目的:中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)是一種由ELANE基因編碼的髓性絲氨酸蛋白酶。本研究旨在探討NE在急性早幼粒細(xì)胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)細(xì)胞增殖和分化中的作用、對(duì)APL-NOD/SCID小鼠致病能力的影響及其相關(guān)分子機(jī)制。方法:首先,通過(guò)收集臨床骨髓樣本和分析Blood Spot數(shù)據(jù)庫(kù)中NE m RNA公共微陣列數(shù)據(jù),驗(yàn)證NE在APL患者骨髓和外周血細(xì)胞中的表達(dá)水平。其次,通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)NE的NB4細(xì)胞和敲低NE的U937細(xì)胞,進(jìn)而運(yùn)用CCK-8試驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖和周期分布,運(yùn)用IF、CO-IP和Duolink?PLA熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NE和p200CUX1的共定位和蛋白相互作用,及運(yùn)用q RT-PCR和western blot測(cè)定PCNA、Ki-67、CD11b、C/EBPα、C/EBPβ、Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin A2、P21Waf1/Cip1、P27Kip1等增殖分化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)水平,以探討NE在APL細(xì)胞增殖和分化中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制。最后,構(gòu)建NB4-NE和NB4-NC NOD/SCID小鼠血液瘤模型,通過(guò)觀察其一般狀況、體重變化、生存時(shí)間、骨髓和外周血細(xì)胞形態(tài)、肝脾大小和重量、肝脾白細(xì)胞浸潤(rùn)等指標(biāo),來(lái)評(píng)估NE對(duì)APL-NOD/SCID小鼠模型致病能力的影響。結(jié)果:NE在APL患者骨髓和外周血中性粒細(xì)胞中高表達(dá)。過(guò)表達(dá)NE可以促進(jìn)NB4細(xì)胞的增殖并抑制細(xì)胞分化;相反,在U937細(xì)胞中,敲低NE或使用NE抑制劑可以減緩細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其分化。機(jī)制方面,NE與轉(zhuǎn)錄因子p200CUX1存在空間上的共定位和蛋白相互作用,可在蛋白水平對(duì)其進(jìn)行有效裂解;而過(guò)表達(dá)p200CUX1可在一定程度上逆轉(zhuǎn)NE對(duì)NB4細(xì)胞增殖和分化的影響。另外,NE可增強(qiáng)APL-NOD/SCID小鼠的致病能力,縮短小鼠的生存時(shí)間。結(jié)論:NE通過(guò)裂解轉(zhuǎn)錄因子p200CUX1調(diào)控APL細(xì)胞的增殖與分化,進(jìn)而促進(jìn)該疾病的發(fā)生發(fā)展。NE有望成為APL新的潛在診療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類(lèi)】：R733.71
【部分圖文】：

研究分析了公共微陣列數(shù)據(jù)集中所包含的87例APL、540例M2 AML、23例ALL患者的骨髓或外周血樣本和12例人正常HSCs中NE mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與M2 AML、ALL患者和正常HSCs相比,NE在APL患者骨髓和外周血細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1.1)。2.1.2 NE在APL患者骨髓中性粒細(xì)胞中高表達(dá)

為探討NE在APL中的蛋白表達(dá)水平,我們收集了2例APL、1例M2 AML患者和1例健康對(duì)照者的骨髓樣本(病例信息見(jiàn)表1.9),分離中性粒細(xì)胞后,運(yùn)用western blot技術(shù)檢測(cè)其N(xiāo)E蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示,相比于健康對(duì)照者,來(lái)源于APL和M2 AML患者的骨髓中性粒細(xì)胞中NE表達(dá)顯著升高。其中,APL患者骨髓中性粒細(xì)胞中NE表達(dá)升高程度較M2 AML患者更為明顯(圖1.2)。2.2 NE在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)

我們運(yùn)用qRT-PCR和western blot檢測(cè)人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4、HL-60和人白血病細(xì)胞株U937中NE的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與健康對(duì)照者骨髓中性粒細(xì)胞相比,HL-60和U937細(xì)胞中NE表達(dá)水平相對(duì)較高,而NB4細(xì)胞中幾乎沒(méi)有NE蛋白表達(dá)(圖1.3)。2.3過(guò)表達(dá)NE促進(jìn)NB4細(xì)胞增殖并抑制細(xì)胞分化
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張欣;于亮;;NOD/SCID小鼠-白血病模型在白血病研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];臨床血液學(xué)雜志;2015年03期

2 于文俊;楊文華;史哲新;楊向東;王慧娟;;NOD/SCID小鼠模型在實(shí)驗(yàn)血液學(xué)研究中的應(yīng)用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2008年05期

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本文編號(hào)：2876210