Bruton's酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosin Kniase,BTK)抑制劑伊布替尼,因其在B細(xì)胞淋巴瘤中的顯著療效得到越來越廣泛的應(yīng)用。但因伴隨出現(xiàn)房顫(Atrial Fibrillation,AF)甚至室性心律失常(Ventricular arrhythmias,VA)等心臟并發(fā)癥,伊布替尼的應(yīng)用也受到了限制。伊布替尼相關(guān)的心律失常及其相關(guān)機(jī)制成為腫瘤心臟病領(lǐng)域的關(guān)注熱點但少有研究,特別是目前為止尚無關(guān)于此現(xiàn)象的電生理機(jī)制的探究。有許多關(guān)鍵性問題需要解決和回答:1)伊布替尼引起VA僅在少量病例報道及一項回顧性病例分析中報道,伊布替尼是否增加室性心律失常易感性尚無定論;2)年齡和既往存在心臟疾病是伊布替尼相關(guān)房顫的危險因素,伊布替尼相關(guān)VA是否與年齡及既往心臟疾病相關(guān)需要明確;3)細(xì)胞質(zhì)鈣調(diào)異常和膜電生理異常時常見的室性心律失常的相關(guān)機(jī)制,上述指標(biāo)可以通過光學(xué)標(biāo)測(鈣標(biāo)測和電壓標(biāo)測)進(jìn)行分析,伊布替尼用藥是否會導(dǎo)致相關(guān)的電生理異常需要闡明;4)慢性淋巴細(xì)胞白血病(Chronic lymphocytic leukemia,CLL)會導(dǎo)致代謝應(yīng)激狀態(tài),代謝應(yīng)激感受器AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活化,伊布替尼敏感CLL細(xì)胞較伊布替尼抵抗CLL細(xì)胞的AMPK活化減少。AMPK活化受抑制在少數(shù)研究中被證實與心律失常易感性增加相關(guān)。在伊布替尼相關(guān)的VA分子機(jī)制探究中,應(yīng)明確VA是否與其相關(guān)的代謝應(yīng)激(AMPK調(diào)節(jié))相關(guān)。為了回答以上問題,我們開展了如下研究:實驗設(shè)計分別兩部分:1)急性期實驗:麻醉下獲取青年(年齡:10-14周)和老年(年齡:10-14月)自發(fā)高血壓大鼠(Spontaneous hypertensive rats,SHR)心臟,通過Langendorff灌流系統(tǒng)主動脈逆行灌注大鼠心臟,在灌注系統(tǒng)中加入伊布替尼(0.1μM)或溶媒(DMSO),藥物接觸30分鐘。在此期間向灌注系統(tǒng)中加入鈣和電壓敏感熒光染料進(jìn)行標(biāo)記染色。通過大鼠心臟“座椅”連接的起搏裝置,遞增起搏(9.0hz-12.5hz,每0.5hz)SHR心臟30秒,在起搏最后兩秒和起搏停止后兩秒,同時標(biāo)測4秒時間內(nèi)SHR左室心外膜鈣動力學(xué)及動作電位的變化,通過Matlab(MathWorks)制作的自定義程序,選擇并處理來自標(biāo)測區(qū)域的鈣瞬變(Calcium transient)指標(biāo),動作電位電交替及電交替的空間一致性。VA易感性通過猝發(fā)起搏導(dǎo)致心室顫動(Ventricular fibrillation,VF)進(jìn)行評估。猝發(fā)起搏后持續(xù)時間≥10秒的室顫發(fā)作被認(rèn)為是成功誘發(fā)的室顫。通過Western blot分析(1)鈣調(diào)相關(guān)蛋白:RyR2受體在Ser2814和Ser2808兩個位點處的磷酸化;PLB在Thr17和Ser16兩個位點的磷酸化;(2)PI3K-Akt通路;(3)AMPK的磷酸化。2)在體實驗部分:選擇老年Sprague-Dawley(SD)大鼠作為研究對象,選擇伊布替尼10mg/kg/d的劑量(相當(dāng)于臨床治療劑量420mg/d)作為干預(yù)劑量。通過兩周喂藥(對照組(DMSO)和伊布替尼組)和四周喂藥,對獲取的SD大鼠心臟,進(jìn)行遞增刺激(9.0hz-15.0hz,每0.5hz)30秒,然后進(jìn)行鈣標(biāo)測(同上),比較對照組和伊布替尼組的以下指標(biāo)以判斷伊布替尼導(dǎo)致VA的動物模型:(1)遞增起搏后VA的出現(xiàn)頻率和閾值;(2)猝發(fā)起搏后VF的時程,成功誘發(fā)VF(VF≥10秒)的比率,持續(xù)誘發(fā)VF(VF≥60秒)的比率。VF持續(xù)超過60秒則給予3J電除顫。同時再次分析鈣動力學(xué)(分析方法同上)。通過Western blot分析(1)鈣調(diào)相關(guān)蛋白:RyR2受體表達(dá),及在Ser2814和Ser2808兩個位點處的磷酸化;SERCA2a表達(dá);PLB表達(dá),及在Thr17和Ser16兩個位點的磷酸化;(2)PI3K-Akt通路;(3)AMPK的表達(dá)及活化。在急性期實驗中,我們發(fā)現(xiàn)伊布替尼顯著增加了老年SHR對VA的易感性(27.5%vs.5.71%(對照組),p=0.015),但在年輕SHR中,這種增加并沒有統(tǒng)計學(xué)意義(8%vs.0%(對照組),p=0.49)。在老年SHR中,伊布替尼治療后,鈣瞬變持續(xù)時間50(Calcium transient duration 50,CaTD50)延長(p=0.007),鈣瞬變振幅交替比明顯降低(p=0.03),鈣振幅達(dá)到峰值的時間(Time to peak,TTP)縮短(p0.001),上述指標(biāo)的變化提示RyR_2受體鈣釋放速率加快,SERCA2a從細(xì)胞漿攝取Ca~(2+)的能力下降。在青年SHR中,兩組間鈣動力學(xué)相關(guān)指標(biāo)沒有差異。膜電生理相關(guān)指標(biāo)顯示,在老年SHR大鼠中,伊布替尼治療組左室心外膜動作電位持續(xù)時間80(Action potential duration 80,APD_(80))交替(p0.001)和APD交替空間不一致性(p0.001)更明顯,這代表著伊布替尼治療的SHR大鼠會出現(xiàn)左室心外膜除極的空間和時間不一致性增加。但老年SHR大鼠相關(guān)的Western blot結(jié)果顯示,在RyR2受體磷酸化,PLB磷酸化,AMPK激活,PI3K表達(dá),Akt激活上等蛋白表達(dá)及激活上,兩組并無差異,結(jié)合實驗設(shè)計,考慮與藥物接觸時間時間較短,同時伊布替尼對RyR2受體,SERCA2a功能的改變并不是通過磷酸化調(diào)節(jié)的。綜上,急性期的研究表明,伊布替尼的應(yīng)用可增加SHR室性心律失常的可誘發(fā)性,尤其是在老年和合并心肌病變的情況下;鈣調(diào)異常與左室心外膜復(fù)極紊亂是伊布替尼所致的VA易感性增加的電生理機(jī)制。在在體實驗部分,老年SD大鼠10mg/kg/d伊布替尼口服灌胃給藥4周可建立伊布替尼導(dǎo)致室性心律失常的動物模型,10mg/kg/d伊布替尼口服灌胃治療可明顯增加遞增起搏后VA出現(xiàn)比率(15.38%vs 5.77%,p=0.04);同時,伊布替尼組遞增起搏后VA閾值較對照組明顯降低(10.7±0.9 hz vs 13.7±0.5 hz,p=0.02)。猝發(fā)起搏后,在四周喂藥大鼠中,伊布替尼治療組和對照組相比,延長了猝發(fā)起搏后VF總時長(190.3±18.4s vs 82.5±3.9s,p=0.0017);在成功誘發(fā)VF上,伊布替尼組增加了成功誘發(fā)VF的比例(70%vs60%),但該增加無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.48);同時,在持續(xù)VF誘發(fā)上,伊布替尼組較對照組亦增加誘發(fā)成功率(40%vs 10%),且該增加存在統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.004)。同時,對喂藥四周兩組大鼠猝發(fā)起搏后的VF進(jìn)行分類,分為無VF,VF自行終止,VF需除顫治療。猝發(fā)起搏后,伊布替尼治療組與對照組無VF的比例接近(20%vs 15%),但伊布替尼組需除顫的VF較對照組明顯升高(40%vs 10%),自行終止VF較對照組明顯降低(40%vs75%)。在鈣動力學(xué)部分,在伊布替尼治療組中,老年SD的CaTD_(80)延長(p=0.01),鈣瞬變振幅交替比降低(p=0.008)和達(dá)峰時間縮短(p=0.046),而在CaTD50,CaTD50/CaTD80比率和SCaE中未觀察到差異(分別為p=0.76,0.45和0.38)。分子機(jī)制顯示,與對照組相比,伊布替尼組會降低PI3K110α表達(dá)(p=0.01),降低AMPK磷酸化水平(p=0.04),降低Akt磷酸化水平(p=0.05),但對AMPK表達(dá),Akt表達(dá)水平在兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異(p值分別為0.89,0.26)。同樣,兩組間RyR2受體表達(dá)及磷酸化,SERCA2a受體表達(dá)及磷酸化均無明顯變化。在體部分提供了一種伊布替尼致室性心律失常的動物模型;同時驗證了伊布替尼同時影響RyR2肌漿網(wǎng)鈣釋放功能及SERCA2a鈣攝取能力;伊布替尼相關(guān)室性心律失�？赡芘cAMPK的激活受抑制及其相關(guān)的鈣調(diào)異常相關(guān)。結(jié)論:伊布替尼應(yīng)用可增加室性心律失常的可誘發(fā)性,尤其是在老年和合并心肌病變的情況下;鈣調(diào)異常和膜電生理復(fù)極不同步是其重要的電生理機(jī)制;伊布替尼相關(guān)室性心律失�？赡芘cAMPK的激活受抑制及其相關(guān)的鈣調(diào)異常相關(guān)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R541.7
【部分圖文】：
伊布替尼對大鼠心臟的急性作用試驗流程
與對照組相比,伊布替尼治療的老年SHR大鼠在猝發(fā)起搏(50Hz,12V,10sec)時成功誘發(fā)VF(室顫≥10s)的比例顯著增加(27.5%vs.5.7%,p=0.015)。但是,在年輕SHR大鼠中,伊布替尼治療組相對于對照組在成功VF誘發(fā)的升高無統(tǒng)計學(xué)差異(8%vs.0%p=0.49)。(見圖2)。3.3.3 伊布替尼增加老年SHR大鼠左室除極的空間和時間不一致性
左心室APD80交替的空間差異在圖3B和圖4B中顯示。與對照組相比,伊布替尼增加了老年SHR左心室除極的空間不一致。(p<0.001;圖3B)。年輕的SHR的APD80交替空間不一致性在兩組之間沒有差異。(p=0.55;圖4B)圖4.青年SHR中APD80交替和APD交替空間的不一致性
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 李海靜;;琥珀酸美托洛爾緩釋片治療心梗后室性心律失常的臨床效果與價值體會[J];智慧健康;2019年35期
2 盧華安;王韻喃;羅智敏;文翠;;高血壓和高血壓合并室性心律失�；颊叩男穆首儺愋苑治鯷J];中外醫(yī)學(xué)研究;2020年01期
3 歐陽遠(yuǎn)鵬;;冠心病慢性心力衰竭患者室性心律失常的臨床分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2019年08期
4 杜慧鋒;;穩(wěn)心顆粒聯(lián)合美托洛爾治療冠心病合并室性心律失常的療效分析[J];中外醫(yī)療;2019年31期
5 牟燕;;胺碘酮聯(lián)合琥珀酸美托洛爾緩釋片治療室性心律失常的療效研究[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2018年02期
6 關(guān)林;王曄玲;;冠心病慢性心力衰竭患者室性心律失常的療效分析[J];中外女性健康研究;2018年06期
7 胡學(xué)艷;張琳;;冠心病慢性心力衰竭患者室性心律失常的臨床分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2018年14期
8 李俊田;胡旭樺;;冠心病慢性心力衰竭患者室性心律失常的臨床分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2018年22期
9 曹克將;;第六講 室性心律失常專家共識要點解讀[J];中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥;2016年23期
10 李艷;李小榮;;急性冠脈綜合征患者炎性因子水平變化及其與室性心律失常的關(guān)系研究[J];實用心腦肺血管病雜志;2016年12期
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 杜貝貝;淋巴瘤靶向藥物伊布替尼相關(guān)的室性心律失常機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2020年
2 翟正芹;缺血性心臟病室性心律失常器械治療預(yù)后因素及正中神經(jīng)調(diào)控研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2019年
3 馬瑞松;選擇性消融Marshall韌帶減輕犬心肌缺血再灌注室性心律失常和損傷及機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2019年
4 張健;過表達(dá)肝細(xì)胞生長因子骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞對豬心肌梗死后室性心律失常發(fā)生的影響及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年
5 白杰云;面向疾病的CaMKⅡ致室性心律失常建模與仿真研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2017年
6 單亮;室性心律失常發(fā)作規(guī)律的臨床研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年
7 王磊;右美托咪定早期應(yīng)用對犬缺血性室性心律失常的作用[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2019年
8 朱文根;錨蛋白-B基因血影蛋白結(jié)合域變異（p.Q1283H）在室性心律失常中的作用及其機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2019年
9 蔣志新;腎去交感神經(jīng)術(shù)治療室性心律失常[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年
10 朱浩;辛溫通陽法治療心梗后室性心律失常的療效評價及其基于微小RNA的機(jī)制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2018年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 趙若寒;心力衰竭并發(fā)復(fù)雜性室性心律失常相關(guān)因素分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年
2 鄧盛榮;Carto3指導(dǎo)下無射線射頻消融治療特發(fā)性流出道室性心律失常[D];中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué);2018年
3 王博群;NLRP3炎癥小體通過影響心臟Nav1.5通道蛋白增加壓力負(fù)荷性心衰室性心律失常易感性[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年
4 吳亞文;已行導(dǎo)管消融術(shù)的流出道室性心律失常的臨床及電生理學(xué)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年
5 段艷利;已行導(dǎo)管消融術(shù)的非流出道特發(fā)性室性心律失常的臨床及電生理學(xué)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年
6 范鮑函;射頻消融對流出道室性心律失常心功能受損患者左室結(jié)構(gòu)重構(gòu)的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年
7 楊陽;心臟再同步治療術(shù)后左室射血分?jǐn)?shù)改變對室性心律失常的預(yù)測價值[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年
8 孫珂;碎裂QRS波對心臟再同步治療除顫器術(shù)后室性心律失常的預(yù)測價值[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年
9 趙艷鐲;中介素對大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2017年
10 潘林烽;心臟逆重構(gòu)對心臟再同步治療除顫器術(shù)后室性心律失常的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年
本文編號：
2878983
