本文關(guān)鍵詞：趨化因子CXCL16對(duì)霍奇金淋巴瘤HRS細(xì)胞及其背景Treg細(xì)胞的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma, H L)是西方人群常見的淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤,大約占其惡性淋巴瘤11%左右。近年來HL發(fā)病率在我國(guó)亦有上升趨勢(shì)。臨床上,HL具有較好的預(yù)后。經(jīng)過早期診斷和規(guī)范化治療,大多數(shù)HL患者可以達(dá)到臨床痊愈,但仍有兩成患者最終死于腫瘤復(fù)發(fā)或者進(jìn)展。組織學(xué)上,HL被分為經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(Classical Hodgkin lymphoma, CHL)和結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型霍奇金淋巴瘤(nodular lymphocyte predominant Hodgkin lymphoma, NLPHL),其中CHL占HL絕大多數(shù)(95%左右),又分為4個(gè)亞型：結(jié)節(jié)硬化型、混合細(xì)胞型、淋巴細(xì)胞豐富型和淋巴細(xì)胞消減型。HL具有相當(dāng)獨(dú)特的病理形態(tài)學(xué)特征,即腫瘤的惡性成分即診斷性腫瘤細(xì)胞霍奇金/里-斯(Hodgkin/Reed-Sternberg, HRS)細(xì)胞僅占腫瘤組織的極少部分(1%),絕大部分為大量非腫瘤性的炎性背景,包括T、B淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。因此,研究HL既要注意腫瘤性HRS細(xì)胞,也要關(guān)注背景免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子構(gòu)成的微環(huán)境。腫瘤微環(huán)境形成對(duì)HL至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn),HRS細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子/趨化因子,通過自分泌形式作用于自身表面受體,或者以旁分泌形式吸引和調(diào)節(jié)背景基質(zhì)細(xì)胞。而其周圍的背景炎性細(xì)胞也分泌大量細(xì)胞因子/趨化因子,反作用于HRS細(xì)胞。二者相互作用,形成“對(duì)話”,構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò),共同維系HRS細(xì)胞的存活、增殖、抗凋亡、遷移以及逃避宿主免疫。HL背景細(xì)胞大部分為CD4+T細(xì)胞,其中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T regulatory,Treg)作用引人關(guān)注。Treg細(xì)胞可抑制細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(cytotoxic 1ymphocyte,CTL)活性,發(fā)揮免疫抑制功能,協(xié)助HRS細(xì)胞完成免疫逃避。HRS細(xì)胞可通過釋放某些細(xì)胞因子/趨化因子將Treg細(xì)胞吸引到自身周圍并維持其生存及活化。為了探討HL微環(huán)境形成及相關(guān)細(xì)胞因子/趨化因子在其中的作用,本課題組前期利用GeneSifter在線軟件和BRB-ArrayTools分析平臺(tái)對(duì)公共基因芯片數(shù)據(jù)庫GEO(Gene Expression Omnibus)中的CHL病變組織分離的HRS細(xì)胞、CHL細(xì)胞株(L428)、Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株(Raji)以及彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)病人腫瘤組織的基因芯片表達(dá)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了已闡明的CCL5、CCL22、CCL17、SISd和IL-6等因子以外,新型趨化因子CXCL16及其受體CXCR6也與HL關(guān)系密切。進(jìn)一步比較CXCL16/CXCR6在CHL和DLBCL中表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)二者表達(dá)在CHL中均明顯高于DLBCL:利用基因沉默技術(shù)建立鼠源性類人霍奇金淋巴瘤模型,其中CXCL16表達(dá)明顯上調(diào)。CXCL16及其受體CXCR6在人霍奇金淋巴瘤的表達(dá)和作用究竟如何?這引起了我們的研究興趣。CXCL16是新近發(fā)現(xiàn)的趨化因子,屬于CXC家族,具有膜結(jié)合型(TM-CXCL16)和分泌型(sCXCL6)兩種存在形式。CXCL16主要表達(dá)于Th1細(xì)胞、NK細(xì)胞以及激活的CD8+T細(xì)胞以及抗原遞呈細(xì)胞(antigen-presenting cell,APC)和巨噬細(xì)胞等,其受體CXCR6則表達(dá)于未分化CD8+T細(xì)胞、自然殺傷T(natural killer T, NKT)細(xì)胞.CD4+和CD8+T細(xì)胞等.CXCL16/CXCR6參與了細(xì)胞免疫應(yīng)答、細(xì)胞粘附、抗原遞呈、炎癥反應(yīng)以及胸腺T細(xì)胞發(fā)育等。關(guān)于CXCL16的早期報(bào)道多集中在炎癥及免疫相關(guān)疾病中,研究顯示CXCL16在諸如動(dòng)脈粥樣硬化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎、肺炎、腎炎以及HIV感染中均扮演了重要作用。近年來,CXCL16及其受體CXCR6在腫瘤中的作用引起研究者密切關(guān)注。CXCL16/CXCR6在多種惡性腫瘤中高表達(dá),如結(jié)直腸癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腎癌等。報(bào)道顯示在多數(shù)腫瘤中CXCL16表達(dá)可促進(jìn)其生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),但在有些腫瘤中作用卻相反。此外,CXCL16/CXCR6還可通過誘導(dǎo)CD4+/CD8+T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞參與抗腫瘤免疫以及腫瘤微環(huán)境的形成。雖然CXCL16及其受體CXCR6作為一對(duì)趨化因子軸常見表達(dá)于免疫細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等,但其在淋巴造血系統(tǒng)腫瘤中卻少見研究。Hanamoto等最早在分析HL中趨化因子表達(dá)情況時(shí)注意到HL來源細(xì)胞株中存在一定程度CXCL16的表達(dá),但未能深入研究這種表達(dá)的實(shí)際意義。Darash-Yahana在一項(xiàng)炎癥相關(guān)腫瘤研究中檢測(cè)了28例淋巴瘤組織中CXCL16的表達(dá)情況,其中25%存在CXCL16高表達(dá),但并未提及所研究淋巴瘤組織類型以及這種表達(dá)的意義。Deutsch等則注意到CXCL16/CXCR6在淋巴瘤惡性轉(zhuǎn)化中的作用,即胃粘膜相關(guān)淋巴瘤(MALT)向彌漫大B淋巴瘤轉(zhuǎn)化過程中常伴隨著CXCR6等趨化因子受體表達(dá)的上調(diào)。我們前期運(yùn)用熒光定量PCR、免疫印跡、免疫熒光共聚焦以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)了9株淋巴瘤細(xì)胞株(7株B細(xì)胞來源,2株T細(xì)胞來源)中CXCL16/CXCR6基因和蛋白表達(dá)情況,以分析不同來源淋巴瘤細(xì)胞株中CXCL16/CXCR6表達(dá)差異,結(jié)果顯示CXCL16/CXCR6在淋巴瘤細(xì)胞株廣泛表達(dá),但不同來源細(xì)胞株中其表達(dá)水平存在差異,在HL細(xì)胞株L428以及某些NHL細(xì)胞株(如RPMI-8226、KM3和Jurkat細(xì)胞)CXCL16表達(dá)相對(duì)較高。細(xì)胞株是體外條件下培養(yǎng)的單純腫瘤細(xì)胞,缺乏微環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)和宿主免疫等影響,與體內(nèi)腫瘤還存在較大區(qū)別。那么,CXCL16/CXCR6在淋巴瘤特別是HL體內(nèi)腫瘤組織中的表達(dá)情況又是怎樣?其表達(dá)的臨床意義如何?CXCL16表達(dá)對(duì)于HL腫瘤性HRS細(xì)胞及其背景細(xì)胞的各有何種意義。這些均有待于進(jìn)一步研究。H/RS細(xì)胞表型的形成與CD99基因低表達(dá)以及NF-κB信號(hào)通路持續(xù)活化相關(guān)。我們前期研究觀察了HL中CXCL16表達(dá)與CD99表達(dá)相關(guān)性以及其與NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)在L428細(xì)胞CXCL16表達(dá)與CD99表達(dá)相反,與NF-κB信號(hào)通路活化相關(guān)。P13K/AKT信號(hào)通路是HL又一重要的信號(hào)通路。P13K持續(xù)激活后可通過下游AKT和mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)HL腫瘤細(xì)胞增殖和遷徙。有研究顯示CXCL16可激活平滑肌細(xì)胞P13K/AKT及NF-κB信號(hào)通路,促進(jìn)其增殖及細(xì)胞間粘附。在腫瘤,比如前列腺癌和肝癌中,CXCL16同樣可通過激活P13K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)其臨床進(jìn)展。那么在HL中,CXCL16表達(dá)與這兩條通路關(guān)系如何,是不是通過這二者在起作用呢?鑒于此,CXCL16及其受體CXCR6在淋巴瘤特別是HL中的表達(dá)、意義及其分子機(jī)制即是本研究的目的所在。研究目的1.檢測(cè)CXCL16在淋巴瘤特別是HL組織標(biāo)本中的表達(dá)情況及其臨床意義,延伸和完善課題組前期研究；2.研究CXCL16表達(dá)對(duì)HRS細(xì)胞增殖能力、遷移能力、細(xì)胞周期、凋亡以及免疫表型等生物學(xué)特性的影響,分析CXCL16在HL發(fā)生發(fā)展中的作用；3.研究CXCL16表達(dá)對(duì)HL背景Treg細(xì)胞的趨化及增殖能力的影響,觀察體外共培養(yǎng)條件下Treg細(xì)胞與L428細(xì)胞相互作用,分析CXCL16在HL微環(huán)境形成中可能的作用；4.觀察HL腫瘤組織和細(xì)胞中P13K/AKT/mTOR信號(hào)通路及NF-κB信號(hào)通路激活情況及其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響,探討CXCL16表達(dá)對(duì)上述信號(hào)通路的影響,分析CXCLl6對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制。研究方法1.CXCL16/CXCR6在淋巴瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)選擇70例淋巴瘤(其中45例HL)組織標(biāo)本,通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CXCL16及其受體CXCR6蛋白表達(dá)情況,并結(jié)合相關(guān)臨床病理資料,分析其臨床意義；選擇4株淋巴瘤細(xì)胞,通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞蠟塊中CXCL16/CXCR6蛋白表達(dá)情況,IPP6.0軟件分析陽性細(xì)胞光密度值,并與組織中的表達(dá)進(jìn)行對(duì)比分析。延伸和完善課題組前期研究。2.CXC16表達(dá)對(duì)HRS細(xì)胞的作用利用慢病毒轉(zhuǎn)染建立過表達(dá)CXCL16的L428細(xì)胞亞系,并通過外源性添加重組可溶性CXCL16 (sCXCL16)蛋白以及CXCR6抗體分別上調(diào)或阻斷CXCL16的表達(dá),再通過CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、PI-Annexin V凋亡檢測(cè)及流式細(xì)胞術(shù)等方法,檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖能力、遷移能力以及細(xì)胞周期、凋亡和免疫表型等細(xì)胞生物學(xué)特性改變。探討CXCL16表達(dá)對(duì)HRS細(xì)胞的作用。3.CXC16表達(dá)對(duì)HL微環(huán)境形成的影響免疫磁珠法從健康人外周血分離CD4+CD25+Treg細(xì)胞,通過Transwell和CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CXCL16對(duì)Treg細(xì)胞體外趨化和增殖能力的影響,并觀察共培養(yǎng)條件下L428細(xì)胞和Treg細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變以及各自增殖能力變化。探討CXCL16表達(dá)對(duì)HL微環(huán)境形成的影響。4. CXCL16對(duì)HL腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制首先通過免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot等方法檢測(cè)HL組織和細(xì)胞株中PI3K/AKT/mTOR 和 NF-κB信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白AKT、P70S6和IκB磷酸化水平；再觀察不同CXCL16表達(dá)水平時(shí)上述通路活化情況,分析CXCL16表達(dá)對(duì)上述通路的影響；最后觀察單獨(dú)添加P13K抑制劑LY294002以及聯(lián)合添加LY294002和sCXCL16對(duì)L428細(xì)胞增殖和遷移能力影響。結(jié)果1. CXCL16/CXCR6在淋巴瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)(1)淋巴瘤組織中,CXCL16蛋白表達(dá)在CHL組要高于NHL組(Z=-2.550,P=0.011)；在CHL組,CXCL16的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)(Z=-3.327,P=0.001),與性別(Z=-0.038,P=0.970)、年齡(Hc=0.092,P=0.955)、組織學(xué)亞型(Hc=1.802,P=0.614)無關(guān)；(2)淋巴瘤組織中,CXCR6的表達(dá)在CHL組和NHL組無顯著差異(Z=-1.850,P=0.064)；在CHL組,CXCR6的表達(dá)與腫瘤大小(Z=-1.841,P=0.066)、性別(Z=-0.275,P=0.784)、年齡(Hc=0.894,P==0.640)及組織學(xué)亞型(Hc=1.114,P=0.774)等臨床病理特征均無顯著相關(guān)；(3)CXCL16在各淋巴瘤細(xì)胞株間表達(dá)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05),其中L428的表達(dá)最高,其次是Karpass299、Raji和OCI-Ly10；CXCR6在各淋巴瘤細(xì)胞株間表達(dá)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05),L428的表達(dá)最低,其次是Raji、Ly10、和Karpass299；(4)在淋巴瘤組織中,CXCL16與CXCR6蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.411,P=0.000),但在淋巴瘤細(xì)胞株中二者表達(dá)卻存在負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.764,P=0.000)。2.CXC16表達(dá)對(duì)HRS細(xì)胞的作用(1)慢病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)CXCL16的L428細(xì)胞亞系構(gòu)建及鑒定構(gòu)建CXCL16過表達(dá)慢病毒載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染L428細(xì)胞。觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,倒置熒光顯微鏡觀察GFP表達(dá)證實(shí)轉(zhuǎn)染成功。熒光定量PCR檢測(cè)證實(shí)轉(zhuǎn)染亞系CXCL16基因表達(dá)上調(diào),免疫印跡檢測(cè)證實(shí)轉(zhuǎn)染亞系CXCL16總蛋白表達(dá)上調(diào),ELISA檢測(cè)證實(shí)轉(zhuǎn)染亞系細(xì)胞外分泌CXCL16增高；(2)不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞增殖能力CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示,除第一天外,其余天各處理組細(xì)胞間增殖差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。內(nèi)源性高表達(dá)CXCL16和外源性添加shCXCL16均能有效刺激L428細(xì)胞增殖(P0.05),但這兩種處理因素之間的刺激作用則差別不明顯(P0.05),添加外源性CXCL16受體抗體能降低L428體外增殖能力(P0.05)；(3)不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞遷移能力Transwell法檢測(cè)結(jié)果顯示,內(nèi)源性高表達(dá)CXCL16和外源性添加sCXCL16均能有效促進(jìn)L428細(xì)胞遷移(P0.05),但這兩種處理因素之間的刺激作用則差別不明顯(P0.05)；而添加外源性CXCL16受體抗體能降低L428遷移能力(P0.05)；穿膜后細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)觀察證實(shí)L428中大細(xì)胞可由中等大小細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來；(4)不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞周期變化流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,L428細(xì)胞與三個(gè)處理組細(xì)胞周期均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.001)。內(nèi)源性過表達(dá)CXCL16和外源性添加sCXCL16均可使G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯減少,相應(yīng)處于S期和G2/M期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯升高(P0.05),兩個(gè)處理組間各個(gè)周期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)則未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；而外源性添加CXCL16受體抗體則可使處于G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯升高,S期和G2/M期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)則明顯降低(P0.05)；(5)不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞凋亡變化流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示各處理組L428細(xì)胞凋亡率(%)如下：L428裸細(xì)胞組為5.69±0.32,L428-CXCL16+組為244±0.41,L428-sCXCL16組為2.37±0.37,L428-anti-CXCR6組為11.62±0.83。L428細(xì)胞組與三個(gè)處理組細(xì)胞凋亡均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05),內(nèi)源性過表達(dá)CXCL16和外源性添加sCXCL16均可降低L428細(xì)胞凋亡(P0.05),兩個(gè)處理組間各個(gè)周期則未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；而外源性添加CXCL16受體抗體則促進(jìn)L428細(xì)胞凋亡(P0.05)；(6)不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞免疫表型變化流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示不同CXCL16表達(dá)水平下L428細(xì)胞表面HRS細(xì)胞標(biāo)記抗原CD15.CD30以及B細(xì)胞標(biāo)記抗原CD19和CD20的陽性表達(dá)率未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。3.CXC16表達(dá)對(duì)HL微環(huán)境形成的影響(1)添加不同濃度sCXCL16實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組下室Treg細(xì)胞OD值均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)；不同濃度sCXCL16實(shí)驗(yàn)組間下室Treg細(xì)胞OD值也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05),提示sCXCL16對(duì)Treg細(xì)胞具有趨化作用,其趨化能力隨著濃度增加而相應(yīng)增加；(2)L428細(xì)胞和Treg細(xì)胞共培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察：L428細(xì)胞成團(tuán)性增加,細(xì)胞體積增大,形態(tài)學(xué)出現(xiàn)橢圓形、短梭形甚至折角樣形態(tài)改變；而Treg淋巴細(xì)胞在形態(tài)和數(shù)量變化并不明顯,但生存時(shí)間延長(zhǎng)；(3)CCK-8法檢測(cè)共培養(yǎng)對(duì)L428細(xì)胞和Treg細(xì)胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)時(shí)可分別促進(jìn)二者體外增殖能力(均P0.05)：(4)CCK-8法檢測(cè)重組人IL-3對(duì)L428細(xì)胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)rIL-3可促進(jìn)L428細(xì)胞體外增殖,而且濃度越高其促增殖能力越強(qiáng)(均P0.05)。4. CXCL16對(duì)HL腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制(1)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HL組織標(biāo)本中AKT、pAKT、P70S6、pP70S6、pIκB蛋白表達(dá)情況,顯示在HL組織標(biāo)本中可檢測(cè)到AKT/mTOR 及 NF-κB信號(hào)通路存在不同程度的磷酸化水平,其中AKT和IκB磷酸化水平較弱,而P70S6磷酸化水平較強(qiáng)；(2)免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)HL細(xì)胞株L428中AKT、pAKT、P70S6、pP70S6、 pIκB蛋白表達(dá)情況,顯示在HL細(xì)胞中AKT/mTOR及NF-κB信號(hào)通路存在不同程度的磷酸化水平,其中P70S6和IκB磷酸化水平較弱,而AKT磷酸化水平較強(qiáng)；(3)免疫印跡法檢測(cè)CXCL16不同表達(dá)水平下L428細(xì)胞AKT/mTOR及NF-κB信號(hào)通路磷酸化水平,結(jié)果顯示外源性和內(nèi)源性CXCL16表達(dá)上升均可提高AKT、P70S6及IκB蛋白磷酸化水平,而中和性CXCL16抗體和CXCR6抗體則可以降低上述通路的磷酸化水平。提示CXCL16可激活L428細(xì)胞AKT/mTOR及NF-κB信號(hào)通路。(4)免疫印跡法檢測(cè)外源性SCXCL16對(duì)L428細(xì)胞AKT/mTO R通路和NF-κB通路磷酸化水平作用與刺激時(shí)間的關(guān)系,結(jié)果顯示AKT/mTO R通路磷酸化水平在刺激45分鐘即達(dá)到峰值,而NF-KB通路磷酸化水平峰值則在刺激60分鐘以后；(5)PI3K抑制劑LY294002對(duì)L428細(xì)胞的影響。外源性添加LY294002可抑制L428細(xì)胞體外增殖和遷移能力,且抑制效果與濃度有關(guān),濃度越高抑制越強(qiáng)；當(dāng)sCXCL16與LY294002聯(lián)合使用時(shí),LY294002可抑制sCXCL16對(duì)L428細(xì)胞促進(jìn)體外增殖和遷移的作用,提示CXCL16對(duì)L428細(xì)胞的作用可能是通過PI3K/AKT通路起作用。結(jié)論1.CXCL16及其受體CXCR6在淋巴瘤中廣泛表達(dá),HL組織中CXCL16相對(duì)高表達(dá),其表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)；2.CXCL16可促進(jìn)L428細(xì)胞體外增殖及遷移能力,抑制其凋亡,并增加S期和G2/M期細(xì)胞比率,但對(duì)L428細(xì)胞免疫表型無顯著影響；3. CXCL16可體外趨化Treg細(xì)胞,共培養(yǎng)的Treg細(xì)胞和L428細(xì)胞可促進(jìn)彼此增殖；4. CXCL16可能通過激活PI3K/AKT/mTOR及NF-κB信號(hào)通路影響L428細(xì)胞生物學(xué)特性。創(chuàng)新之處1.本研究首次系統(tǒng)探究了趨化因子CXCL16及其受體CXCR6在淋巴瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況,并特別分析了其表達(dá)在HL的臨床意義,為深入探索HL細(xì)胞因子/趨化因子網(wǎng)絡(luò)奠定了基礎(chǔ)；2.本研究通過內(nèi)源性及外源性調(diào)控CXCL16在L428中的表達(dá),系統(tǒng)分析了CXCL16對(duì)HRS細(xì)胞的作用及其涉及的胞內(nèi)信號(hào)通路,為深入探索HRS細(xì)胞分子網(wǎng)絡(luò)提供了線索,也為HL生物治療提供了潛在靶點(diǎn)；3.本研究通過體外模擬HRS細(xì)胞微環(huán)境,初步探究了CXCL16對(duì)于HL最重要的背景Treg細(xì)胞的作用以及L428細(xì)胞細(xì)胞與Treg細(xì)胞的相互作用,為闡明HL微環(huán)境形成提供了線索,也為HL免疫治療提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：霍奇金淋巴瘤 人HL細(xì)胞株L428 霍奇金/里-斯細(xì)胞 CXC型趨化因子配體16 CXC型趨化因子受體6 微環(huán)境 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.1
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-27
• 前言27-48
• 一、霍奇金淋巴瘤及其腫瘤微環(huán)境27-29
• 二、趨化因子CXCL16及其受體CXCR629-36
• 三、PI3K/AKT/mTOR及NF-κB信號(hào)通路與霍奇金淋巴瘤36-40
• 參考文獻(xiàn)40-48
• 技術(shù)路線48-50
• 第一章 CXCL16/CXCR6在淋巴瘤組織及細(xì)胞株中的表達(dá)檢測(cè)50-69
• 一、材料和方法50-53
• 二、結(jié)果53-62
• 三、討論62-64
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 第二章 CXCL16表達(dá)對(duì)霍奇金淋巴瘤HRS細(xì)胞的影響69-108
• 一、材料和方法69-83
• 二、結(jié)果83-102
• 三、討論102-105
• 參考文獻(xiàn)105-108
• 第三章 CXCL16對(duì)霍奇金淋巴瘤背景Treg淋巴細(xì)胞的影響108-129
• 一、材料和方法108-113
• 二、結(jié)果113-123
• 四、討論123-125
• 參考文獻(xiàn)125-129
• 第四章 CXCL16表達(dá)與L428細(xì)胞PI3K/AKT/mTOR和NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系129-150
• 一、材料和方法129-132
• 二、結(jié)果132-144
• 三、討論144-146
• 參考文獻(xiàn)146-150
• 英文縮略詞表150-152
• 全文小結(jié)152-155
• 附錄155-173
• 附錄一、人類趨化因子及其受體家族155-158
• 附錄二：綜述158-173
• 參考文獻(xiàn)165-173
• 攻讀學(xué)位期間研究成果173-175
• 致謝175-178
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)證明178

  本文關(guān)鍵詞：趨化因子CXCL16對(duì)霍奇金淋巴瘤HRS細(xì)胞及其背景Treg細(xì)胞的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：281785