖、侵襲和凋亡的影響及其調(diào)控CCND1信號通路的研究[D];武漢大學(xué);2018年

7 王梅芳;OCCLUDIN對非小細(xì)胞肺癌SPC-A1細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲遷移的影響及其作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2018年

8 吳葉丹;PolyI:C復(fù)合物在體內(nèi)外對非小細(xì)胞肺癌的抗腫瘤作用及其機(jī)制[D];延邊大學(xué);2019年

9 羅丹;miR-362在非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移中的作用及分子機(jī)制[D];北京交通大學(xué);2019年

10 周瀟殊;阿帕替尼對非小細(xì)胞肺癌氨基酸代謝及免疫微環(huán)境的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王欣;細(xì)胞周期相關(guān)蛋白ZYG11A促進(jìn)肺腺癌惡性進(jìn)展的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

2 謝鈺珍;let-7啟動(dòng)子區(qū)域單核苷酸多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌易感性的相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2014年

3 張春雨;HER2/neu在正常肺組織及肺癌組織中的表達(dá)情況及其意義[D];吉林大學(xué);2006年

4 陳玲玉;探討血漿外泌體miRNA在鑒別診斷小細(xì)胞肺癌與非小細(xì)胞肺癌中的價(jià)值[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

5 唐蜜;mPRα在NSCLC中的表達(dá)及與其臨床病理特征的關(guān)系[D];中南大學(xué);2014年

6 高楚伊;EGFR突變與云南省晚期非小細(xì)胞肺癌治療及預(yù)后相關(guān)性的真實(shí)世界研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2019年

7 顏啟;高原地區(qū)D-二聚體聯(lián)合非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原、鱗癌抗原對肺鱗癌的診斷研究[D];青海大學(xué);2017年

8 陳瑩;肺腺癌癌旁基因組異常情況分析及初步功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

9 趙陽;吉非替尼一線治療和二線治療對非小細(xì)胞肺癌患者臨床療效的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 潘登;136例肺腺癌臨床病例分析研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

本文編號：2893800